Name: human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue
Uploaded: 2009-05-26T00:00:00
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शिकागो में इलिनोइस विश्वविद्यालय के रूप में अच्छी तरह के रूप में आइलेट सेल संसाधन केंद्र NIH अनुदान (RFA-05-003 आर आर), क्रिस्टोफर फाउंडेशन, Efroymson फाउंडेशन, और Tellabs फाउंडेशन से धन के द्वारा समर्थित.

1. सुविधा सेटअप <ol><li> मानव आइलेट अलगाव एक समय संवेदनशील प्रक्रिया है कि एक साथ काम करना शामिल है, और इसलिए, चार व्यक्तियों को इस प्रक्रिया का संचालन करने के लिए की जरूरत है. टीम सर्जन है, जो dissects और अग्न्याशय c...

<ol>
	<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li><li>Nano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+for+allotransplantation:+variables+associated+with+successful+islet+yield+and+graft+function.">Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function.</a> Diabetologia. 48, 906-912 (2005).</li><li>Barbaro, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+human+pancreatic+islet+purification+with+the+refined+UIC-UB+density+gradient.">Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient.</a> Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).</li><li>Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pancreas+preservation+prior+to+islet+isolation.+Cold+ischemic+tolerance.">Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance.</a> Transplantation. 59, 689-694 (1995).</li><li>Fridell, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+and+University+of+Wisconsin+solution+for+organ+preservation+in+clinical+pancreas+transplantation.">Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation.</a> Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).</li><li>Potdar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+experience+using+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+in+clinical+pancreas+transplantation.">Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation.</a> Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).</li><li>Salehi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+islet+isolation+outcomes+from+pancreata+preserved+with+Histidine-Tryptophan+Ketoglutarate+versus+University+of+Wisconsin+solution.">Human islet isolation outcomes from pancreata preserved with Histidine-Tryptophan Ketoglutarate versus University of Wisconsin solution.</a> Transplantation. 82, 983-985 (2006).</li><li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+islet+isolation+from+human+pancreas.">Automated islet isolation from human pancreas.</a> Diabetes. 38, 140-142 (1989).</li><li>Hanley, S. C., Paraskevas, S., Rosenberg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+and+isolation+variables+predicting+human+islet+isolation+success.">Donor and isolation variables predicting human islet isolation success.</a> Transplantation. 85, 950-955 (2008).</li><li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+human+islet+of+Langerhans+isolation+yields.">Factors affecting human islet of Langerhans isolation yields.</a> Transplant Proc. 34, 826-827 (2002).</li></ol>

वहाँ अलगाव 9,10 परिणाम को प्रभावित करने वाले कारकों की एक किस्म हैं. उनमें से, अग्नाशय के ऊतक के पाचन एक प्रमुख भूमिका निभाता है. अपने स्वयं के मानव आइलेट अलगाव अनुभव के आधार पर, हम निम्नलिखित महत्वपूर्ण ब?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ice Slush Machine</td>
<td>equipment</td>
<td>Taylor Company</td>
<td>K4036546</td>
<td>make sterile ice</td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>424803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1</td>
<td>equipment</td>
<td>Leica Diagnostic Instrument Co</td>
<td>4103</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Culture Dish with 2 mm Grid</td>
<td>equipment</td>
<td>Nunc Brand Products</td>
<td>174926</td>
<td>islet counting</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Water Bath EX7</td>
<td>equipment</td>
<td>NesLab</td>
<td>105361058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>equipment</td>
<td>IBI:IR</td>
<td>60444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoBloc Balance AB 104-S</td>
<td>equipment</td>
<td>Metler Toledo</td>
<td>1119430864</td>
<td>measure pancreas weight</td>
</tr>
<tr>
<td>MasterFlex II Speed Controller</td>
<td>equipment</td>
<td>Cole Parmer Instrument Co</td>
<td>J00006445</td>
<td>adjust flow speed during degestion</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Sight DS L1</td>
<td>equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>217267</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Perfusion Unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Custom Made/Swiss</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cooler for perfusion unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>3013P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ricordi Chamber</td>
<td>equipment</td>
<td>University of Miami</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI dilution solution</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99783024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>University of Wisconcin (UW) solution</td>
<td>reagent</td>
<td>DURAMED</td>
<td>1000-46-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hank's Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-597-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25% Human Albumin</td>
<td>reagent</td>
<td>GRIFOLS</td>
<td>NDC 61953-0002-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>M199 media (wash solution)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-784-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002937</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neutral Protease NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002936</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>reagent</td>
<td>Cardinal Health</td>
<td>29906-004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cefazolin</td>
<td>reagent</td>
<td>West-Ward Pharmaceutical</td>
<td>NDC 0143-9924-90</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dithizone</td>
<td>reagent</td>
<td>Sigma </td>
<td>D5130</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue

