Name: two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos
Uploaded: 2009-02-16T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos at JoVE.com

Biz zaman atlamalı görüntüleme için montaj tavsiye lokal doku hasarı, Kathy Joubin ve tartışmalar için Sagasti ve Portera-Cailliau laboratuvarları oluşturmak için bir iki foton mikroskop kullanarak ilk tavsiye Mark Terasaki teşekkür ederim. İlk deneyler, AS, MA Woods Hole Deniz Biyolojik Laboratuarlarında Çim Vakfı Üyesi olarak yapıldı. Whitehall Vakfı, Klingenstein Vakfı ve Biyolojik Bilimler Burroughs Wellcome Fonu Kariyer Ödülü hibe Sagasti laboratuarında çalışmalar desteklendi.

Bölüm 1: uzun vadeli görüntüleme Montaj zebrafish embriyolar <ol><li> Gömmek için% 1 düşük erime agaroz çözeltisi hazırlayın. Agaroz DI su ısıtma ile mikrodalga, küçük tüpler ve 42 santigrat derece bir ısıtma bloğu mağaza içine kısım çözülür. </li><li> Görüntüleme için embriyo seçin ve forseps ile yavaşça dışında koryon çekerek chorions kaldırmak. Embriyolar pigment oluşumunu engellediğini, 22-24 saat sonra döllenme (hpf)% 5 PTU Ringers çözüm içine yerleştirilebilir. ...

<ol>
	<li>Sagasti, A., Guido, M. R., Raible, D. W., Schier, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repulsive+interactions+shape+the+morphologies+and+functional+arrangement+of+zebrafish+peripheral+sensory+arbors.">Repulsive interactions shape the morphologies and functional arrangement of zebrafish peripheral sensory arbors.</a> Curr Biol. 15, 804-814 (2005).</li><li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed Eng Online. 2 (13), (2003).</li><li>Svoboda, K., Yasuda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+two-photon+excitation+microscopy+and+its+applications+to+neuroscience.">Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience.</a> Neuron. 50, 823-839 (2006).</li><li>Sacconi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+multiphoton+nanosurgery+on+cortical+neurons.">In vivo multiphoton nanosurgery on cortical neurons.</a> J Biomed Opt. 12, 050502-050502 (2007).</li><li>Galbraith, J. A., Terasaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+damage+in+thick+specimens+by+multiphoton+excitation.">Controlled damage in thick specimens by multiphoton excitation.</a> Mol Biol Cell. 14, 1808-1817 (2003).</li><li>Yanik, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgery:+functional+regeneration+after+laser+axotomy.">Neurosurgery: functional regeneration after laser axotomy.</a> Nature. 432, 822-822 (2004).</li><li>Quinto-Su, P. A., Venugopalan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+laser+cellular+microsurgery.">Mechanisms of laser cellular microsurgery.</a> Methods Cell Biol. 82, 113-151 (2007).</li></ol>

Biz tam periferik duyusal aksonlar axotomize ve oturma zebrafish embriyo rejenerasyon doğrudan gözlemlemek için açıklanan yöntemleri kullanmışlardır. Zebrafish Uzun vadeli zaman atlamalı konfokal görüntüleme in vivo birçok gelişimsel süreçlerini gözlemlemek için kullanılabilir. Açıklanan iki foton axotomy prosedürü, pek çok farklı deneysel amaçları için değiştirilebilir. Biz hücre gövdesi ziyade periferik akson bir şube yakınlaştırma, tüm trigeminal duyusal nöron hücre g?...

