Name: live imaging of dense-core vesicles in primary cultured hippocampal neurons
Uploaded: 2009-05-29T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons at JoVE.com

نشكر هارالد هوتر وديكر هيلانة لقراءتهم متأنية لهذه المخطوطة. ونحن نشكر أيضا ريج سيدو من ايكا مايكروسيستمز لخبرته الفنية. وأيد هذا البحث من قبل العلوم والهندسة مجلس الوطني لكندا ، وجائزة # 327100-06 ، وكلية جامعة سايمون فريزر للعلوم.

الجزء 1 : ترنسفكأيشن من الخلايا العصبية باستخدام Lipofectamine 2000 (Invitrogen) معدات انشاء : تستزرع الفئران أو الماوس الخلايا العصبية قرن آمون وفقا لKaech بانكر ، 2006 [4]. كثافة الخلية المعتادة المستخدمة في transfecti...

<ol>
	<li>Kulic, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+microtubule+movement+in+bidirectional+organelle+transport.">The role of microtubule movement in bidirectional organelle transport.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (29), 10011-10016 (2008).</li><li>Jacobson, C., Schnapp, B., Banker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+change+in+the+selective+translocation+of+the+Kinesin-1+motor+domain+marks+the+initial+specification+of+the+axon.">A change in the selective translocation of the Kinesin-1 motor domain marks the initial specification of the axon.</a> Neuron. 49 (6), 797-804 (2006).</li><li>Barkus, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+Axonal+Kinesin-3+Motor+for+Fast+Anterograde+Vesicle+Transport+that+Facilitates+Retrograde+Transport+of+Neuropeptides.">Identification of an Axonal Kinesin-3 Motor for Fast Anterograde Vesicle Transport that Facilitates Retrograde Transport of Neuropeptides.</a> Mol Biol Cell. 19 (1), 274-283 (2008).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat Protoc. 1 (5), 2406-2415 (2006).</li></ol>

يعيش التصوير الخلية هي تقنية صعبة ، ولكنها قوية لمراقبة وسائل النقل المباشر عضية في الخلايا العصبية مثقف. يمكن أن تنشأ صعوبات من المنبع الإجراء مع صحة الخلايا العصبية الفقراء بسبب مضاعفات الثقافة. ولذلك ، ينبغي تقييم صحة الخلية (انظر المرجع للحصول على أمثلة 4) قبل وبع...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/details.php?ID=1144">Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons</a>. There was an error in the author's name. The author name was corrected to include a middle initial as follows:

David M. Kwinter, Michael A. Silverman

instead of:

David Kwinter, Michael Silverman.

A correction to author names has been made for article Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons.

Erratum: Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>MEM-Eagle with Earle salts and L-glutamine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Mediatech</td>
<td>10-010-CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipofectamine 2000</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11668-027</td>
<td>Transfection reagent</td>
</tr>
<tr>
<td>10X Hanks with Ca2+ and Mg2+</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco/Invitrogen</td>
<td>14185-052</td>
<td>Live-imaging medium</td>
</tr>
<tr>
<td>1M HEPES</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco/Invitrogen</td>
<td>15630-130</td>
<td>Live-imaging medium</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

