Name: human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue
Uploaded: 2009-05-26T00:00:00
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시카고 일리노이 대학뿐만 아니라 아일릿 세포 자원 센터 NIH 그랜트 (RFA - RR 05-003), 크리스토퍼 재단 Efroymson 재단과 Tellabs 재단에서 기금을 지원.

1. 시설 설치 <ol><li> 인간 아일릿 절연은 팀웍과 관련된 시간 민감한 절차이며, 따라서, 넷 개인이 절차를 수행하기 위해 필요합니다. 팀은 dissects과 췌장을 cannulates 외과 의사에 의해 리드입니다. </li><li> 아일릿 절연은 팀이 UIC 아일릿 격리 시설을 입력하는 순간을 시작합니다. 팀 구성원은 필요한 모든 장비는 원심 분리기와 같은 검사입니다 켜져 있는지 확인하십시오. 그들은 또한 모든 후즈과 ...

<ol>
	<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li><li>Nano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+for+allotransplantation:+variables+associated+with+successful+islet+yield+and+graft+function.">Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function.</a> Diabetologia. 48, 906-912 (2005).</li><li>Barbaro, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+human+pancreatic+islet+purification+with+the+refined+UIC-UB+density+gradient.">Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient.</a> Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).</li><li>Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pancreas+preservation+prior+to+islet+isolation.+Cold+ischemic+tolerance.">Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance.</a> Transplantation. 59, 689-694 (1995).</li><li>Fridell, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+and+University+of+Wisconsin+solution+for+organ+preservation+in+clinical+pancreas+transplantation.">Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation.</a> Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).</li><li>Potdar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+experience+using+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+in+clinical+pancreas+transplantation.">Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation.</a> Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).</li><li>Salehi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+islet+isolation+outcomes+from+pancreata+preserved+with+Histidine-Tryptophan+Ketoglutarate+versus+University+of+Wisconsin+solution.">Human islet isolation outcomes from pancreata preserved with Histidine-Tryptophan Ketoglutarate versus University of Wisconsin solution.</a> Transplantation. 82, 983-985 (2006).</li><li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+islet+isolation+from+human+pancreas.">Automated islet isolation from human pancreas.</a> Diabetes. 38, 140-142 (1989).</li><li>Hanley, S. C., Paraskevas, S., Rosenberg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+and+isolation+variables+predicting+human+islet+isolation+success.">Donor and isolation variables predicting human islet isolation success.</a> Transplantation. 85, 950-955 (2008).</li><li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+human+islet+of+Langerhans+isolation+yields.">Factors affecting human islet of Langerhans isolation yields.</a> Transplant Proc. 34, 826-827 (2002).</li></ol>

절연 결과 9,10 영향을 미치는 다양한 요소가 있습니다. 그 중에서도 췌장 조직의 소화는 현저한 역할을한다. 우리 자신의 인간 아일릿 절연 경험을 바탕으로, 우리는 잠재적으로 아일릿 수율과 품질에 영향을 미칠 수있는 중요한 포인트 아래와 요약. <ol><li> 효소의 종류가 활용되면 소화 시간이 다릅니다. </li><li> 즉시 완전히 acinar 조직에서 분리 아일 레츠의 40~50%로 소화가 희석 솔루션을 추가?...

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ice Slush Machine</td>
<td>equipment</td>
<td>Taylor Company</td>
<td>K4036546</td>
<td>make sterile ice</td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>424803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1</td>
<td>equipment</td>
<td>Leica Diagnostic Instrument Co</td>
<td>4103</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Culture Dish with 2 mm Grid</td>
<td>equipment</td>
<td>Nunc Brand Products</td>
<td>174926</td>
<td>islet counting</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Water Bath EX7</td>
<td>equipment</td>
<td>NesLab</td>
<td>105361058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>equipment</td>
<td>IBI:IR</td>
<td>60444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoBloc Balance AB 104-S</td>
<td>equipment</td>
<td>Metler Toledo</td>
<td>1119430864</td>
<td>measure pancreas weight</td>
</tr>
<tr>
<td>MasterFlex II Speed Controller</td>
<td>equipment</td>
<td>Cole Parmer Instrument Co</td>
<td>J00006445</td>
<td>adjust flow speed during degestion</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Sight DS L1</td>
<td>equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>217267</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Perfusion Unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Custom Made/Swiss</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cooler for perfusion unit</td>
<td>equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>3013P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ricordi Chamber</td>
<td>equipment</td>
<td>University of Miami</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI dilution solution</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99783024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>University of Wisconcin (UW) solution</td>
<td>reagent</td>
<td>DURAMED</td>
<td>1000-46-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hank's Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-597-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25% Human Albumin</td>
<td>reagent</td>
<td>GRIFOLS</td>
<td>NDC 61953-0002-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>M199 media (wash solution)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-784-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002937</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neutral Protease NB1 GMP grade</td>
<td>reagent</td>
<td>SERVA Electrophoresis</td>
<td>N0002936</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>reagent</td>
<td>Cardinal Health</td>
<td>29906-004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cefazolin</td>
<td>reagent</td>
<td>West-Ward Pharmaceutical</td>
<td>NDC 0143-9924-90</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dithizone</td>
<td>reagent</td>
<td>Sigma </td>
<td>D5130</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human pancreatic islet isolation: part i: digestion and collection of pancreatic tissue