टाइप 1 मधुमेह के प्रबंधन को भारी है, दोनों व्यक्ति और समाज के लिए, 100 से अधिक अरब डॉलर सालाना लागत. ग्लूकोज की निगरानी और नए इंसुलिन योगों के व्यापक उपयोग के बावजूद, कई व्यक्तियों को अभी भी विनाशकारी माध्यमिक जटिलताओं के विकास. अग्नाशय आइलेट प्रत्यारोपण मधुमेह के रोगियों में सामान्य ग्लूकोज नियंत्रण के पास बहाल कर सकते हैं<sup&gt; 1</sup&gt; गंभीर hypoglycemic एपिसोड है कि इंसुलिन गहन चिकित्सा के साथ जुड़े रहे हैं के जोखिम के बिना. पर्याप्त आइलेट जन प्रदान सफल आइलेट प्रत्यारोपण के लिए महत्वपूर्ण है. हालांकि, दाता विशेषता, अंग खरीद और संरक्षण को अलग परिणाम को प्रभावित<sup2&gt;</sup&gt;. शिकागो में इलिनोइस विश्वविद्यालय (यूआईसी) पर हम एक बेहतर शुद्धि ढाल के साथ एक सफल अलगाव प्रोटोकॉल विकसित किया है<sup&gt; 3</sup&gt;. कार्यक्रम जनवरी 2004 में शुरू किया था, और 300 से अधिक isolations नवंबर 2008 के लिए प्रदर्शन किया गया. pancreata ठंड संरक्षण समाधान में भेजा गया था (UW, के विस्कॉन्सिन या HTK के विश्वविद्यालय, हिस्टडीन Tryptophan ketoglutarate)<sup4-7&gt;</sup&gt; सेल यूआईसी पर अलगाव प्रयोगशाला आइलेट अलगाव के लिए. अग्नाशय islets यूआईसी विधि है, जो मूल रूप से Ricordi द्वारा वर्णित विधि का एक संशोधित संस्करण है का उपयोग कर अलग किया गया<em&gt; एट अल</em&gt;<sup8&gt;</sup&gt;. संक्षेप में, आसपास के ऊतकों से अग्न्याशय की सफाई के बाद, यह एंजाइम समाधान (Serva Collagenase + तटस्थ Protease या सिग्मा वी एंजाइम) के साथ perfused था. distended अग्न्याशय तो Ricordi पाचन चैम्बर के लिए स्थानांतरित किया गया था, एक संशोधित, बंद संचलन टयूबिंग प्रणाली से जुड़ा है, और 37 सी. सेंटीग्रेड तक गर्म पाचन के दौरान, कक्ष धीरे हिल गया था. नमूने लगातार पाचन प्रगति की निगरानी करने के लिए ले जाया गया. एक बार मुक्त islets खुर्दबीन के नीचे पाया गया है, पाचन ठंड निस्तब्धता से बंद कर दिया गया था (4 डिग्री सेल्सियस) परिसंचरण एंजाइम पतला प्रणाली में RPMI कमजोर पड़ने समाधान (Mediatech, Herndon, VA). बाद एकत्र की है और M199 मानव albumin के साथ पूरक मीडिया में धोया जा रहा है, ऊतक पूर्व शुद्धि गिनती के लिए नमूना था और शुद्धि पहले UW समाधान के साथ incubated. शोधन और मानव islets की संस्कृति: शोधन प्रक्रिया भाग II में वर्णित किया जाएगा.

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Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

उच्च गुणवत्ता और मानव islets की उचित मात्रा में हासिल सफल आइलेट प्रत्यारोपण के लिए प्रमुख किसी और चीज की की है. इस वीडियो में, हम कदम से कदम का वर्णन मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव के लिए प्रक्रियाओं (भाग मैं: पाचन और अग्नाशय के ऊतकों का संग्रह) एक संशोधित स्वचालित पद्धति का उपयोग कर.

मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव: भाग मैं: पाचन और अग्नाशय के ऊतक का संग्रह

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine अग्नाशय आइलेट अलगाव

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव: भाग द्वितीय: और मानव islets के शोधन और संस्कृति

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

मानव अग्नाशय के कैंसर xenografts से स्टेम सेल के अलगाव

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Computer-assisted Large-scale Visualization and Quantification of Pancreatic Islet Mass, Size Distribution and Architecture

कम्प्यूटर की सहायता विज़ुअलाइज़ेशन बड़े पैमाने पर और अग्नाशय आइलेट मास, Size वितरण और वास्तुकला की मात्रा

The pancreatic islet is a unique micro-organ composed of several hormone secreting endocrine cells such as beta-cells (insulin), alpha-cells (glucagon), ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

माउस अग्नाशय आइलेट अलगाव और intracellular शिविर निर्धारण के लिए एक विधि

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

कैल्शियम इमेजिंग का प्रयोजन, सेल चोट माप, और adenoviral संक्रमण के लिए अग्नाशय कोष्ठकी कक्ष की तैयारी

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

माउस प्राथमिक अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

चूहे से अग्नाशयी आइलेट अलगाव के लिए एक सरल उच्च दक्षता प्रोटोकॉल

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

आयल सेक्शन के लिए अग्नाशय टाप एंबेडिंग

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

माउस अग्नाशय आइलेट कोशिकाओं की उपआबादी में इमेजिंग कैल्शियम गतिशीलता

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...