Name: collection and cryopreservation of hamster oocytes and mouse embryos
Uploaded: 2009-03-27T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door het Spaanse Ministerio de Educación y Ciencia (BIO 2006 tot +11.792) en de Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437). Auteurs willen graag Marc Puigcerver en Jonatan Lucas bedanken voor hun technische bijstand bij de voorbereiding van de media. Alle medewerkers van de Servei d&#39;Estabulari is erkend voor huisvesting van de dieren, en vooral Juan Jose Martin en Javier Benito voor hun extra bijdrage over het opnemen van een deel van deze video. NCB is een fellow van de Portugese Fundação para a Ciência e Tecnologia en SG is een fellow van het Spaanse Ministerio de Educación y Ciencia.

Verzorging van dieren en de procedures werden uitgevoerd volgens de richtlijnen en verordeningen zijn goedgekeurd door de ethische commissie op Animal and Human Onderzoek van de Universitat Autònoma van Barcelona, ​​Spanje. I. Oocyte collectie <ol><li> Controleer en selecteer vrouwelijke hamsters (Mesocricetus auratus, 8-12 week oud) van de Gouden Syrische stam voor de aanwezigheid van een dikke vaginale afscheiding (postovulatory ontlading). </li><li> Induceren geselecteerde vrouwen ...

<ol>
	<li>Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+mouse+embryos+frozen+to+-196+and+-269+&#176;C.">Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 &#176;C.</a> Science. 178, 411-414 (1972).</li><li>Wilmut, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cooling+rate,+warming+rate,+cryoprotective+agent+and+stage+of+development+on+survival+of+mouse+embryos+during+freezing+and+thawing.">The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of development on survival of mouse embryos during freezing and thawing.</a> Life Sci. 11, 1071-1079 (1972).</li><li>Parkening, T. A., Tsunoda, Y., Chang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+various+low+temperatures,+cryoprotective+agents+and+cooling+rates+on+the+survival,+fertilizability+and+development+of+frozen-thawed+mouse+eggs.">Effects of various low temperatures, cryoprotective agents and cooling rates on the survival, fertilizability and development of frozen-thawed mouse eggs.</a> J. Exp. Zool. 197, 369-374 (1976).</li><li>Schneider, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryobiological+principles+of+embryo+freezing.">Cryobiological principles of embryo freezing.</a> J. In Vitro Fert. Embryo Transf. 3, 3-9 (1986).</li><li>Vajta, G., Kuwayama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+cryopreservation+systems.">Improving cryopreservation systems.</a> Theriogenology. 65, 236-244 (2006).</li><li>Duselis, A. R., Vrana, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieval+of+mouse+oocytes.">Retrieval of mouse oocytes.</a> JoVE. 3, (2007).</li><li>Lassalle, B., Testart, J., Renard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryo+features+that+influence+the+success+of+cryopreservation+with+the+use+of+1,2+propanediol.">Human embryo features that influence the success of cryopreservation with the use of 1,2 propanediol.</a> Fertil. Steril. 44, 645-651 (1985).</li><li>Ib&#225;&#241;ez, E., Grossmann, M., Vidal, F., Egozcue, J., Santal&#243;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+caprine+beta-lactoglobulin+transgenic+mouse+embryos.">Cryopreservation of caprine beta-lactoglobulin transgenic mouse embryos.</a> Cryobiology. 35, 290-298 (1997).</li><li>Dinnyes, A., Wallace, G. A., Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+genotype+on+the+efficiency+of+mouse+embryo+cryopreservation+by+vitrification+or+slow+freezing.">Effect of genotype on the efficiency of mouse embryo cryopreservation by vitrification or slow freezing.</a> Mol. Reprod. Dev. 40, 429-435 (1995).</li><li>Tateno, H., Kamiguchi, Y., Mikamo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+freezing+and+thawing+method+of+hamster+oocytes+designed+for+both+the+penetration+test+and+chromosome+assay+of+human+spermatozoa.">A freezing and thawing method of hamster oocytes designed for both the penetration test and chromosome assay of human spermatozoa.</a> Mol. Reprod. Dev. 33, 202-209 (1992).</li><li>Biggers, J., McGuinnis, L. K., Raffin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+acids+and+preimplantation+development+of+the+mouse+in+the+protein-free+KSOM.">Amino acids and preimplantation development of the mouse in the protein-free KSOM.</a> Biol. Reprod. 63, 281-293 (2000).</li></ol>

Met dit protocol hamster eicellen en embryo&#39;s muis met succes kan worden ingevroren. Eenmaal bevroren, kunnen eicellen / embryo&#39;s worden opgeslagen in vloeibare stikstof tanks voor onbepaalde tijd en teruggewonnen op elk gewenst moment of plaats gewenst. Dit biedt het voordeel van het hebben van monsters bijna klaar voor gebruik wanneer dat nodig is. Aan de andere kant kan dit protocol ook gebruikt worden om embryo cryobanks genereren uit waardevolle muizenstammen (zoals transgene lijnen), als een economische en veiliger alternatief...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>French type mini-straw 0.25 ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mini-tub</td>
<td>13407/0010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>hCG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Farma-Lepori, Spain</td>
<td>749036.4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hyaluronidase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H-3884</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KSOM-H medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ref. [11]</td>
</tr>
<tr>
<td>Liquid Nitrogen </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Air Liquide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic plugs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mini-tub</td>
<td>19046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PMSG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Intervet, Spain</td>
<td>1.614/8447</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propilenglycol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>82280</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sucrose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Merck</td>
<td>107687</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Aesculap</td>
<td>BC-060R; BG-061R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermo-sealer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SIZ</td>
<td>220</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>35 and 90 mm culture dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nunc</td>
<td>153066; 150350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 ml tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Greiner Bio-one</td>
<td>163160</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nitrogen tank</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MVE, Cryogenics</td>
<td>XC 43/28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Programmable Freezer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Planner Products Ltd.</td>
<td>Kryo-10 Series III</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Aesculap</td>
<td>BD-331R; BD-053R; OC-020R</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