two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Zebra balığı uzun zaman atlamalı görüntüleme ile yaşayan şeffaf embriyonun gelişim hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılmıştır. Burada uzun vadeli görüntüleme için zebrafish embriyolar montaj ve konfokal bir mikroskop kullanılarak zaman atlamalı görüntüleri yakalama otomatikleştirmek için nasıl göstermek için bir yöntem açıklanmaktadır. Biz de iki foton mikroskop üzerine monte edilmiş bir femtosaniye lazer odaklı güç kullanarak zebrafish periferik duyusal aksonlar bireysel şube kontrollü, kesin hasar oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Başarılı iki foton axotomy için parametreler her mikroskop için optimize edilmiş olmalıdır. Biz iki örnek sağlamak için özel inşa edilen iki foton mikroskop ve Zeiss 510 konfokal / iki-foton hem de iki foton axotomy gösterecektir. Zebra balığı trigeminal duyusal nöronlar bir duyusal nöron spesifik 1 organizatörü tarafından yönlendirilen bir transgenik hattı ifade GFP görüntülenebilir. Biz doğrudan doğruya zebrafish embriyolar yaşayan duyusal akson rejenerasyonu gözlemlemek için bu zebrafish trigeminal model adapte var. Embriyolar tricaine ile anestezi ve agaroz bir damla içinde katılaşır olarak konumlandırılmış. İmmobilize embriyolar phenylthiourea (PTU) Zil sesleri ile dolu bir görüntüleme odası içinde mühürlenir. Embriyoların 12-48 saat boyunca sürekli bu odaları görüntülü olduğunu bulduk. Sonra tek bir konfokal görüntü axotomy istenen site belirlemek için yakalanır. Ilgi bölge görüntüleme, düşük, zararlı olmayan güç altında duyusal aksonlar tarafından iki foton mikroskop yer almaktadır. Axotomy istenen sitesinde yakınlaştırma sonra, gücü artar ve tanımlanan bölgenin tek bir tarama akson koparmaya yeterli olur. Çoklu konumu zaman atlamalı görüntüleme sonra yaralanma aksonal kurtarma doğrudan gözlemlemek için bir konfokal mikroskop kurulur.

Watch this Scientific Journal Video about Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos at JoVE.com

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Burada, uzun vadeli görüntüleme, iki foton görüntüleme ve doku hasarı teknikleri ve zaman atlamalı konfokal görüntüleme zebrafish embriyolar montaj için bir yöntem açıklanmaktadır.

İki foton axotomy ve zaman atlamalı konfokal görüntüleme canlı zebrafish embriyolar

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Konfokal Mikroskop Zebra balığı Embriyonik Beyin Görüntüleme Canlı

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Zebra balığı Embriyolar Bireysel Nöronlar ve Sinir Crest Hücreler Aktin Sitoiskelet Hücre Motilite ve Canlı Görüntüleme

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Zaman atlamalı Görüntüleme siRNA Transfeksiyon sonra Mitoz

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

Canlı Zebra balığı Embriyolar iki-Foton-Tabanlı fotoaktivasyon

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

Transplantasyon GFP of-Kimerik Zebra balığı Embriyolar Retina ve Beyin Gelişimi Canlı Görüntüleme blastomer ifade

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

Transgenik Zebra balığı Multicolor Time-lapse Görüntüleme: Hedefli Nöronal Hücre Ablasyon aktifleşir görselleştirme Retina Kök Hücreler

High-resolution time-lapse imaging of living zebrafish larvae can be utilized to visualize how biological processes unfold (for review see 1). Compound ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Erken Embriyo Oluşumu Zaman atlamalı Mikroskopi Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Canlı hücreler Mağaza çalışan Kalsiyum Giriş Floresans tabanlı Ölçümü: Kültür Kanseri Hücre gelen İskelet Kası Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

In Oksijen yetersizliği kaynaklı Asma Animasyon Visualize&#39;a Time Lapse Mikroskopi kullanın<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriyolar

Caenorhabdits elegans has been used extensively in the study of stress resistance, which is facilitated by the transparency of the adult and embryo stages ...

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Uzun süreli, yüksek çözünürlüklü Konfokal Time Lapse Görüntüleme<em&gt; Arabidopsis Kotiledon</emÇimlenme sırasında&gt; Epidermis

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue ...