Name: analyzing gene expression from marine microbial communities using environmental transcriptomics
Uploaded: 2009-02-18T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Gene Expression from Marine Microbial Communities using Environmental Transcriptomics at JoVE.com

De financiering werd verstrekt door The Gordon en Betty Moore Foundation subsidies en de National Science Foundation te verlenen MCB-0702125.

Werken met RNA Omdat RNases zijn alomtegenwoordig en mRNA&#39;s af te breken snel, standaard voorzorgsmaatregelen voor het werken in een ribonuclease-vrije omgeving moet worden gevolgd en de monsters moeten worden verwerkt of zo spoedig mogelijk na collectie bewaard gebleven. Deel 1: Milieu-RNA Collection (ontworpen om biomassa te verzamelen in de 0,2 tot 3,0 micrometer groot fractie) Benodigdheden: Masterflex bu...

<ol>
	<li>Liang, P., Pardee, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Science. 257 (5072), 967-967 (1992).</li><li>Belasco, J. G., Belasco, J. G., Brawerman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+messenger+RNA+stability.">Control of messenger RNA stability.</a> , 3-11 (1993).</li><li>Poretsky, R. S., Bano, N., Buchan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 71 (7), 4121-4121 (2005).</li><li>Gelder, R. N. V., von Zastrow, M. E., Yool, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Natl. Acad. Sci. USA. 87 (5), 1663-1663 (1990).</li><li>Margulies, M., Egholm, M., Altman, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nature. 437 (7057), 376-376 (2005).</li><li>Frias-Lopez, J., Shi, Y., Tyson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Natl. Acad. Sci. USA. 105 (10), 3805-3805 (2008).</li><li>Poretsky, R. S., Hewson, I., Sun, S., Allen, A. E., Zehr, J. P., Moran, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Environ Microbiol. 11 (6), 1358-1375 (2009).</li></ol>

Het onderzoek van genexpressie door natuurlijke microbiële gemeenschappen is gemeengoed geworden in de afgelopen jaren als een middel om de ecologische rollen en functies van micro-organismen te verkennen. Gebruikt in combinatie met de detectie, kwantificering en karakterisering van mariene micro-organismen, kunnen analyses van genexpressie worden gebruikt om de fylogenie koppelen aan de functie in natuurlijke microbiële gemeenschappen. Veel technieken voor het richten van de functionele expressie van genen zich op sp...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PowerSoil Bead Tubes</td>
<td>kit</td>
<td>MoBio</td>
<td>12866-25-PBT</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNeasy Mini Kit</td>
<td>kit</td>
<td>QIAGEN</td>
<td>74104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TURBO DNA-free</td>
<td>kit</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1907</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>mRNA-ONLY Prokaryotic mRNA Isolation Kit</td>
<td>kit</td>
<td>Epicentre</td>
<td>MOP51010/MOP51024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MICROBExpress Bacterial mRNA Enrichment Kit</td>
<td>kit</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1905</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MICROBEnrich kit</td>
<td>kit</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1901</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MessageAmp II-Bacteria RNA Amplification Kit</td>
<td>kit</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1790</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Universal RiboClone cDNA Synthesis System</td>
<td>kit</td>
<td>Promega</td>
<td>C4360</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wizard DNA Clean-Up System</td>
<td>kit</td>
<td>Promega</td>
<td>A7280</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

analyzing gene expression from marine microbial communities using environmental transcriptomics

