Name: two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos
Uploaded: 2009-02-16T00:00:00
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우리는 현지 시간 저속 영상에 대한 장착에 대한 조언을 조직 손상, 캐시 Joubin 및 토론을위한 Sagasti 및 Portera - Cailliau 실험실을 생성하기 위해 두 광자 현미경을 사용하여 초기 조언 마크 데라 사키 감사합니다. 초기 실험은 우즈 홀, MA에있는 해양 생물 연구소에서 그라스 재단 연구원처럼 의해 수행되었다. Sagasti 실험실 작업은 화이트홀 재단 Klingenstein 재단, 그리고 생명 공학 버로우즈 웰컴 기금 경력 수상의 보조금에 의해 지원되었다.

1 부 : 장기 이미징 장착 zebrafish의 배아 <ol><li> 삽입을위한 1퍼센트 낮은 용해 아가로 오스 솔루션을 준비합니다. 작은 튜브와 섭씨 42 도에 가열 블록에 저장에 전자렌지, 나누어지는에서 가열하여 DI 물의 아가로 오스를 디졸브. </li><li> 이미징을위한 배아를 선택하고 부드럽게 집게로 분리 chorion를 당기는하여 chorions를 제거합니다. 배아는 색소의 형성을 억제하기 위해 22-24시간 포스트 수정 (HPF)?...

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	<li>Sagasti, A., Guido, M. R., Raible, D. W., Schier, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repulsive+interactions+shape+the+morphologies+and+functional+arrangement+of+zebrafish+peripheral+sensory+arbors.">Repulsive interactions shape the morphologies and functional arrangement of zebrafish peripheral sensory arbors.</a> Curr Biol. 15, 804-814 (2005).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed Eng Online. 2 (13), (2003).</li><li>Svoboda, K., Yasuda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+two-photon+excitation+microscopy+and+its+applications+to+neuroscience.">Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience.</a> Neuron. 50, 823-839 (2006).</li><li>Sacconi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+multiphoton+nanosurgery+on+cortical+neurons.">In vivo multiphoton nanosurgery on cortical neurons.</a> J Biomed Opt. 12, 050502-050502 (2007).</li><li>Galbraith, J. A., Terasaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+damage+in+thick+specimens+by+multiphoton+excitation.">Controlled damage in thick specimens by multiphoton excitation.</a> Mol Biol Cell. 14, 1808-1817 (2003).</li><li>Yanik, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgery:+functional+regeneration+after+laser+axotomy.">Neurosurgery: functional regeneration after laser axotomy.</a> Nature. 432, 822-822 (2004).</li><li>Quinto-Su, P. A., Venugopalan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+laser+cellular+microsurgery.">Mechanisms of laser cellular microsurgery.</a> Methods Cell Biol. 82, 113-151 (2007).</li></ol>

우리는 정확하게 주변 감각 axons을 axotomize하고 직접 생활 zebrafish 배아에서 재생을 관찰하는 설명 방법을 사용했습니다. zebrafish에서 장기 시간이 경과 공촛점 영상은 생체내 많은 발달 과정을 관찰하는 데 사용할 수 있습니다. 설명한 두 광자 axotomy 절차는 여러 실험 목표 수정할 수 있습니다. 우리는 휴대폰 본체보다는 주변 축삭의 가지에 확대하여 전체 삼차 신경 감각 세포의 시체를 ablate...

two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Zebrafish는 오래 살아있는 투명한 배의 시간이 경과 이미징에 의해 개발의 세포 및 분자 메커니즘을 연구하기 위해 이용되었다. 여기 우리는 장기 이미징을위한 zebrafish의 배아를 탑재하고 공촛점 현미경을 사용하여 시간 경과 이미지 캡처를 자동화하는 방법을 보여주는 방법을 설명합니다. 우리는 또한 두 개의 광자 현미경에 장착된 femtosecond 레이저의 초점을 맞춘 전력을 사용하여 zebrafish에 주변 감각 axons의 개별 지점 관리, 정확한 손상을 만드는 방법을 설명합니다. 성공적인 두 광자 axotomy 대한 매개 변수는 각 현미경에 최적화된해야합니다. 두 가지 예제를 제공하기 위해 사용자 정의 내장된 두 개의 광자 현미경 및 자이스 혈구 510 공촛점 / 두 광자 모두 두 광자 axotomy을 설명합니다. Zebrafish 삼차 감각 뉴런은 감각 뉴런 특정 발기인 1 구동 유전자 변형 라인 표현 GFP에 시각하실 수 있습니다. 우리는 직접 zebrafish 배아 생활 감각 축삭 재생을 관찰하기 위해이 zebrafish 삼차 모델을 적응있다. 배아는 tricaine와 anesthetized하고 그것이 굳은로 아가로 오스의 드롭 내에 위치. 고정 배아는 phenylthiourea (PTU) 링거스 가득 이미징 챔버 내에 봉인하고 있습니다. 우리는 배아가 지속적으로 12~48시간 이러한 실에서 몇 군데 수있는 것으로 나타났습니다. 하나 공촛점 이미지 다음 axotomy의 원하는 사이트를 결정하기 위해 캡처합니다. 관심 지역은 이미징 낮은 비 피해 전원에서 감각 axons하여 두 광자 현미경에 위치하고 있습니다. axotomy의 원하는 위치에 확대 후, 전원이 증가하고 정의된 지역의 한 검사는 축삭을 끊을 수있는 충분한입니다. 여러 장소 시간 저속 영상 그러면 바로 부상에서 axonal 회복을 관찰할 수 공촛점 현미경에 설정됩니다.

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Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

여기 우리는 장기적인 영상, 두 광자 이미징 및 조직 손상을 기술하고, 시간 경과 공촛점 이미징에 대한 zebrafish 배아를 장착하는 방법을 설명합니다.

라이브 zebrafish의 배아에서 두 광자의 axotomy하고 시간이 경과 공촛점 영상

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

공촛점 현미경으로 Zebrafish 배아 뇌 영상 라이브

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

연구

생물학

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

세포 운동성 및 Zebrafish 태아의 개별 뉴런과 신경 크레스트 세포의 굴지의 Cytoskeleton의 라이브 영상

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

siRNA Transfection 후의 유사 분열의 시간 저속 영상

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

라이브 Zebrafish 태아에서 두 광자 기반 Photoactivati​​on

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

의 이식 GFP - 표현 키메라 Zebrafish의 태아의 망막과 두뇌 개발의 라이브 영상에 대한 Blastomeres을

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

트렌스 제닉 Zebrafish의 여러 가지 빛깔의 시간 저속 영상 : 타겟의 연결을 세포 절제에 의해 활성화 떠올리 망막 줄기 세포

High-resolution time-lapse imaging of living zebrafish larvae can be utilized to visualize how biological processes unfold (for review see 1). Compound ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

상순 Embryogenesis의 시간 경과 현미경 Caenorhabditis 엘레간스

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

라이브 세포의 저장소로 작동하는 칼슘 항목의 형광 기반의 측정 : 교양 암 세포에서 골격근 섬유에

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

에 산소 결핍 유도 일시 중지 된 애니메이션을 시각화하기 위해 시간 경과에 현미경을 사용<em&gt; C. elegans</em&gt; 태아

Caenorhabdits elegans has been used extensively in the study of stress resistance, which is facilitated by the transparency of the adult and embryo stages ...

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

의 장기, 고해상도 공 촛점 시간 경과 영상<em&gt; Arabidopsis 떡잎</em발아시&gt; 표피

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue ...