Name: two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos
Uploaded: 2009-02-16T00:00:00
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हम प्रारंभिक सलाह के लिए एक दो photon माइक्रोस्कोप का उपयोग करने के लिए स्थानीय ऊतकों को नुकसान, समय चूक इमेजिंग के लिए बढ़ते पर सलाह के लिए कैथी Joubin, और विचार विमर्श के लिए Sagasti और ​​Portera - Cailliau प्रयोगशालाओं बनाने पर मार्क Terasaki धन्यवाद. प्रारंभिक प्रयोगों के द्वारा वुड्स होल, एमए में समुद्री जैव लेबोरेटरीज में एक घास फाउंडेशन फैलो के रूप में के रूप में प्रदर्शन किया गया. Sagasti प्रयोगशाला में काम व्हाइटहॉल फाउंडेशन, Klingenstein फाउंडेशन, और एक बायोलॉजिकल साइंसेज में Burroughs Wellcome कोष कैरियर पुरस्कार से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था.

भाग 1: लंबी अवधि के इमेजिंग के लिए बढ़ते zebrafish भ्रूण <ol><li> Embedding के लिए 1% कम पिघल agarose समाधान तैयार करें. डि पानी में एक छोटे से ट्यूब और एक हीटिंग ब्लॉक में 42 डिग्री सेल्सियस पर दुकान में माइक्रोवेव विभाज्य में ह?...

<ol>
	<li>Sagasti, A., Guido, M. R., Raible, D. W., Schier, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repulsive+interactions+shape+the+morphologies+and+functional+arrangement+of+zebrafish+peripheral+sensory+arbors.">Repulsive interactions shape the morphologies and functional arrangement of zebrafish peripheral sensory arbors.</a> Curr Biol. 15, 804-814 (2005).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed Eng Online. 2 (13), (2003).</li><li>Svoboda, K., Yasuda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+two-photon+excitation+microscopy+and+its+applications+to+neuroscience.">Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience.</a> Neuron. 50, 823-839 (2006).</li><li>Sacconi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+multiphoton+nanosurgery+on+cortical+neurons.">In vivo multiphoton nanosurgery on cortical neurons.</a> J Biomed Opt. 12, 050502-050502 (2007).</li><li>Galbraith, J. A., Terasaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+damage+in+thick+specimens+by+multiphoton+excitation.">Controlled damage in thick specimens by multiphoton excitation.</a> Mol Biol Cell. 14, 1808-1817 (2003).</li><li>Yanik, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgery:+functional+regeneration+after+laser+axotomy.">Neurosurgery: functional regeneration after laser axotomy.</a> Nature. 432, 822-822 (2004).</li><li>Quinto-Su, P. A., Venugopalan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+laser+cellular+microsurgery.">Mechanisms of laser cellular microsurgery.</a> Methods Cell Biol. 82, 113-151 (2007).</li></ol>

हम ठीक परिधीय संवेदी axons axotomize और रहने वाले zebrafish भ्रूण में सीधे उत्थान निरीक्षण वर्णित तरीकों का इस्तेमाल किया है. लंबी अवधि के समय चूक zebrafish में confocal इमेजिंग vivo में कई विकास की प्रक्रिया का पालन करने के लिए ?...

