Name: live imaging of dense-core vesicles in primary cultured hippocampal neurons
Uploaded: 2009-05-29T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons at JoVE.com

Harald Hutter ve Helena Decker Biz bu yazının dikkatli bir okuma için teşekkür ederiz. Biz de kendi teknik uzmanlık için Leica Microsystems Reg Sidhu teşekkür ederim. Bu araştırma, Ulusal Bilimler ve Mühendislik Konseyi, Kanada Ödülü # 327.100-06, Bilim ve Simon Fraser Üniversitesi Tıp Fakültesi tarafından desteklenmiştir.

Bölüm 1: Lipofectamine 2000 (Invitrogen) kullanarak nöronların Transfeksiyon Ekipman set-up: Sıçan veya fare hipokampal nöronlar Kaech ve Banker, 2006 göre kültür [4]. Transfections için kullanılan tipik bir hücre yoğunluğu 250.000 cells/6-cm yemektir. Gerekli reaktifleri ve ekipman 50 mM kynurenic asit, düzenli bir masa üstü tüp tutucu, bir benchtop soğutucu (en iyi Lipofectamine reaktif soğuk tutmak için), Lipofectamine reaktif, MEM, mik...

<ol>
	<li>Kulic, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+microtubule+movement+in+bidirectional+organelle+transport.">The role of microtubule movement in bidirectional organelle transport.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (29), 10011-10016 (2008).</li><li>Jacobson, C., Schnapp, B., Banker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+change+in+the+selective+translocation+of+the+Kinesin-1+motor+domain+marks+the+initial+specification+of+the+axon.">A change in the selective translocation of the Kinesin-1 motor domain marks the initial specification of the axon.</a> Neuron. 49 (6), 797-804 (2006).</li><li>Barkus, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+Axonal+Kinesin-3+Motor+for+Fast+Anterograde+Vesicle+Transport+that+Facilitates+Retrograde+Transport+of+Neuropeptides.">Identification of an Axonal Kinesin-3 Motor for Fast Anterograde Vesicle Transport that Facilitates Retrograde Transport of Neuropeptides.</a> Mol Biol Cell. 19 (1), 274-283 (2008).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat Protoc. 1 (5), 2406-2415 (2006).</li></ol>

Canlı hücre görüntüleme kültürlü nöronlarda organel taşıma doğrudan gözlem için zor, ama güçlü bir tekniktir. Güçlükleri kültür komplikasyonlar nedeniyle yoksul nöron sağlığı ile prosedür yukarı çıkabilir. Bu nedenle, hücre sağlığı (örnekler için bkz. Ref. 4) büyüme ortamında doku kültürü ışık mikroskobu kullanılarak lamelleri gözlemleyerek transfeksiyon öncesi ve sonrası değerlendirilmelidir. Aktarılması süreci nöron içeren görüntüleme odasına lamelleri hücr...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/details.php?ID=1144">Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons</a>. There was an error in the author's name. The author name was corrected to include a middle initial as follows:

David M. Kwinter, Michael A. Silverman

instead of:

David Kwinter, Michael Silverman.

A correction to author names has been made for article Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons.

Erratum: Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>MEM-Eagle with Earle salts and L-glutamine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Mediatech</td>
<td>10-010-CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipofectamine 2000</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11668-027</td>
<td>Transfection reagent</td>
</tr>
<tr>
<td>10X Hanks with Ca2+ and Mg2+</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco/Invitrogen</td>
<td>14185-052</td>
<td>Live-imaging medium</td>
</tr>
<tr>
<td>1M HEPES</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco/Invitrogen</td>
<td>15630-130</td>
<td>Live-imaging medium</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

