Name: human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue
Uploaded: 2009-05-26T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue at JoVE.com

Soutenu par un financement de l&#39;Université de l&#39;Illinois à Chicago ainsi que des cellules des îlots Resource Center NIH (RFA-05-003 RR), la Fondation Christopher, la Fondation Efroymson, et la Fondation Tellabs.

1. Facilité de configuration <ol><li> L&#39;isolement des îlots humains est une procédure qui implique le temps sensible équipe, et donc, quatre personnes sont nécessaires pour mener à bien cette procédure. L&#39;équipe est dirigée par le chirurgien, qui dissèque et cannulates le pancréas. </li><li> L&#39;isolement des îlots commence à la minute de l&#39;équipe entre dans l&#39;installation des îlots UIC isolement. Membres de l&#39;équipe d&#39;assurer que tous les instruments nécessaires, comme la ce...

<ol>
	<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li><li>Nano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+for+allotransplantation:+variables+associated+with+successful+islet+yield+and+graft+function.">Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function.</a> Diabetologia. 48, 906-912 (2005).</li><li>Barbaro, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+human+pancreatic+islet+purification+with+the+refined+UIC-UB+density+gradient.">Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient.</a> Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).</li><li>Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pancreas+preservation+prior+to+islet+isolation.+Cold+ischemic+tolerance.">Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance.</a> Transplantation. 59, 689-694 (1995).</li><li>Fridell, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+and+University+of+Wisconsin+solution+for+organ+preservation+in+clinical+pancreas+transplantation.">Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation.</a> Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).</li><li>Potdar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+experience+using+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+in+clinical+pancreas+transplantation.">Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation.</a> Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).</li><li>Salehi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+islet+isolation+outcomes+from+pancreata+preserved+with+Histidine-Tryptophan+Ketoglutarate+versus+University+of+Wisconsin+solution.">Human islet isolation outcomes from pancreata preserved with Histidine-Tryptophan Ketoglutarate versus University of Wisconsin solution.</a> Transplantation. 82, 983-985 (2006).</li><li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+islet+isolation+from+human+pancreas.">Automated islet isolation from human pancreas.</a> Diabetes. 38, 140-142 (1989).</li><li>Hanley, S. C., Paraskevas, S., Rosenberg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+and+isolation+variables+predicting+human+islet+isolation+success.">Donor and isolation variables predicting human islet isolation success.</a> Transplantation. 85, 950-955 (2008).</li><li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+human+islet+of+Langerhans+isolation+yields.">Factors affecting human islet of Langerhans isolation yields.</a> Transplant Proc. 34, 826-827 (2002).</li></ol>

Il existe une variété de facteurs influant sur le résultat 9,10 isolement. Parmi eux, la digestion du tissu pancréatique joue un rôle de premier plan. Basé sur notre propre expérience d&#39;isolement d&#39;îlots humains, nous avons résumé ci-après les points critiques, qui pourraient potentiellement influencer le rendement de l&#39;îlot et de qualité. <ol><li> Le temps de digestion est différente lorsque les différents types d&#39;enzymes sont utilisés. </li><li> Dès que 40-50% des îlots complètem...

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		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ice Slush Machine</td>
<td>equipment</td>
<td>Taylor Company</td>
<td>K4036546</td>
<td>make sterile ice</td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>424803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1</td>
<td>equipment</td>
<td>Leica Diagnostic Instrument Co</td>
<td>4103</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Culture Dish with 2 mm Grid</td>
<td>equipment</td>
<td>Nunc Brand Products</td>
<td>174926</td>
<td>islet counting</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Water Bath EX7</td>
<td>equipment</td>
<td>NesLab</td>
<td>105361058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>equipment</td>
<td>IBI:IR</td>
<td>60444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoBloc Balance AB 104-S</td>
<td>equipment</td>
<td>Metler Toledo</td>
<td>1119430864</td>
<td>measure pancreas weight</td>
</tr>
<tr>
<td>MasterFlex II Speed Controller</td>
<td>equipment</td>
<td>Cole Parmer Instrument Co</td>
<td>J00006445</td>
<td>adjust flow speed during degestion</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Sight DS L1</td>
<td>equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>217267</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Perfusion Unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Custom Made/Swiss</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cooler for perfusion unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>3013P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ricordi Chamber</td>
<td>equipment</td>
<td>University of Miami</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI dilution solution</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99783024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>University of Wisconcin (UW) solution</td>
<td>reagent</td>
<td>DURAMED</td>
<td>1000-46-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hank's Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-597-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25% Human Albumin</td>
<td>reagent</td>
<td>GRIFOLS</td>
<td>NDC 61953-0002-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>M199 media (wash solution)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-784-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002937</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neutral Protease NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002936</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>reagent</td>
<td>Cardinal Health</td>
<td>29906-004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cefazolin</td>
<td>reagent</td>
<td>West-Ward Pharmaceutical</td>
<td>NDC 0143-9924-90</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dithizone</td>
<td>reagent</td>
<td>Sigma </td>
<td>D5130</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue

Gestion diabète de type 1 est lourde, tant pour l&#39;individu et la société, ce qui coûte plus de 100 milliards de dollars annuellement. Malgré l&#39;utilisation répandue de la surveillance du glucose et des préparations d&#39;insuline nouvelles, de nombreuses personnes encore développer des complications secondaires dévastateurs. Transplantation d&#39;îlots pancréatiques peut restaurer à proximité de contrôle de la glycémie normale chez les patients diabétiques<sup&gt; 1</sup&gt;, Sans courir le risque d&#39;épisodes hypoglycémiques graves qui sont associées à une insulinothérapie intensive. Fournir la masse des îlots suffisant est important pour la transplantation d&#39;îlots de succès. Toutefois, caractéristique des donateurs, le prélèvement d&#39;organes et de la préservation affecter le résultat d&#39;isolement<sup&gt; 2</sup&gt;. À l&#39;Université de l&#39;Illinois à Chicago (UIC), nous avons développé un protocole d&#39;isolement de succès avec un gradient de purification améliorée<sup&gt; 3</sup&gt;. Le programme a démarré en Janvier 2004, et plus de 300 isolements ont été effectuées jusqu&#39;à Novembre 2008. Le pancréas ont été envoyés dans les solutions de conservation par le froid (UW, Université du Wisconsin ou de HTK, histidine-tryptophane cétoglutarate)<sup&gt; 4-7</sup&gt; À l&#39;isolement des cellules en laboratoire à l&#39;UIC pour l&#39;isolement des îlots. Les îlots pancréatiques ont été isolés en utilisant la méthode de l&#39;UIC qui est une version modifiée de la méthode initialement décrite par Ricordi<em&gt; Et al</em&gt;<sup&gt; 8</sup&gt;. Brièvement, après le nettoyage du pancréas du tissu environnant, il a été perfusé avec une solution enzymatique (collagénase Serva + Neutre protéase ou Sigma enzymes V). Le pancréas distendu a ensuite été transféré à la chambre de digestion Ricordi, connecté à une modification, le système de circulation tube fermé et chauffé à 37 ° C. Pendant la digestion, la chambre a été secoué doucement. Les échantillons ont été prises en permanence pour surveiller la progression de digestion. Une fois les îlots libres ont été détectées sous le microscope, la digestion a été arrêtée par rinçage à froid (4 ° C) RPMI dilution solution (Mediatech, Herndon, VA) dans le système de circulation afin de diluer l&#39;enzyme. Après avoir été recueilli et lavé au M199 milieux supplémentés avec l&#39;albumine humaine, le tissu a été échantillonnée pour une pré-purification compter et incubées avec la solution UW avant purification. Processus de purification seront décrites dans la Partie II: Purification et culture d&#39;îlots humains.

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Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

Atteindre de haute qualité et la quantité appropriée d&#39;îlots humains est l&#39;une des conditions préalables importantes pour la transplantation d&#39;îlots de succès. Dans cette vidéo, nous décrire étape par étape les procédures pour l&#39;isolement des îlots pancréatiques humains (partie I: la digestion et la collecte des tissus pancréatiques) en utilisant une méthode modifiée automatisés.

Isolement îlots pancréatiques humaines: Partie I: La digestion et la perception des tissus pancréatiques

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

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JoVE Journal

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Murine Pancreatic Islet Isolation

Isolement murin îlots pancréatiques

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Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

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Assistée par ordinateur à grande échelle de visualisation et quantification de la messe des îlots pancréatiques, distribution de taille et d&#39;architecture

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Une méthode pour la souris Isolement îlots pancréatiques et AMPc intracellulaire Détermination

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

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Préparation des cellules acineuses pancréatiques à des fins d&#39;imagerie calcique, mesures de blessures cellulaires, et les infections à adénovirus

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolement et culture de cellules primaires de souris acineuses du pancréas

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

Un protocole simple à haut rendement pour l'isolement des îlettes pancréatiques des souris

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

Îlots pancréatiques, enrobage pour les Sections de paraffine

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Imagerie de la dynamique du calcium dans les sous-populations de cellules d'islet pancréatique de souris

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...