Analoog aan metagenomics, milieu transcriptomics (metatranscriptomics) haalt en sequenties milieu-mRNA&#39;s van een microbiële assemblage zonder voorafgaande kennis van wat genen van de gemeenschap zou kunnen uiten. Zo biedt de meest onpartijdige perspectief op gemeenschap genexpressie<em&gt; In situ</em&gt;. Milieu-transcriptomics protocollen zijn technisch moeilijk omdat prokaryotische mRNA&#39;s over het algemeen niet de poly (A) staarten dat isolatie maken van eukaryotische berichten relatief eenvoudig<sup&gt; 1</sup&gt; En vanwege de relatief korte half leven van mRNA&#39;s<sup&gt; 2</sup&gt;. Daarnaast mRNA&#39;s zijn veel minder overvloedig zijn dan rRNAs in totaal RNA extracten, waardoor een rRNA achtergrond vaak overweldigt mRNA signalen. Echter, technieken voor het overwinnen van een aantal van deze problemen recent ontwikkeld. Een procedure voor de analyse van de milieu transcriptomes door het creëren van kloon bibliotheken met behulp van willekeurige primers voor reverse-transcriptie en milieu-mRNA&#39;s te versterken is onlangs beschreven werd succesvol in twee verschillende natuurlijke omgevingen, maar de resultaten zijn vertekend door selectie van de willekeurige primers gebruikt om de cDNA synthese te starten<sup&gt; 3</sup&gt;. Advances in lineaire versterking van mRNA overbodig voor willekeurige primers in de amplificatiestap en maken het mogelijk om minder uitgangsmateriaal gebruiken het verminderen van de inzameling en verwerking de tijd van de monsters en daarmee het minimaliseren van RNA degradatie<sup&gt; 4</sup&gt;.<em&gt; In vitro</em&gt; Transcriptie methoden voor het versterken van mRNA te betrekken polyadenylating het mRNA en voorzien van een T7 promotor op het 3 einde van het transcript. Amplified RNA (ARNA) kunnen dan worden omgezet in cDNA verdubbelen met behulp van willekeurige hexameren en direct gesequenced door pyrosequencing<sup&gt; 5</sup&gt;. Een eerste gebruik van deze methode op het station ALOHA laten zien dat het nut voor het karakteriseren van microbiële gemeenschap genexpressie<sup&gt; 6</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Gene Expression from Marine Microbial Communities using Environmental Transcriptomics at JoVE.com

Analyzing Gene Expression from Marine Microbial Communities using Environmental Transcriptomics

We presenteren een methode voor het genereren van cDNA van milieu-mRNA. In het algemeen, totaal RNA eerste is verzameld uit de omgeving, is rRNA selectief verwijderd, mRNA wordt selectief versterkt, en cDNA gesynthetiseerd uit de verrijkte mRNA zwembad is gesequenced. Herstelde sequenties kunnen worden geannoteerd met behulp van standaard bioinformatica technieken om de uitdrukking genen te identificeren.

Het analyseren van genexpressie van Marine microbiële gemeenschappen met behulp van het milieu transcriptomics

Analogous to metagenomics, environmental transcriptomics (metatranscriptomics) retrieves and sequences environmental mRNAs from a microbial assemblage ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microbial Communities in Nature and Laboratory - Interview

Microbiële gemeenschappen in de natuur en laboratorium - Interview

Biology of Microbial Communities  - Interview

Biologie van microbiële gemeenschappen - Interview

Bacterial Gene Expression Analysis Using Microarrays

Bacteriële Gene Expression analyse met behulp van Microarrays

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

De vervaardiging van primaire hematopoietische cellen culturen uit Murine Bone Marrow voor Elektroporatie

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Met behulp van de Gene Puiser MXcell Elektroporatie systeem om primaire cellen transfecteren met een hoog rendement

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Met behulp van een geautomatiseerde cel Counter aan Gene Expression Studies Vereenvoudigen: siRNA Knockdown van IL-4 Afhankelijk van genexpressie in cellen Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro reconstitutie van de Active T. castaneum Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Extraction of High Molecular Weight DNA from Microbial Mats

Extractie met een hoog molecuulgewicht DNA van microbiële matten

Successful and accurate analysis and interpretation of metagenomic data is dependent upon the efficient extraction  of high-quality, high molecular weight ...

Concentration of Metabolites from Low-density Planktonic Communities for Environmental Metabolomics using Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy

Concentratie van de metabolieten van Low-density Planktonische Gemeenschappen voor het milieu Metabolomics met behulp van nucleaire magnetische resonantie spectroscopie

Environmental metabolomics is an emerging field that is promoting new understanding in how organisms respond to and interact with the environment and each ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

Met behulp van SecM Arrestatie sequentie als een Tool om Ribosoom Bound Polypeptiden Isoleer

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...