two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Zebrafish लंबे समय के लिए रहने वाले पारदर्शी भ्रूण के समय चूक इमेजिंग द्वारा विकास के सेलुलर और आणविक तंत्र का अध्ययन उपयोग किया गया है. यहाँ हम एक विधि का वर्णन करने के लिए दीर्घकालिक इमेजिंग के लिए zebrafish भ्रूण माउंट और प्रदर्शन कैसे को स्वचालित करने के लिए समय चूक एक confocal खुर्दबीन का उपयोग कर छवियों का कब्जा. हम भी एक नियंत्रित, zebrafish में परिधीय संवेदी axons एक दो photon माइक्रोस्कोप पर घुड़सवार एक femtosecond लेजर के ध्यान केंद्रित शक्ति का उपयोग कर के अलग - अलग शाखाओं को सटीक क्षति बनाने की विधि का वर्णन. सफल axotomy दो photon के लिए पैरामीटर प्रत्येक माइक्रोस्कोप के लिए अनुकूलित किया जाना चाहिए. हम दोनों एक कस्टम बनाया दो photon माइक्रोस्कोप और एक Zeiss 510 confocal दो photon / दो उदाहरण प्रदान करने पर दो photon axotomy प्रदर्शन करेंगे. Zebrafish त्रिपृष्ठी संवेदी न्यूरॉन्स एक ट्रांसजेनिक लाइन व्यक्त संवेदी न्यूरॉन एक विशिष्ट प्रमोटर द्वारा संचालित GFP में visualized किया जा सकता है . हम इस zebrafish त्रिपृष्ठी मॉडल अनुकूलित करने के लिए सीधे zebrafish भ्रूण में रहने वाले संवेदी अक्षतंतु पुनर्जनन निरीक्षण. भ्रूण tricaine साथ anesthetized हैं और agarose की एक बूंद के भीतर तैनात रूप में यह solidifies. Immobilized भ्रूण के रूप में एक इमेजिंग phenylthiourea Ringers (PTU) के साथ भरा कक्ष के भीतर सील कर रहे हैं. हमने पाया है कि भ्रूण को लगातार 12-48 घंटे के लिए किया जा सकता है इन कक्षों में imaged. एक एकल छवि confocal तो axotomy के वांछित साइट का निर्धारण करने के लिए कब्जा कर लिया है. ब्याज की क्षेत्र में कम, गैर हानिकारक शक्ति के तहत संवेदी axons इमेजिंग द्वारा दो photon माइक्रोस्कोप पर स्थित है. Axotomy के वांछित साइट पर में zooming के बाद, बिजली और बढ़ जाता है और कि परिभाषित क्षेत्र के एक एकल स्कैन अक्षतंतु तोड़ करने के लिए पर्याप्त है. एकाधिक स्थान इमेजिंग समय चूक तो एक confocal खुर्दबीन पर सीधे चोट से axonal वसूली का पालन है.

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Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

यहाँ हम दीर्घकालिक इमेजिंग, दो photon इमेजिंग और ऊतक नुकसान तकनीक, और समय चूक confocal इमेजिंग के लिए zebrafish भ्रूण के बढ़ते के लिए एक विधि का वर्णन.

दो photon axotomy और लाइव zebrafish भ्रूण में समय चूक confocal इमेजिंग

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा Zebrafish भ्रूण मस्तिष्क की इमेजिंग लाइव

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

व्यक्तिगत Zebrafish भ्रूण में न्यूरॉन्स और तंत्रिका शिखा कोशिकाओं के सेल गतिशीलता और actin cytoskeleton के लाइव इमेजिंग

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

SiRNA अभिकर्मक के बाद समय चूक सूत्रीविभाजन की इमेजिंग

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

दो फोटॉन आधारित लाइव Zebrafish भ्रूण में photoactivation

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

के ट्रांसप्लांटेशन GFP chimeric Zebrafish भ्रूण में रेटिना और मस्तिष्क के विकास के लाइव इमेजिंग के लिए Blastomeres व्यक्त

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

बहुरंगा ट्रांसजेनिक Zebrafish की इमेजिंग समय चूक: Visualizing रेटिना स्टेम लक्षित Neuronal सेल एबलेशन द्वारा सक्रिय कक्ष

High-resolution time-lapse imaging of living zebrafish larvae can be utilized to visualize how biological processes unfold (for review see 1). Compound ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

समय चूक प्रारंभिक Embryogenesis में माइक्रोस्कोपी Caenorhabditis एलिगेंस

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

स्टोर संचालित जीवित कोशिकाओं में कैल्शियम प्रविष्टि प्रतिदीप्ति आधारित मापन संवर्धित सेल कैंसर से कंकाल की मांसपेशी फाइबर

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

समय चूक माइक्रोस्कोपी के प्रयोग में कल्पना अनॉक्सिता प्रेरित निलंबित एनिमेशन<em&gt; सी. एलिगेंस</em&gt; भ्रूण

Caenorhabdits elegans has been used extensively in the study of stress resistance, which is facilitated by the transparency of the adult and embryo stages ...

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

लंबी अवधि के, उच्च संकल्प Confocal समय चूक की इमेजिंग<em&gt; Arabidopsis अंकुर</emअंकुरण के दौरान&gt; एपिडर्मिस

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue ...