Name: human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue
Uploaded: 2009-05-26T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue at JoVE.com

נתמכים על ידי מימון מאוניברסיטת אילינוי בשיקגו, כמו גם משאבים איילט Cell מרכז NIH מענק (RFA-RR 05-003), קרן כריסטופר, קרן Efroymson, וקרן Tellabs.

1. מתקן התקנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד איון אדם היא הליך רגיש הזמן הכרוך בעבודת צוות, ומכאן, ארבעה בני אדם יש צורך לנהל הליך זה. הקבוצה היא להוביל על ידי המנתח, אשר מנתח ו cannulates את הלבלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבידוד איון מתחיל ברגע הצ?...

<ol>
	<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li><li>Nano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+for+allotransplantation:+variables+associated+with+successful+islet+yield+and+graft+function.">Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function.</a> Diabetologia. 48, 906-912 (2005).</li><li>Barbaro, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+human+pancreatic+islet+purification+with+the+refined+UIC-UB+density+gradient.">Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient.</a> Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).</li><li>Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pancreas+preservation+prior+to+islet+isolation.+Cold+ischemic+tolerance.">Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance.</a> Transplantation. 59, 689-694 (1995).</li><li>Fridell, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+and+University+of+Wisconsin+solution+for+organ+preservation+in+clinical+pancreas+transplantation.">Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation.</a> Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).</li><li>Potdar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+experience+using+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+in+clinical+pancreas+transplantation.">Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation.</a> Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).</li><li>Salehi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+islet+isolation+outcomes+from+pancreata+preserved+with+Histidine-Tryptophan+Ketoglutarate+versus+University+of+Wisconsin+solution.">Human islet isolation outcomes from pancreata preserved with Histidine-Tryptophan Ketoglutarate versus University of Wisconsin solution.</a> Transplantation. 82, 983-985 (2006).</li><li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+islet+isolation+from+human+pancreas.">Automated islet isolation from human pancreas.</a> Diabetes. 38, 140-142 (1989).</li><li>Hanley, S. C., Paraskevas, S., Rosenberg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+and+isolation+variables+predicting+human+islet+isolation+success.">Donor and isolation variables predicting human islet isolation success.</a> Transplantation. 85, 950-955 (2008).</li><li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+human+islet+of+Langerhans+isolation+yields.">Factors affecting human islet of Langerhans isolation yields.</a> Transplant Proc. 34, 826-827 (2002).</li></ol>

ישנם מגוון גורמים המשפיעים על התוצאה בידוד 9,10. ביניהם, עיכול של רקמת הלבלב תפקיד בולט. בהתבסס על הניסיון שלנו איון אדם בבידוד, סיכמנו הבאים נקודות קריטיות, אשר עלול להשפיע על איכות תשואה איון ו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זמן עיכול שונה, כאשר סו?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ice Slush Machine</td>
<td>equipment</td>
<td>Taylor Company</td>
<td>K4036546</td>
<td>make sterile ice</td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>424803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1</td>
<td>equipment</td>
<td>Leica Diagnostic Instrument Co</td>
<td>4103</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Culture Dish with 2 mm Grid</td>
<td>equipment</td>
<td>Nunc Brand Products</td>
<td>174926</td>
<td>islet counting</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Water Bath EX7</td>
<td>equipment</td>
<td>NesLab</td>
<td>105361058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>equipment</td>
<td>IBI:IR</td>
<td>60444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoBloc Balance AB 104-S</td>
<td>equipment</td>
<td>Metler Toledo</td>
<td>1119430864</td>
<td>measure pancreas weight</td>
</tr>
<tr>
<td>MasterFlex II Speed Controller</td>
<td>equipment</td>
<td>Cole Parmer Instrument Co</td>
<td>J00006445</td>
<td>adjust flow speed during degestion</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Sight DS L1</td>
<td>equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>217267</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Perfusion Unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Custom Made/Swiss</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cooler for perfusion unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>3013P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ricordi Chamber</td>
<td>equipment</td>
<td>University of Miami</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI dilution solution</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99783024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>University of Wisconcin (UW) solution</td>
<td>reagent</td>
<td>DURAMED</td>
<td>1000-46-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hank's Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-597-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25% Human Albumin</td>
<td>reagent</td>
<td>GRIFOLS</td>
<td>NDC 61953-0002-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>M199 media (wash solution)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-784-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002937</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neutral Protease NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002936</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>reagent</td>
<td>Cardinal Health</td>
<td>29906-004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cefazolin</td>
<td>reagent</td>
<td>West-Ward Pharmaceutical</td>
<td>NDC 0143-9924-90</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dithizone</td>
<td>reagent</td>
<td>Sigma </td>
<td>D5130</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue

ניהול של סוכרת מסוג 1 היא מעיקה, הן הפרט והחברה, עולה מעל 100 מיליארד דולר בשנה. למרות השימוש הנרחב של ניטור גלוקוז אינסולין ניסוחים חדשים, אנשים רבים עדיין לפתח סיבוכים משניים הרסנית. איון השתלת הלבלב יכול לשחזר ליד בקרת גלוקוז נורמלי אצל חולי סוכרת<sup&gt; 1</sup&gt;, בלי הסיכון של התקפי היפוגליקמיה חמורים הקשורים בטיפול אינטנסיבי באינסולין. מתן המוני איון מספיק חשוב איון השתלה מוצלחת. עם זאת, מאפיין התורם, רכש איברים ושימור להשפיע על התוצאה בידוד<sup&gt; 2</sup&gt;. באוניברסיטת אילינוי בשיקגו (UIC) פיתחנו פרוטוקול בידוד מוצלח עם שיפוע טיהור משופרת<sup&gt; 3</sup&gt;. התוכנית החלה בינואר 2004, ויותר מ -300 isolations בוצעו עד נובמבר 2008. Pancreata נשלחו בקור פתרונות שימור (UW, אוניברסיטת ויסקונסין או HTK, היסטידין-טריפטופן Ketoglutarate)<sup&gt; 4-7</sup&gt; אל המעבדה תא בידוד בבית UIC לבידוד איון. איי הלבלב בודדו בשיטת UIC, שהיא גירסה שונה של השיטה המתוארת במקור על ידי Ricordi<em&gt; ואח&#39;</em&gt;<sup&gt; 8</sup&gt;. בקצרה, לאחר ניקוי הלבלב מן הרקמה הסובבת, זה היה perfused עם פתרון אנזים (Serva collagenase + ניטרלי פרוטאז או סיגמא האנזים V). הלבלב נפוחה ואז הועברה לתא העיכול Ricordi, המחובר שונה, מערכת הדם בצינור סגור, וחיממה עד 37 ° C. במהלך העיכול, החדר היה מזועזע בעדינות. דוגמאות נלקחו ברציפות כדי לפקח על התקדמות העיכול. לאחר איים חינם התגלו מתחת למיקרוסקופ, את מערכת העיכול נעצר על ידי שטיפה קר (4 ° C) RPMI פתרון הדילול (Mediatech, הרנדון, VA) לתוך מערכת הדם לדלל את האנזים. לאחר שנאספו לרחוץ M199 התקשורת בתוספת אלבומין אדם, רקמת נדגמה עבור לספור טיהור טרום מודגרות עם פתרון UW לפני הטיהור. תהליך טיהור שיפורט בחלק ב &#39;: טיהור והתרבות של איי האדם.

Watch this Scientific Journal Video about Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue at JoVE.com

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

השגת איכות גבוהה וכמות נאותה של איים האנושי הוא אחד התנאים המוקדמים הבולטים איון להשתלה מוצלחת. בסרטון הזה, אנו מתארים צעד אחר צעד את נוהלי בידוד איון האדם הלבלב (אני חלק: העיכול אוסף של רקמת לבלב) בשיטה אוטומטית שונה.

בידוד האדם לבלב: אני חלק: העיכול אוסף של רקמת לבלב

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

הלבלב Murine איילט בידוד

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

הלבלב האנושי בידוד איילט: חלק ב: טיהור והתרבות של איי האדם

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

בידוד של בתאי גזע xenografts סרטן הלבלב האנושי

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Computer-assisted Large-scale Visualization and Quantification of Pancreatic Islet Mass, Size Distribution and Architecture

בסיוע מחשב ויזואליזציה בקנה מידה גדול כימות המוניים הלבלב איילט, התפלגות גודל ואדריכלות

The pancreatic islet is a unique micro-organ composed of several hormone secreting endocrine cells such as beta-cells (insulin), alpha-cells (glucagon), ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

שיטה לבידוד עכבר הלבלב איילט וקביעת תאית cAMP

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

הכנת תאי לבלב acinar לצורך סידן ההדמיה, פגיעה בתא המדידות, וזיהום adenoviral

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

בידוד והתרבות של תאי לבלב הראשיים acinar עכבר

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

פרוטוקול פשוט יעילות גבוהה לבידוד איון הלבלב של עכברים

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

הלבלב איון הטבעה למקטעי פרפין

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

הדמיה של סידן דינמיקה באוכלוסיות משנה של תאים הלבלב איון של העכבר

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...