live imaging of dense-core vesicles in primary cultured hippocampal neurons

ويمكن رصد وتوصيف العمليات الحيوية الخلوية تعطي معلومات مهمة عن نشاط الخلوية التي لا يمكن اكتسابها من الصور الثابتة. تحقيقات الفلورسنت الحيوية ، وخاصة البروتين الفلوري الأخضر (GFP) أحدثت ثورة في بيولوجيا الخلايا النابعة من القدرة على تسمية محددة المقصورات داخل الخلايا والهياكل الخلوية. على سبيل المثال ، فقد سمح للتصوير حي لالوهم (ومشتقاته الطيفية) GFP لتحليل ديناميكية الهيكل الخلوي والنقل عضية ، والديناميات الغشاء في العديد من الكائنات الحية وأنواع الخلايا [1-3]. على الرغم من أن التصوير العيش أصبحت سائدة ، وهذا النهج لا يزال يشكل تحديات تقنية كثيرة ، ولا سيما في الخلايا العصبية مثقف الابتدائي. التحدي الأول هو التعبير عن GFP الموسومة البروتينات في الخلايا العصبية بعد الإنقسامية ، والآخر هو القدرة على التقاط الصور مع تقليل الفلورسنت الضيائية ، photobleaching ، والمحافظة على الصحة العامة الخلية. هنا نقدم البروتوكول الذي يصف طريقة ترنسفكأيشن الدهون على أساس أن معدل الغلة ترنسفكأيشن منخفضة نسبيا (~ 0.5 ٪) ، ولكن مثالية لتصوير الخلايا العصبية مستقطبة تماما. انخفاض معدل ترنسفكأيشن ضروري بحيث يمكن وصفها احد المحاور والتشعبات ولميولهم الى خلايا الجسم لتأكيد اتجاهها النقل ، أي تقدمي ضد الرجعية. نهجنا في GFP التصوير معربا عن الخلايا العصبية تعتمد على مجال واسع المجهر الفلورسنت القياسية مزودة كاميرا CCD ، برامج التقاط الصور ، وغرفة التصوير ساخنة. وقد التقط لدينا تشكيلة واسعة من العضيات أو هياكل ، على سبيل المثال ، كثيفة الأساسية الحويصلات ، الميتوكوندريا مخاريط النمو ، ودون أي أكتين البصريات خاصة أو متطلبات أخرى الإثارة من مصدر ضوء الفلورسنت. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن طيفيا ، متميزة ، والبروتينات fluorescently المسمى ، على سبيل المثال ، والبروتينات GFP dsRed الموسومة ، يمكن تصور القريب في وقت واحد لتحديد خصائص النقل المشترك أو غيرها من الأحداث الخلوية منسقة. النهج التصوير الموصوفة هنا هي مرنة لمجموعة متنوعة من تطبيقات التصوير ويمكن اعتمادها من قبل مختبر لتوفير التكلفة ستكون قليلة نسبيا المجهر هو متاح.

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons at JoVE.com

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

التصوير الخلية الحية ذات فائدة خاصة عند دراسة ديناميات الاتجار عضية. نحن هنا وصف بروتوكول لحية كثيفة التصوير الأساسية الحويصلات في الخلايا العصبية مثقف واسع باستخدام الحقل المجهري مضان. هذا البروتوكول هو مرن ، ويمكن أن تتكيف مع العضيات صورة أخرى مثل الميتوكوندريا ، الإندوسومات وperoxisomes.

يعيش تصوير الكثيفة الأساسية الحويصلات في الخلايا العصبية الأولية الحصين مثقف

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

مدفع الجينات ترنسفكأيشن من الخلايا العصبية قرن آمون

Primary Culture of Hippocampal Neurons from P0 Newborn Rats

الثقافة الأولية من الخلايا العصبية قرن آمون من الفئران حديثي الولادة P0

The physiological properties of hippocampal neurons are commonly investigated, especially because of the involvement of the hippocampus in learning and ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

يعيش التصوير في القدرة على الحركة والهيكل الخلوي أكتين خلية من الخلايا العصبية الفردية والخلايا العصبية في الأجنة كريست اسماك الزرد

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

اتش بوساطة إزالة الجزيئات الجينية في اشارة الى مثقف الخلايا الليفية الماوس الأولية الجنينية

The ability to genetically remove specific components of various cell signalling cascades has been an integral tool in modern signal transduction ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

مضان القائم على القياس من دخول الكالسيوم المتجر الذي يعمل في الخلايا الحية: من خلية السرطان مثقف على عضلة

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

4D Imaging of Protein Aggregation in Live Cells

4D التصوير التجميع البروتين في الخلايا الحية

One of the key tasks of any living cell is maintaining the proper folding of newly synthesized proteins in the face of ever-changing environmental ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

يعيش التصوير من تخليص الخلية أفكارك أثناء<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; مرحلة التطور الجنيني

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

النقل عضية في مثقف<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخلايا: S2 الخط الخليوي والخلايا العصبية الابتدائية.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

تصور G3BP الإجهاد حبيبات حيوية في الخلايا الأولية لايف

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

يعيش التصوير خلية من فأر الابتدائية حديثي الولادة العضلية بعد الغدانية وLentiviral تنبيغ طريق متحد البؤر المجهري القرص الغزل

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...