Name: channelrhodopsin2 mediated stimulation of synaptic potentials at drosophila neuromuscular junctions
Uploaded: 2009-03-16T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions at JoVE.com

यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य RO1GM 33,205 अनुदान और महाराष्ट्र 067,284 नियंत्रण रेखा ग्रिफ़िथ संस्थानों और ब्राण्डैस विश्वविद्यालय गर्मियों स्नातक अनुसंधान न्यू जर्सी Hornstein छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित किया गया. वुड्स होल, एमए में: इस तकनीक के लिए प्रारंभिक प्रयोगों 2008 तंत्रिका सिस्टम और व्यवहार गर्मियों (MH059472 R25 NIMH अनुदान) पाठ्यक्रम के हिस्से के रूप में समुद्री जैव प्रयोगशाला में प्रदर्शन किया गया.

भाग 1: पशु देखभाल और आनुवंशिक पार <ol><li> यूएएस - ChR2 और OK371 - अलग मानक मक्खी मीडिया 8 युक्त बोतलों में GAL4 उड़ लाइनों को बनाए रखें . </li><li> OK371 GAL4 उड़ लाइनों और यूएएस - ChR2 लाइनों के पुरुषों की कुंवारी ले ली?...

<ol>
	<li>Keshishian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+neuromuscular+junction:+a+model+system+for+studying+synaptic+development+and+function.">The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function.</a> Annu Rev Neurosci. 19, 545 (1996).</li><li>Collins, C. A., DiAntonio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+development:+insights+from+Drosophila.">Synaptic development: insights from Drosophila.</a> Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35 (2007).</li><li>Lagow, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+a+hydrophobic+layer+by+a+point+mutation+in+syntaxin+1A+regulates+the+rate+of+synaptic+vesicle+fusion.">Modification of a hydrophobic layer by a point mutation in syntaxin 1A regulates the rate of synaptic vesicle fusion.</a> PLoS Biol. 5 (4), e72 (2007).</li><li>Nagel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+activation+of+channelrhodopsin-2+in+excitable+cells+of+Caenorhabditis+elegans+triggers+rapid+behavioral+responses.">Light activation of channelrhodopsin-2 in excitable cells of Caenorhabditis elegans triggers rapid behavioral responses.</a> Curr Biol. 15 (24), 2279 (2005).</li><li>Nagel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Channelrhodopsin-2,+a+directly+light-gated+cation-selective+membrane+channel.">Channelrhodopsin-2, a directly light-gated cation-selective membrane channel.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (24), 13940 (2003).</li><li>Schroll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+activation+of+distinct+modulatory+neurons+triggers+appetitive+or+aversive+learning+in+Drosophila+larvae.">Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 16 (17), 1741 (2006).</li><li>Lin, D. M., Auld, V. J., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+neuronal+cell+ablation+in+the+Drosophila+embryo:+pathfinding+by+follower+growth+cones+in+the+absence+of+pioneers.">Targeted neuronal cell ablation in the Drosophila embryo: pathfinding by follower growth cones in the absence of pioneers.</a> Neuron. 14 (4), 707 (1995).</li><li>Ralph Greenspan, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fly Pushing: The Theory and Practice of Drosophila Genetics, 2nd ed. , (2004).</li></ol>

गंभीर कदम दोनों प्रारंभिक विच्छेदन और मांसपेशियों की कोशिकाओं के प्रवेश शामिल है. यदि नसों में कटौती कर रहे हैं या प्रारंभिक विच्छेदन के दौरान मांसपेशियों क्षतिग्रस्त है यह मुश्किल है कि जारी रखने क?...

