Name: microinjection of xenopus laevis oocytes
Uploaded: 2009-02-23T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes at JoVE.com

Vi tackar David Theilmann (Pacific Agri-Food Research Centre, Summerland, British Columbia) för att tillhandahålla baculovirus AcMNPV och hjälpsamma diskussion. Detta arbete har finansierats med bidrag från Kanada Foundation for Innovation (CFI), den kanadensiska Institutes of Health Research (CIHR), den Michael Smith Stiftelsen för hälsoforskning (MSFHR) och naturvetenskaplig och teknisk forskning Council of Canada (NSERC) .

Del 1: Förberedelse av Xenopus oocyter för mikroinjektion <ol><li> Placera en liten bit (ca 2 cm) av Xenopus laevis äggstock i en 50 ml E-rör som innehåller 20 ml kollagenas lösning (5 mg / ml kollagenas på kalcium-fri modifierad Barth saltlösning: 88 mM NaCl, 1 mM KCl, 0,82 mM MgSO 4, 10 mm Hepes, pH 7,5). Kollagenas används för att avlägsna follikeln celler som omger oocyter. </li><li> Placera röret på en shaker plattform och rock försiktigt (vid 100 rpm) i en timme. Denna ...

<ol>
	<li>Pant&#233;, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+intact+Xenopus+oocytes+in+nucleocytoplasmic+transport+studies.">Use of intact Xenopus oocytes in nucleocytoplasmic transport studies.</a> Methods Mol. Biol. 322, 301-314 (2006).</li><li>Pant&#233;, N., Kann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+pore+complex+is+able+to+transport+macromolecules+with+diameters+of+about+39+nm.">Nuclear pore complex is able to transport macromolecules with diameters of about 39 nm.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (2), 425-434 (2002).</li><li>Rabe, B., Vlachou, A., Pant&#233;, N., Helenius, N., Kann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+import+of+hepatitis+B+virus+capsids+and+release+of+the+viral+genome.">Nuclear import of hepatitis B virus capsids and release of the viral genome.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (17), 9849-9854 (2003).</li><li>Cohen, S., Pant&#233;, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pushing+the+Envelope:+Microinjection+of+MVM+into+Xenopus+oocytes+causes+damage+to+the+nuclear+envelope.">Pushing the Envelope: Microinjection of MVM into Xenopus oocytes causes damage to the nuclear envelope.</a> J. Gen. Virol. 86 (12), 3243-3252 (2005).</li><li>Pant&#233;, N., Jarmolowski, A., Izaurralde, E., Sauder, U., Baschong, W., Mattaj, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+nuclear+export+of+different+classes+of+RNA+by+electron+microscopy.">Visualizing nuclear export of different classes of RNA by electron microscopy.</a> RNA. 3, 498-513 (1997).</li></ol>

Mikroinjektion av Xenopus oocyter i kombination med tunna sektionering EM är ett mycket effektivt verktyg för att studera nucleocytoplasmic transporter. Detta system har använts för att kartlägga olika steg av import via NPC, till exempel samspelet mellan en nukleär import substrat med strukturella komponenter i den nationella folkkongressen, såsom cytoplasmiska filament och kärnkraft korg (granskats av Pante, 2006). Det har också använts för att studera det nukleära import av kärnvapen replikera v...

microinjection of xenopus laevis oocytes

Mikroinjektion av Xenopus laevis oocyter följt av tunna sektionering elektronmikroskopi (EM) är ett utmärkt system för att studera nucleocytoplasmic transporter. På grund av dess stora kärnan och hög täthet av nukleära porer komplex (NPC), kan kärntransport enkelt visualiseras i Xenopus äggcellen. Mycket insikt i de mekanismer av kärnvapen import och export har fått genom att använda detta system (granskats av Pante, 2006). Dessutom har vi använt mikroinjektion av Xenopus äggceller att dissekera den nukleära import vägar av flera virus som replikerar i den mottagande kärnan. Här kan vi visa cytoplasmiska mikroinjektion av Xenopus oocyter med en nukleär import substrat. Vi visar också beredningen av det injicerade ägg för visualisering genom tunn-sektionering EM, inklusive dissektion, uttorkning, och inbäddning av oocyter i en epoxi bädda harts. Slutligen ger vi representativa resultat för ägg som har idag injiceras med kapsid av baculovirus Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) eller parvovirus minuten virus Möss (MVM), och diskutera möjliga tillämpningar av tekniken.

Watch this Scientific Journal Video about Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes at JoVE.com

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Här visar vi cytoplasmiska mikroinjektion av<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Oocyter med en nukleär import substrat, samt utarbetande av den injicerade ägg för visualisering genom tunn-sektionering elektronmikroskopi.

Mikroinjektion av Xenopus laevis oocyter

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Research

JoVE Journal

Biology

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

Plast inbäddning och Sektionering av Xenopus laevis embryon

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Skaffa Ägg från Xenopus laevis Kvinnor

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Upprättande och fraktionering av Xenopus laevis Egg Utdrag

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Patch Clamp Registrering av jonkanaler Uttryckt i Xenopus oocyter

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualisera RNA lokalisering i Xenopus Oocyter

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Gödsling av Xenopus oocyter Med metoden Host Transfer

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Tissue Fastställande Använda Transplant Animal Cap (ACT) analys i Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell imaging och kvantitativ analys av embryonala epitelceller i Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Production of Transgenic Xenopus laevis by Restriction Enzyme Mediated Integration and Nuclear Transplantation

Production of Transgenic Xenopus laevis by Restriction Enzyme Mediated Integration and Nuclear Transplantation

Produktion av Transgena Xenopus laevis Genom begränsning enzymmedierad Integration och Nuclear Transplantation

Stable integration of cloned gene products into the Xenopus genome is necessary to control the time and place of expression, to express genes at later ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Ansikts Transplantationer i<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryon

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...