collection and cryopreservation of hamster oocytes and mouse embryos

Embryo&#39;s en eicellen werden voor het eerst met succes meer dan 30 jaar geleden ingevroren, toen Whittingham<i&gt; Et al..</i&gt;<sup&gt; 1</sup&gt; En Wilmut<sup&gt; 2</sup&gt; Apart beschreven dat de muis embryo&#39;s kunnen worden ingevroren en bewaard bij -196 ° C, en een paar jaar later, Parkening<i&gt; Et al.</i&gt;.<sup&gt; 3</sup&gt; Meldde de geboorte van levende nakomelingen als gevolg van in-vitrofertilisatie (IVF) van gecryopreserveerd eicellen. Sindsdien is het gebruik van cryopreservatie technieken zich snel verspreiden naar een essentieel onderdeel in de praktijk van mens en dier begeleide voortplanting en in het behoud van dierlijke genetische hulpbronnen worden. Momenteel zijn er twee manieren gebruikt worden om eicellen en embryo&#39;s cryopreserve: langzaam invriezen en verglazing. Een grote verscheidenheid van benaderingen zijn gebruikt om te proberen beide technieken en miljoenen dieren en duizenden kinderen te verbeteren, zijn geboren uit ingevroren embryo&#39;s. Evenwel nog belangrijke tekortkomingen verbonden aan cryopreservatie nog moeten worden overwonnen, omdat ijs-kristalvorming, oplossing effecten en osmotische shock lijken meerdere cryoinjuries in de post-ontdooide eicellen en embryo&#39;s kunnen veroorzaken. Langzame bevriezing met programmeerbare diepvriezers heeft het voordeel van het gebruik van lage concentraties van cryoprotectants, die meestal worden geassocieerd met chemische toxiciteit en osmotische shock, maar hun vermogen om ijs-kristalvorming te vermijden bij lage concentraties is beperkt. Langzame bevriezing induceert ook onderkoeling effecten die moeten worden vermeden met behulp van handmatige of automatische zaaien<sup&gt; 4</sup&gt;. In de verglazing proces, hoge concentraties van cryoprotectants remmen de vorming van ijskristallen en leiden tot de vorming van een glasachtig verglaasde toestand waarin water is gestold, maar niet uitgebreid. Echter, vanwege de toxiciteit van cyroprotectants bij de gebruikte concentraties, kunnen eicellen / embryo&#39;s alleen worden blootgesteld aan de cryoprotectant oplossing voor een zeer korte periode van tijd en in een minimum volume oplossing, voordat de monsters direct ondergedompeld in vloeibare stikstof<sup&gt; 5</sup&gt;. In de afgelopen tien jaar heeft verglazing steeds populairder geworden, omdat het een zeer snelle methode waarbij geen dure apparatuur (programmeerbaar diepvriezer) is vereist. Echter, langzaam invriezen nog steeds de meest gebruikte methode om eicellen / embryo cryopreservatie. In deze video-artikel tonen we, stap-voor-stap hoe te verzamelen en te langzaam te bevriezen hamster eicellen met een hoge post-dooi overleving. Dezelfde procedure kan ook worden toegepast om met succes vorst en dooi muis embryo&#39;s in verschillende stadia van pre-implantatie ontwikkeling.

Watch this Scientific Journal Video about Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos at JoVE.com

Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos

In deze video-artikel stellen we een stap-voor-stap demonstratie over hoe het verzamelen en hamster eicellen cryopreserve met een hoge post-dooi overleving. Dezelfde procedure kan ook worden toegepast om met succes vorst en dooi muis embryo&#39;s in verschillende stadia van pre-implantatie ontwikkeling.

Verzamelen en Cryopreservatie van Hamster Eicellen en muis embryo&#39;s

Embryos and oocytes were first successfully cryopreserved more than 30 years ago, when Whittingham et al. 1 and Wilmut 2 separately described that mouse ...

Research

JoVE Journal

Biology

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

Nuclear Transfer naar Mouse Eicellen

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Dissectie van 6,5 dpc muizenembryo&#39;s

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Retrieval of Mouse Oocytes

Ophalen van Muis Eicellen

To date, only a few studies have reported successful manipulations of Peromyscus embryogenesis or reproductive biology.  Together with the Peromyscus ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In Utero Intraventriculaire injectie en elektroporatie van de E15 muizenembryo&#39;s

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Patch Clamp Opname van ionenkanalen Uitgedrukt in Xenopus Eicellen

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Micro-injectie van de Xenopus laevis Eicellen

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Seawater Sampling and Collection

Zeewater Bemonstering en Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass ...

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Het visualiseren van RNA Lokalisatie in Xenopus Eicellen

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo beeldvorming en therapeutische behandelingen in een orthotope Muis Model van eierstokkanker

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Cryopreservation of Preimplantation Embryos of Cattle, Sheep, and Goats

Cryopreservatie van embryo&#39;s Preimplantatie van runderen, schapen, en geiten

Preimplantation embryos from cattle, sheep, and goats may be cryopreserved for short- or long-term storage.  Preimplantation embryos consist predominantly ...