<table border="1">
<tr>
<td>Material Name</td>
<td>Type</td>
<td>Company</td>
<td>Catalogue Number</td>
<td>Comment</td>
</tr>	
<tr>
<td>Sylgard</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ellsworth adhesives </td>
<td>4019862</td>
<td><a href="http://www.ellsworth.com" target="_blank">www.ellsworth.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Minutens Pins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-10</td>
<td><a href="http://www.finescience.com" target="_blank">www.finescience.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">www.fishersci.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Neuroprobe Intracellular Amplifier and Head Stage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A-M Systems</td>
<td>680100</td>
<td><a href="http://www.a-msystems.com" target="_blank">www.a-msystems.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML866/" target="_blank">Powerlab 4/30 data acquisition system</a></td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">AD instruments</a></td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">www.adinstruments.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Grass stimulator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grass instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.grasstechnologies.com" target="_blank">www.grasstechnologies.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Desktop Computer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dell</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.dell.com" target="_blank">www.dell.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Scope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.leica-microsystems.com" target="_blank">www.leica-microsystems.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Light Source</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dolan-Jenner</td>
<td>41446-062</td>
<td><a href="http://www.dolan-jenner.com" target="_blank">www.dolan-jenner.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Fly Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>All-Trans-Retinal</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>116-31-4</td>
<td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>OK-371 Gal4 Flies</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Aberle lab, Griffith lab, Bloomington stock center </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>UAS-ChR2 Flies</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fiala lab, Griffith lab </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>LED controller circuit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Built in Griffith lab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.ledsupply.com" target="_blank">http://www.ledsupply.com</a> 
<a href="http://www.futureelectronics.com" target="_blank">http://www.futureelectronics.com</a> 
Composed of: 
1. 200 mA Buck Puck 
2. Blue LED 
3. Insulated wire 
4. Circuit bread board </td>
</tr>
<tr>
<td>LED Heat Sink</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thor Labs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.thorlabs.com/" target="_blank">http://www.thorlabs.com/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Air Table</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TMC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.techmfg.com/products/accessories/intro3.html" target="_blank">http://www.techmfg.com/products/accessories/intro3.html</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Faraday Cage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Built in Griffith lab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr>
<tr>
<td>Leica Leitz M Micro-Manipulator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Leitz</td>
<td>ACS01</td>
<td><a href="http://www.leica-microsystems.com" target="_blank">www.leica-microsystems.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Electrode Holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Axon Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.axon.com" target="_blank">www.axon.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Borosilicate Glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FHC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.fh-co.com/p14-15.pdf" target="_blank">www.fh-co.com/p14-15.pdf</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Electrode Puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.sutter.com" target="_blank">www.sutter.com</a></td>
</tr>
<tr>
<td>HL 3.1 Saline with 0.8mM Ca2+</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contents (mM): 
NaCl:70 KCl:5 CaCl2: 0.8 MgCl2:4Sucrose:115 
NaHCO3: 10 Trehalose: 5 HEPES
</td>
</tr>
<tr>
<td>Micro-Dissection Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.finescience.com" target="_blank">www.finescience.com</a></td>
</tr>		
</tbody>
</table>

channelrhodopsin2 mediated stimulation of synaptic potentials at drosophila neuromuscular junctions

<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लार्वा neuromuscular तैयारी synaptic शरीर क्रिया विज्ञान का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण साबित हो गया है<sup1,2,3&gt;</sup&gt;. वर्तमान में, केवल इस तैयारी में उत्तेजक junctional क्षमता (EJPs) पैदा करने के लिए उपलब्ध मतलब चूषण इलेक्ट्रोड का उपयोग शामिल है. दोनों अनुसंधान और शिक्षण प्रयोगशालाओं में, छात्रों को अक्सर maneuvering और उत्तेजक इलेक्ट्रोड के इस प्रकार के जोड़ तोड़ करने में कठिनाई है. वर्तमान काम में, हम बताएंगे कि कैसे दूर से लार्वा NMJ चूषण इलेक्ट्रोड के उपयोग के बिना synaptic क्षमता को प्रोत्साहित. Channelrhodopsin2 (ChR2) व्यक्त<sup4,5,6&gt;</sup&gt; में<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; मोटर न्यूरॉन्स का उपयोग<em&gt; GAL4 - यूएएस</em&gt; सिस्टम<sup&gt; 7</sup&gt;, और एक बुनियादी इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी रिग मामूली परिवर्तन कर, हम नीले प्रकाश की दालों के साथ मज़बूती से EJPs आह्वान कर रहे थे. इस तकनीक Neurophysiology शिक्षण प्रयोगशालाओं जहां छात्र रिग अभ्यास समय और संसाधनों सीमित कर रहे हैं विशेष रूप से उपयोग किया जा सकता है.

