Name: live imaging of dense-core vesicles in primary cultured hippocampal neurons
Uploaded: 2009-05-29T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons at JoVE.com

Мы благодарим Харальд Хуттер и Елена Decker для их внимательного прочтения этой рукописи. Мы также благодарим Reg Сидху из Leica Microsystems для своих технических знаний. Это исследование было поддержано Национальным наук и инженерного совета Канады, премия # 327100-06, и Simon Fraser University Факультет естественных наук.

Часть 1: Трансфекция нейронов использованием Lipofectamine 2000 (Invitrogen) Оборудование установки: Крыса или мышь нейронов гиппокампа культивируются в соответствии с Kaech и банкир, 2006 [4]. Типичная плотность клеток используется для трансфекции является 250000 cells/6-cm блюдо. О?...

<ol>
	<li>Kulic, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+microtubule+movement+in+bidirectional+organelle+transport.">The role of microtubule movement in bidirectional organelle transport.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (29), 10011-10016 (2008).</li><li>Jacobson, C., Schnapp, B., Banker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+change+in+the+selective+translocation+of+the+Kinesin-1+motor+domain+marks+the+initial+specification+of+the+axon.">A change in the selective translocation of the Kinesin-1 motor domain marks the initial specification of the axon.</a> Neuron. 49 (6), 797-804 (2006).</li><li>Barkus, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+Axonal+Kinesin-3+Motor+for+Fast+Anterograde+Vesicle+Transport+that+Facilitates+Retrograde+Transport+of+Neuropeptides.">Identification of an Axonal Kinesin-3 Motor for Fast Anterograde Vesicle Transport that Facilitates Retrograde Transport of Neuropeptides.</a> Mol Biol Cell. 19 (1), 274-283 (2008).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat Protoc. 1 (5), 2406-2415 (2006).</li></ol>

Живая визуализации ячейки сложным, но мощная техника для прямого наблюдения органелл транспорта в культуре нейронов. Трудности могут возникнуть перед процедурой с плохим нейрона здоровья из-за культуры осложнений. Таким образом, клетка здоровье (примеры см. ссылка 4) должны быть оцене?...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/details.php?ID=1144">Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons</a>. There was an error in the author's name. The author name was corrected to include a middle initial as follows:

David M. Kwinter, Michael A. Silverman

instead of:

David Kwinter, Michael Silverman.

A correction to author names has been made for article Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons.

Erratum: Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>MEM-Eagle with Earle salts and L-glutamine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Mediatech</td>
<td>10-010-CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipofectamine 2000</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11668-027</td>
<td>Transfection reagent</td>
</tr>
<tr>
<td>10X Hanks with Ca2+ and Mg2+</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco/Invitrogen</td>
<td>14185-052</td>
<td>Live-imaging medium</td>
</tr>
<tr>
<td>1M HEPES</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco/Invitrogen</td>
<td>15630-130</td>
<td>Live-imaging medium</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

live imaging of dense-core vesicles in primary cultured hippocampal neurons

Наблюдение и характеризующих динамическую клеточных процессов может дать важную информацию о клеточной активности, которые не могут быть получены из статических изображений. Vital флуоресцентных зондов, особенно зеленый флуоресцентный белок (GFP) произвели революцию клеточной биологии, вытекающих из способности этикетке конкретного внутриклеточные отсеки и клеточных структур. Например, жить изображений GFP (и его спектральный варианты) химерами позволили динамического анализа цитоскелета, органелл транспорта и мембраны динамика во множестве организмов и типов клеток [1-3]. Хотя жить изображений стала распространенной, этот подход до сих пор вызывает много технических проблем, особенно в начальной культурный нейронов. Одной из проблем является выражением GFP с метками белков в пост-митотического нейроны, а другая возможность захвата флуоресцентные изображения при минимальном фототоксичности, фотообесцвечивания, а также поддержание общего здоровья клеток. Здесь мы предлагаем протокол, который описывает на основе липидов трансфекции метод, который дает относительно низкий уровень трансфекции (~ 0,5%), однако идеально подходит для визуализации полностью поляризованных нейронов. Низкий уровень трансфекции важно, чтобы один аксонов и дендритов может быть охарактеризована как их ориентации в тело клетки, чтобы подтвердить направленность транспорта, т.е., антероградная против ретроградной. Наш подход к визуализации GFP выражения нейронов зависит от стандартного широкого поля флуоресцентный микроскоп оснащен ПЗС-камеры, программное обеспечение захвата изображения, а также подогревом камеры изображений. Мы отображаемого разнообразных органелл или сооружений, например, плотной основной пузырьков, митохондрий, конусы роста, и актин без каких-либо специальной оптики или возбуждения условий, отличных от флуоресцентных источников света. Кроме того, спектрально-различны, флуоресцентно меченых белков, например, GFP и DsRed с метками белки, могут быть визуализированы возле одновременно для характеристики со-транспортных и иных скоординированных клеточных событий. Изображения Описанный здесь подход является гибким для различных приложений и изображения могут быть приняты лаборатории при относительно небольших затратах при условии, микроскоп доступен.

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons at JoVE.com

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

Живая клетка изображений имеет особую полезность при изучении динамики торговли органелл. Здесь мы опишем протокол для живого изображения плотных процессоров пузырьки в культуре нейронов использованием широкого поля флуоресцентной микроскопии. Этот протокол является гибкой и может быть адаптирована для изображения других органелл типа митохондрий, эндосомы и пероксисом.

Живая съемка Плотные-ядерные Пузырьки в начальной культивированный нейронов гиппокампа

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Ген-пушечный Трансфекция нейронов гиппокампа

Primary Culture of Hippocampal Neurons from P0 Newborn Rats

Первичные культуры нейронов гиппокампа от P0 новорожденных крыс

The physiological properties of hippocampal neurons are commonly investigated, especially because of the involvement of the hippocampus in learning and ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Живая съемка подвижность клеток и актинового цитоскелета отдельных нейронов и нервных клеток Крест в данио рерио Эмбрионы

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

Аденовирус-опосредованной Генетические Удаление сигнальных молекул в культуре первичных мышиных эмбриональных фибробластов

The ability to genetically remove specific components of various cell signalling cascades has been an integral tool in modern signal transduction ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Флуоресценции на основе измерения магазин управлением поступления кальция в живых клетках: от искусственного раковых клеток в скелетных мышечных волокон

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

4D Imaging of Protein Aggregation in Live Cells

4D изображений агрегации белков в живых клетках

One of the key tasks of any living cell is maintaining the proper folding of newly synthesized proteins in the face of ever-changing environmental ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Живая съемка апоптоза клеток во время акции<em&gt; Drosophila</em&gt; Эмбриогенеза

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Органелл Транспорт в культуре<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Клетки: S2 клеточной линии и первичных нейронов.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Визуализация G3BP стресс Гранулы Dynamics в живых первичных клеток

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

Живых изображений сотовый первичных Rat неонатальных кардиомиоцитов После Аденовирусный и Лентивирусов Трансдукция Использование конфокальной вращающийся диск микроскопия

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...