Name: purification and visualization of influenza a viral ribonucleoprotein complexes
Uploaded: 2009-02-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification and Visualization of Influenza A Viral Ribonucleoprotein Complexes at JoVE.com

<p class="jove_content"> इस काम अभिनव के लिए कनाडा फाउंडेशन (CFI), स्वास्थ्य अनुसंधान (CIHR) के कनाडा संस्थान, और प्राकृतिक विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल () NSERC से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. </p>

<p class="jove_title"> भाग 1: एक virion इन्फ्लुएंजा के व्यवधान </p><ol><li> एक Beckman polycarbonate अपकेंद्रित्र (11 मिमी x 34 मिमी) ट्यूब Beckman ऑप्टिमा में इस्तेमाल के लिए एक रोटर TLA-120.2 में फिट करने के लिए डिज़ाइन में MNT बफर के 750 μl (20 मिमी एमईएस, 150 मिमी NaCl, 30 मिमी Tris, प?...

<ol>
	<li>Kemler, I., Whittaker, G., Helenius, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+import+of+microinjected+influenza+virus+ribonucleoproteins.">Nuclear import of microinjected influenza virus ribonucleoproteins.</a> <em style='font-style: italic'>Virology</em>. <b>202</b>, 1028-1033 (1994).</li><li>Wu, W. W. H., Weaver, L. L., Pant&#233;, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+analysis+of+the+nuclear+localization+sequences+on+influenza+a+ribonucleoprotein+complexes.">Ultrastructural analysis of the nuclear localization sequences on influenza a ribonucleoprotein complexes.</a> <em style='font-style: italic'>J Mol Biol</em>. <b>374</b>, 910-916 (2007).</li><li>Gasteiger, E., Walker, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Proteomics Protocols Handbook</em>. , 571-607 (2005).</li><li>Wu, W. W. H., Sun, Y. H. B., Pant&#233;, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+import+of+influenza+A+viral+ribonucleoprotein+complexes+is+mediated+by+two+nuclear+localization+sequences+on+viral+nucleoprotein.">Nuclear import of influenza A viral ribonucleoprotein complexes is mediated by two nuclear localization sequences on viral nucleoprotein.</a> <em style='font-style: italic'>Virol J</em>. <b>4</b>, 49-49 (2007).</li><li>Babcock, H. P., Chen, C., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+single-particle+tracking+to+study+nuclear+trafficking+of+viral+genes.">Using single-particle tracking to study nuclear trafficking of viral genes.</a> <em style='font-style: italic'>Biophys J</em>. <b>87</b>, 2749-2758 (2004).</li></ol>

<p class="jove_content"> vRNPs की शुद्धि Kemler <em>एट अल</em> (1994) द्वारा वर्णित की प्रक्रिया पर आधारित <sup>है 1</sup> हम और दूसरों को भी इस प्रोटोकॉल का इस्तेमाल किया है vRNPs को अलग करने के लिए अपने परमाणु आयात <sup>अध्ययन.</sup> 2,4,5 </p><p class="jove_content"> हम RNase मुफ्त सुझ?...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>H3N2 X-31 A/AICHI/68 influenza A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River Laboratories</td>
<td>490715</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tris</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T1503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M-8250</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycerol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>G33-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Octylglucoside</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>O-8001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lysolecithin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>L-4129</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dithiothreitol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D-9779</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coomassie brilliant blue G-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kodak</td>
<td>1367796</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>diethyl pyrocarbonate (DEPC)-treated water</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>750024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Uranyl Acetate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ted Pella</td>
<td>19481</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ammonium Molybdate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>A-674</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Optima MAX-E Ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>434491</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MLS-50 Rotor Package, Swinging Bucket</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>367280</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TLA-120.2 Rotor Assembly, Fixed-Angle, Titanium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>362046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Eppendorf Thermomixer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Brinkman</td>
<td>022670000</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

purification and visualization of influenza a viral ribonucleoprotein complexes

<p class="jove_content">इन्फ्लूएंजा एक वायरल जीनोम आठ भावना नकारात्मक, एकल असहाय शाही सेना अणु, व्यक्तिगत nucleoprotein वायरल ribonulceoprotein कण (vRNPs) में इन्फ्लूएंजा (NP) के एकाधिक प्रतियों के साथ पैक के होते हैं. इन्फ्लूएंजा vRNPs वायरल लिफाफे के भीतर संलग्न हैं. सेल प्रविष्टि के दौरान, तथापि, इन vRNP परिसरों cytoplasm में जारी कर रहे हैं, जहां वे मेजबान परमाणु परिवहन मशीनरी के लिए पहुँच प्राप्त है. आदेश में इन्फ्लूएंजा vRNPs और इन्फ्लूएंजा जीनोम की प्रतिकृति के परमाणु आयात अध्ययन करने के लिए, यह उपयोगी है पृथक vRNPs के साथ काम इतना है कि वायरस के अन्य घटकों इन प्रक्रियाओं के साथ हस्तक्षेप नहीं करते. यहाँ, हम एक इन्फ्लूएंजा ए वायरस से इन vRNPs शुद्ध प्रक्रिया का वर्णन करता है. प्रक्रिया डिटर्जेंट के साथ एक virion इन्फ्लूएंजा के विघटन के साथ शुरू होता है क्रम में छा virion से vRNP परिसरों जारी है. vRNPs तो 33-70% वेग अवसादन के द्वारा असंतत ग्लिसरॉल ढाल पर एक virion इन्फ्लूएंजा के अन्य घटकों से अलग हो रहे हैं. ग्लिसरॉल ढाल से प्राप्त भिन्न तो Coomassie नीले के साथ धुंधला के बाद एसडीएस पृष्ठ के माध्यम से विश्लेषण कर रहे हैं. पीक एनपी युक्त भिन्न तो एक साथ जमा कर रहे हैं और centrifugation द्वारा केंद्रित. एकाग्रता के बाद, vRNPs की अखंडता नकारात्मक धुंधला के बाद संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा vRNPs दृश्य द्वारा सत्यापित है. ग्लिसरॉल ढाल शुद्धि Kemler से है कि एक संशोधन है<em&gt; एट अल.</em&gt; (1994)<sup&gt; 1</sup&gt; और नकारात्मक धुंधला वू द्वारा किया गया प्रदर्शन किया है<em&gt; एट अल.</em&gt; (2007).<sup2&gt;</sup</p>