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Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions

यह प्रक्रिया एक नीले प्रकाश सक्रिय algal चैनल और सेल विशिष्ट आनुवंशिक अभिव्यक्ति उपकरण का उपयोग करता है प्रकाश दालों के साथ neuromuscular जंक्शन (NMJ) पर synaptic क्षमता आह्वान<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लार्वा. इस तकनीक को एक सस्ती और अनुसंधान और शिक्षण प्रयोगशालाओं में synaptic शरीर क्रिया विज्ञान के अध्ययन के लिए चूषण इलेक्ट्रोड उत्तेजना के लिए वैकल्पिक उपयोग में आसान है.

Channelrhodopsin2 Synaptic क्षमता की मध्यस्थता में उत्तेजना ड्रोसोफिला Neuromuscular जंक्शनों

The Drosophila larval neuromuscular preparation has proven to be a useful tool for studying synaptic physiology1,2,3. Currently, the only means available ...

Research

JoVE Journal

Biology

Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions

Loading Drosophila Nerve Terminals with Calcium Indicators

कैल्शियम संकेतक के साथ लोड हो रहा है ड्रोसोफिला तंत्रिका टर्मिनल

Calcium plays many roles in the nervous system but none more impressive than as the trigger for neurotransmitter release, and none more profound than as ...

Operant Learning of Drosophila at the Torque Meter

टोक़ मीटर में ड्रोसोफिला के operant सीखना

For experiments at the torque meter, flies are kept on standard fly medium at 25&deg;C and 60% humidity with a 12hr light/12hr dark regime. A standardized ...

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

एक चुंबकीय तार सिस्टम के दृश्य और घ्राण ड्रोसोफिला में मध्यस्थता उड़ान नियंत्रण की जाँच

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

Electrophysiological Methods for Recording Synaptic Potentials from the NMJ of Drosophila Larvae

ड्रोसोफिला लार्वा के NMJ से Synaptic क्षमता रिकॉर्डिंग के लिए electrophysiological तरीके

In this video, we describe the electrophysiological methods for recording synaptic transmission at the neuromuscular junction (NMJ) of Drosophila larva. ...

Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila

दिखने में ड्रोसोफिला में उड़ान के दौरान मध्यस्थता गंध ट्रैकिंग

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual ...

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

लाइव Visualizing ड्रोसोफिला फ्लोरोसेंट रंजक के साथ जंक्शन Glial neuromuscular

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction

सी एलिगेंस Neuromuscular जंक्शन से विदारक और रिकॉर्डिंग

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale.   This ...

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

उप सेलुलर संकल्प पर बरकरार ड्रोसोफिला लार्वा के vivo इमेजिंग में

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal ...

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element (CRE) Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element CRE Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

के मात्रात्मक तुलना सीआईएस</emट्रांसजेनिक में> नियामक तत्व (CRE) क्रियाएँ ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

Gene expression patterns are specified by cis-regulatory element (CRE) sequences, which are also called enhancers or cis-regulatory modules. A typical CRE ...

Recombineering Homologous Recombination Constructs in Drosophila

Recombineering Homologous Recombination Constructs in Drosophila

में मुताबिक़ पुनर्संयोजन Constructs Recombineering<em&gt; ड्रोसोफिला</em

The continued development of techniques for fast, large-scale manipulation of endogenous gene loci will broaden the use of Drosophila melanogaster as a ...