1 형 당뇨병의 관리는 매년 100여 억 달러를 비용, 모두 개인과 사회에, 부담합니다. 포도당 모니터링 및 새로운 인슐린 공법의 광범위한 사용에도 불구하고, 많은 사람은 여전히​​ 파괴적인 보조 합병증을 개발합니다. 췌장 아일릿 이식은 당뇨병 환자에서 정상적인 혈당 조절 근처에 복원할 수 있습니다<sup&gt; 1</sup&gt;, 집중적인 인슐린 요법과 관련된 심각한 혈당 에피소드의 위험이없이. 충분한 아일릿 질량을 제공하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 중요합니다. 그러나 기증자 특성, 기관 조달 및 보존은 절연 결과에 영향을<sup&gt; 2</sup&gt;. 시카고 일리노이 대학 (UIC)에서 우리는 개선 정화 기울기와 함께 성공적인 격리 프로토콜을 개발했습니다<sup&gt; 3</sup&gt;. 이 프로그램은 2004 년 1 월 시작, 그리고 300 개 이상의 isolations 11 월 2008까지 수행했다. pancreata는 (UW, 위스콘신 또는 HTK 대학, 히스티딘 - 트립토판 Ketoglutarate) 차가운 보존 솔루션에 보내진<sup&gt; 4-7</sup&gt; 아일릿 절연을위한 UIC에서 셀 절연 연구실 있습니다. 췌장 아일 레츠는 원래 Ricordi에 기술된 방법의 수정된 버전입니다 UIC 방법을 사용하여 격리되었다<em&gt; 외</em&gt;<sup&gt; 8</sup&gt;. 간단히, 주변 조직에서 췌장 청소 후에, 그것은 효소 솔루션 (Serva Collagenase + 중성 프로 테아제 또는 시그마 V 효소)와 perfused했습니다. 커지는 췌장은 다음 Ricordi의 소화 챔버로 전학 수정, 폐쇄 순환 튜브 시스템에 연결하고, 37 ° C.까지 예열했다 소화 동안 챔버가 부드럽게 흔들리고되었습니다. 샘플은 소화의 진행 상태를 모니터링하는 연속적으로 촬영했다. 무료 아일 레츠가 현미경으로 발견되었습니다되면, 소화가 추위 플러싱에 의해 중지되었습니다 (4 ° C) 효소를 희석하기 위해 순환 시스템에 RPMI 희석 용액 (Mediatech, 헤른던, VA). 수집과 인간의 알부민과 보충 M199 미디어 씻은 후에, 조직은 미리 정화 개수에 대한 샘플과 정화 ​​전에 UW 솔루션 incubated했다. 인간 아일 레츠의 정화와 문화 : 정제 과정은 부 II에서 설명하는 것입니다.

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Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

높은 품질과 인간 아일 레츠의 적절한 수량을 달성하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 유명 전제 조건 중 하나입니다. 이 비디오에서는, 우리는 단계별로 설명을 인간의 췌장 아일릿 절연을위한 절차 : 수정된 자동화된 방법을 사용하여 (부분 I 소화 및 췌장 조직의 수집).

인간 췌장 아일릿 격리 : 부품 I : 소화 및 췌장 조직의 수집

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine 췌장 아일릿 격리

연구

생물학

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

인간 췌장 아일릿 절연 : 2 부 : 인간 아일 레츠의 정화와 문화

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

인간 췌장암의 Xenografts에서 줄기 세포의 분리

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Computer-assisted Large-scale Visualization and Quantification of Pancreatic Islet Mass, Size Distribution and Architecture

컴퓨터를 이용한 대규모 시각화 및 췌장 아일릿 질량, 크기 유통과 건축의 부량

The pancreatic islet is a unique micro-organ composed of several hormone secreting endocrine cells such as beta-cells (insulin), alpha-cells (glucagon), ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

마우스 췌장 섬의 분리 및 세포 내 cAMP를 결정하는 방법

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

칼슘 이미징의 목적, 세포 상해 측정 및 아데노 바이러스 감염 췌장 포상 세포의 준비

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

마우스 기본 췌장 포상 세포의 분리 및 문화

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

마우스에서 췌장 췌도 격리를 위한 간단한 고효율 프로토콜

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

췌 장 섬 파라핀 섹션에 대 한 포함

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

마우스 췌도 세포의 하위 집단에 있는 화상 진찰 칼슘 역학

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...