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Purification and Visualization of Influenza A Viral Ribonucleoprotein Complexes

<p class="jove_content">इन्फ्लूएंजा ए वायरस के जीनोम आरएनए और प्रोटीन के आठ अलग - अलग परिसरों, करार दिया वायरल ribonucleoprotein परिसरों (vRNPs) के होते हैं. इस कागज ग्लिसरॉल ढाल शुद्धि और इन्फ्लूएंजा vRNPs के संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी दृश्य का वर्णन करता है.</p>

और इन्फ्लूएंजा वायरल Ribonucleoprotein परिसर के शोधन विज़ुअलाइज़ेशन

The influenza A viral genome consists of eight negative-sense, single stranded RNA molecules, individually packed with multiple copies of the influenza A ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

कार्बनिक सॉल्वेंट और एसिटिक एसिड के बिना जी 250 Coomassie के साथ जैल में प्रोटीन की धुंधला

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Preparation, Purification, and Characterization of Lanthanide Complexes for Use as Contrast Agents for Magnetic Resonance Imaging

तैयारी, शोधन, चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग के लिए और कंट्रास्ट एजेंटों के रूप में उपयोग के लिए Lanthanide परिसर की विशेषता

Polyaminopolycarboxylate-based ligands are commonly used to chelate lanthanide ions, and the resulting complexes are 
useful as contrast agents for ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Hsp104 के शोधन, एक प्रोटीन Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes

अति सक्रिय खमीर Ribosomes के chromatographic शोधन

Eukaryotic ribosomes are much more labile as compared to their eubacterial and archael counterparts, thus posing a significant challenge to researchers.  ...

Method for the Isolation and Identification of mRNAs, microRNAs and Protein Components of Ribonucleoprotein Complexes from Cell Extracts using RIP-Chip

अलगाव और mRNAs microRNAs, और Ribonucleoprotein परिसर प्रोटीन घटक की पहचान सेल के अर्क से चीर चिप का उपयोग करने के लिए विधि

As a result of the development of high-throughput sequencing and efficient microarray analysis, global gene expression analysis has become an easy and ...

Identification of Protein Complexes in <em>Escherichia coli</em> using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

में प्रोटीन परिसरों की पहचान<em&gt; Escherichia कोलाई</em&gt; संयोजन में अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री के साथ अनुक्रमिक पेप्टाइड संबंध शुद्धीकरण का उपयोग

Since most cellular processes are mediated by macromolecular assemblies, the systematic identification of protein-protein interactions (PPI) and the ...

AFM-based Mapping of the Elastic Properties of Cell Walls: at Tissue, Cellular, and Subcellular Resolutions

सेल दीवारों की लोचदार संपत्तियों की AFM आधारित मैपिंग: ऊतक, सेलुलर, और Subcellular प्रस्तावों पर

We describe a recently developed method to measure mechanical properties of the surfaces of plant tissues using atomic force microscopy (AFM) ...

One-step Purification of Twin-Strep-tagged Proteins and Their Complexes on Strep-Tactin Resin Cross-linked With Bis(sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3)

One-step Purification of Twin-Strep-tagged Proteins and Their Complexes on Strep-Tactin Resin Cross-linked With Bissulfosuccinimidyl Suberate BS3

एक कदम Strep-Tactin राल बीआईएस (sulfosuccinimidyl) के साथ पार से जुड़े Suberate (BS3) पर ट्विन Strep टैग प्रोटीन और उनके परिसरों का शोधन

Affinity purification of Strep-tagged fusion proteins on resins carrying an engineered streptavidin (Strep-Tactin) has become a widely used method for ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

ऊतक हदबंदी और अंतर निस्पंदन द्वारा प्रत्यारोपण के लिए mitochondria की रैपिड अलगाव और शुद्धि

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

Generation and Purification of Human INO80 Chromatin Remodeling Complexes and Subcomplexes

जनरेशन और मानव INO80 Chromatin Remodeling परिसर और Subcomplexes का शोधन

INO80 chromatin remodeling complexes regulate nucleosome dynamics and DNA accessibility by catalyzing ATP-dependent nucleosome remodeling. Human INO80 ...