Name: calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am
Uploaded: 2009-01-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM at JoVE.com

<p class="jove_title"> Cultivo de células </p><p class="jove_content"> Las células pueden ser cultivadas mediante técnicas establecidas, pero debe ser chapada en # 1 cubreobjetos de vidrio recubierto con un adhesivo celular (como polilisina, poliornitina o laminina) para evitar que las células se desprenda o en movimiento durante los experimentos de imagen. </p><p class="jove_title"> Soluciones </p><p class="jove_content"> Experimentos de imagen de calcio se puede realizar utilizando una variedad de soluciones fisiológicas incluyendo medio...

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	<li>Grynkiewicz, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> <em style='font-style: italic'>J. Biol. Chem</em>. <b>260</b>, 3440-3450 (1985).</li><li>Lewis, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogen-induced+oscillations+of+cytosolic+Ca2++and+transmembrane+Ca2++current+in+human+leukemic+T+cells.">Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Regul</em>. <b>1</b>, 99-112 (1989).</li><li>Dolmetsch, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+between+intracellular+Ca2++stores+and+depletion-activated+Ca2++channels+generates+[Ca2+]i+oscillations+in+T+lymphocytes.">Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes.</a> <em style='font-style: italic'>J Gen Physiol</em>. <b>103</b>, 365-388 (1994).</li></ol>

<p> En esta presentación, hemos pasado por todos los pasos para la realización de imágenes de calcio con Fura-2 AM. Hemos utilizado las neuronas corticales como modelo, pero las imágenes de calcio puede ser usado para medir el calcio intracelular en tiempo real en una variedad de células. Cuando se realiza este procedimiento, es importante utilizar cubreobjetos de vidrio en lugar de plástico, ya que el plástico es a menudo fluorescente en longitudes de onda ultravioleta, lo que hace difícil de imágenes. Además, es importante que antes...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Fura-2 AM</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F1221</td>
<td>Protect from light</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>DMSO</td>
<td>EM Science</td>
<td>MX1457-6</td>
<td>Keep in dry place to prevent hydration</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Albumin from bovine serum</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8022-100G</td>
<td>Store at 4&#176;</td>
</tr>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Imaging Chamber</td>
<td>Warner Instruments</td>
<td>Model RC-20H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Microscope</td>
<td>Nikon</td>
<td>Eclipse TE2000-U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Potassium chloride</td>
<td>SIGMA</td>
<td>P9333-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>Calibration Kit</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>F6774</td>
<td>Protect from light</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am

<p class="jove_content">Imágenes de calcio es una técnica común que es útil para medir las señales de calcio en las células cultivadas. Técnicas de imagen de calcio aprovechar de tintes indicadores de calcio, que son BAPTA basado en moléculas orgánicas que cambian sus propiedades espectrales en respuesta a la unión de los iones Ca2 +. Tintes de calcio indicador se dividen en dos categorías, métricas relación-a colorantes como la Fura-2 y el Indo-1 y de una sola longitud de onda de colorantes como la Fluo-4. Métricas relación de colorantes o bien cambiar su excitación o de sus espectros de emisión en respuesta al calcio, lo que permite la concentración de calcio intracelular que se determina a partir de la proporción de emisión de fluorescencia o de excitación a longitudes de onda distintas. La principal ventaja de utilizar métricas relación de tintes más sondas sola longitud de onda es que la señal de relación es independiente de la concentración de colorante, la intensidad de iluminación, y la longitud del camino óptico que permite la concentración de calcio intracelular que se determinará de manera independiente de estos artefactos. Uno de los indicadores de calcio más común es la Fura-2, que tiene un pico de emisión a 505 nm y los cambios de su nivel máximo de excitación de 340 nm a 380 nm en respuesta al calcio. A continuación se describe el uso de la Fura-2 para medir las elevaciones de calcio intracelular en las neuronas y otras células excitables.</p>

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Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

<p class="jove_content">Señales de calcio juegan un papel clave en muchos procesos celulares, incluyendo la expresión génica, la supervivencia y la diferenciación. Aquí se demuestra cómo realizar imágenes de calcio con Fura-2 AM. Imágenes de calcio es una herramienta valiosa para estudiar la regulación del calcio intracelular en tiempo real y su regulación de cascadas de señalización.</p>

Imagen de calcio de las neuronas corticales con Fura-2 a.m.

Calcium imaging is a common technique that is useful for measuring calcium signals in cultured cells. Calcium imaging techniques take advantage of calcium ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Preparación de neuronas de rata E18 cortical de compartimentación en un dispositivo de microfluidos

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

Investigación

Biología

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En Vivo 2-Photon imágenes de calcio en la capa 2 / 3 de los ratones

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

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Imágenes en vivo del denso núcleo de vesículas en la Primaria neuronas del hipocampo cultivadas

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

<em>In vivo</em> Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

<em>Imágenes</em> in <em>vivo</em> de Deep capas corticales con un microprisma

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Seguimiento de los cambios dinámicos en niveles de calcio mitocondrial de la apoptosis mediante un sensor de calcio genéticamente codificados

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Basado en la fluorescencia de medición de la entrada de calcio de la tienda que funciona en las células vivas: a partir de células cancerosas cultivadas de fibra muscular esquelética

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading (TED)

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading TED

Direct Imaging de calcio ER con Targeted-esterasa inducida colorante de carga (TED)

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Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

De imagen confocal de medición de las fluctuaciones de calcio en el retículo sarcoplásmico de células musculares lisas cultivadas Uso de FRET a base de

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

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Concurrente EEG y MRI funcional grabación y análisis de integración de la proyección de imagen dinámica actividad Cortical

Electroencephalography (EEG) and functional magnetic resonance imaging (fMRI) are two of the fundamental noninvasive methods for identifying brain ...

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Análisis de la función de célula Beta usando proyección de imagen de resolución sola célula calcio en islotes de pez cebra

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