Name: calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am
Uploaded: 2009-01-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM at JoVE.com

<p class="jove_title"> Cultura de células </p><p class="jove_content"> As células podem ser cultivadas usando técnicas estabelecidas, mas devem ser semeadas em # 1 lamínulas de vidro revestidas com uma cola celulares (como polilisina, polyornithine ou laminina) para evitar que as células de separar ou em movimento durante as experiências de imagem. </p><p class="jove_title"> Soluções </p><p class="jove_content"> Experimentos com imagens de cálcio pode ser realizada utilizando uma variedade de soluções fisiológicas, incluindo meios d...

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	<li>Grynkiewicz, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> <em style='font-style: italic'>J. Biol. Chem</em>. <b>260</b>, 3440-3450 (1985).</li><li>Lewis, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogen-induced+oscillations+of+cytosolic+Ca2++and+transmembrane+Ca2++current+in+human+leukemic+T+cells.">Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Regul</em>. <b>1</b>, 99-112 (1989).</li><li>Dolmetsch, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+between+intracellular+Ca2++stores+and+depletion-activated+Ca2++channels+generates+[Ca2+]i+oscillations+in+T+lymphocytes.">Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes.</a> <em style='font-style: italic'>J Gen Physiol</em>. <b>103</b>, 365-388 (1994).</li></ol>

<p> Nesta apresentação nós passamos por todas as etapas para a realização de imagens de cálcio usando Fura-2 AM. Usamos neurônios corticais como um modelo, mas imagens de cálcio pode ser usado para medir a concentração de cálcio intracelular em tempo real em uma variedade de células. Ao fazer este procedimento é importante o uso de lamínulas de vidro em vez de plástico, uma vez que o plástico é muitas vezes fluorescentes em comprimentos de onda ultravioleta, o que torna difícil de imagem. Além disso, é importante para o reve...

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		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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		<tbody>
		
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<td>New Item</td>
<td>Fura-2 AM</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F1221</td>
<td>Protect from light</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>DMSO</td>
<td>EM Science</td>
<td>MX1457-6</td>
<td>Keep in dry place to prevent hydration</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Albumin from bovine serum</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8022-100G</td>
<td>Store at 4&#176;</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Imaging Chamber</td>
<td>Warner Instruments</td>
<td>Model RC-20H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Microscope</td>
<td>Nikon</td>
<td>Eclipse TE2000-U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Potassium chloride</td>
<td>SIGMA</td>
<td>P9333-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Calibration Kit</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>F6774</td>
<td>Protect from light</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am

<p class="jove_content">Imagem de cálcio é uma técnica comum, que é útil para medir sinais de cálcio em células em cultura. Técnicas de imagem de cálcio tirar proveito de corantes de cálcio indicador, que são baseados em BAPTA moléculas orgânicas que alterar as suas propriedades espectrais, em resposta à ligação de íons Ca2 +. Corantes indicador de cálcio caem em duas categorias, relação de métricas corantes como Fura-2 e Indo-1 e um único comprimento de onda corantes como Fluo-4. Relação de métricas corantes mudar tanto sua excitação ou seus espectros de emissão em resposta ao cálcio, permitindo a concentração de cálcio intracelular para ser determinada a partir da proporção de emissão de fluorescência ou excitação em comprimentos de onda distintos. A principal vantagem do uso de relação de métricas corantes mais sondas único comprimento de onda é que o sinal relação é independente da concentração de corante, a intensidade da iluminação, e comprimento do percurso óptico permitindo que a concentração de cálcio intracelular a ser determinada independentemente de esses artefatos. Um dos indicadores de cálcio mais comum é o Fura-2, que tem um pico de emissão em 505 nm e muda o seu pico de excitação de 340 nm até 380 nm, em resposta ao cálcio vinculativo. Aqui nós descrevemos o uso de Fura-2 para medir a elevação de cálcio intracelular em neurônios e outras células excitáveis.</p>

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Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

<p class="jove_content">Sinais de cálcio desempenham um papel fundamental em muitos processos celulares, incluindo a sobrevivência de expressão gênica e diferenciação. Aqui demonstramos como realizar imagens de cálcio usando Fura-2 AM. Imagem de cálcio é uma ferramenta valiosa para estudar a regulação do cálcio intracelular em tempo real e de sua regulamentação de cascatas de sinalização.</p>

Imagem de cálcio dos neurônios corticais usando Fura-02:00

Calcium imaging is a common technique that is useful for measuring calcium signals in cultured cells. Calcium imaging techniques take advantage of calcium ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Preparando E18 neurônios de rato para Cortical Compartimentação em um dispositivo micro

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

Biologia

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

Vivo em 2-Photon Imagens de cálcio na camada 2 / 3 dos Ratos

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

Imagens ao vivo de vesículas com núcleo denso na Primária Cultivadas neurônios do hipocampo

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

<em>In vivo</em> Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

<em>Em</em> Imaging <em>vivo</em> do Deep camadas corticais usando um Microprisma

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Mudanças Dinâmicas de monitoramento dos níveis de cálcio mitocondrial durante a apoptose através de um sensor de cálcio geneticamente codificado

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Fluorescência baseada em Medição da loja operada entrada de cálcio em células vivas: a partir de células cancerosas cultivadas em fibra muscular esquelética

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

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Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading TED

Imagem direta de cálcio ER com Targeted-Esterase Induzida Dye Loading (TED)

Visualization of calcium dynamics is important to understand the role of calcium in cell physiology. To examine calcium dynamics, synthetic fluorescent ...

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

Medição das flutuações cálcio dentro do Sarcoplasmic retículo de células musculares lisas cultivadas utilizando FRET baseado em imagem confocal

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

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EEG simultâneo e gravação de ressonância funcional e análise de integração para a imagem latente de atividade Cortical dinâmica

Electroencephalography (EEG) and functional magnetic resonance imaging (fMRI) are two of the fundamental noninvasive methods for identifying brain ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

Análise da função de células Beta utilizando imagens de cálcio de célula única resolução em ilhotas de Zebrafish

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...