live imaging of dense-core vesicles in primary cultured hippocampal neurons

Gözlem ve dinamik hücresel süreçleri karakterize, statik görüntüler elde edilemez hücresel aktivite ile ilgili önemli bilgiler verebilmesidir. Vital floresan probları, özellikle yeşil floresan proteininin (GFP), özel hücre içi bölmeleri ve hücresel yapılar etiket yeteneği kaynaklanan hücre biyolojisi alanında devrim yarattı. Örneğin, GFP (ve spektral çeşitleri) kimeralar canlı görüntüleme, organizma ve hücre tipleri [1-3] çok sayıda hücre iskeletinin, organel taşıma ve membran dinamikleri dinamik bir analizi için izin verdiler. Canlı görüntüleme yaygın olmasına rağmen, bu yaklaşım, özellikle de primer kültürlerinde nöronlar hala birçok teknik zorluklar teşkil etmektedir. Karşılaşacağı zorluklardan birinin, post-mitotik nöronlar GFP etiketli proteinlerin bir deyimdir; diğer photobleaching ve genel hücre sağlığı korumak, fototoksisite en aza indirirken, floresan görüntü yakalama yeteneğidir. Burada ise tamamen kutuplaşmış nöron görüntüleme için idealdir, nispeten düşük transfeksiyon oranı (~% 0.5) veren bir lipid tabanlı transfeksiyon yöntemi tanımlayan bir protokol sağlar. Anterograd v. retrograd yönlülük, ulaşım, yani tek bir akson ve dendritler onaylamak için hücre gövdesi yönlendirme olarak karakterize edilebilir böylece düşük transfeksiyon oranı çok önemlidir. Nöronlar ifade görüntüleme GFP Bizim yaklaşımımız, bir CCD kamera, görüntü yakalama yazılımı, ve ısıtılmış bir görüntüleme odası ile donatılmış bir standart geniş alan floresan mikroskop dayanmaktadır. Biz, herhangi bir özel optik veya floresan ışık kaynağı dışında uyarma gereksinimleri olmadan, örneğin, yoğun çekirdekli veziküller, mitokondri, büyüme konileri, aktin organellere veya yapıların geniş bir yelpazede görüntülü var. Ayrıca, spektral-farklı floresan ile işaretlenmiş proteinler, örneğin, GFP ve proteinler dsRed etiketli, ortak taşıma veya diğer koordineli hücresel olayları karakterize etmek için aynı anda yakın görüntülenmiştir olabilir. Burada açıklanan görüntüleme yaklaşım görüntüleme uygulamaları çeşitli için esnek ve nispeten daha az maliyetli bir laboratuvar tarafından kabul edilebilir bir mikroskop kullanılabilir sağladı.

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons at JoVE.com

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

Organel ticareti dinamiklerini inceleyerek canlı hücre görüntüleme özellikle yardımcı programı. Burada geniş alan floresan mikroskobu kullanarak kültürlü nöronların yoğun çekirdekli veziküller canlı görüntüleme için bir protokol. Bu protokol, esnek ve diğer organeller gibi mitokondri gibi görüntü adapte edilebilir, endosomes ve peroksizomlara.

İlköğretim Kültür Hipokampal Nöronlar Yoğun çekirdekli veziküller Canlı Görüntüleme

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Gen tabancası Transfeksiyon Hipokampal Nöronlar

Primary Culture of Hippocampal Neurons from P0 Newborn Rats

P0 Yenidoğan Ratlarda Hipokampal Nöronlar İlköğretim Kültür

The physiological properties of hippocampal neurons are commonly investigated, especially because of the involvement of the hippocampus in learning and ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Zebra balığı Embriyolar Bireysel Nöronlar ve Sinir Crest Hücreler Aktin Sitoiskelet Hücre Motilite ve Canlı Görüntüleme

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

Kültür İlköğretim Fare Embriyonik Fibroblastlar Sinyal Molekülleri Adenovirüs aracılı Genetik Kaldırma

The ability to genetically remove specific components of various cell signalling cascades has been an integral tool in modern signal transduction ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Canlı hücreler Mağaza çalışan Kalsiyum Giriş Floresans tabanlı Ölçümü: Kültür Kanseri Hücre gelen İskelet Kası Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

4D Imaging of Protein Aggregation in Live Cells

Canlı Hücrelerde Protein Aggregation 4D Görüntüleme

One of the key tasks of any living cell is maintaining the proper folding of newly synthesized proteins in the face of ever-changing environmental ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Apoptotik hücresi Temizliği görüntülenmesi sırasında Canlı<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyo

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Kültürlü organel Ulaşım<em&gt; Drosophila</em&gt; Hücreler: S2 Hücre Hattı ve İlköğretim Nöronlar.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Canlı İlköğretim Hücrelerde G3BP Stres Granül Dinamiği Görselleştirme

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

İlköğretim Rat Yenidoğan kardiyomiyositlerin Canlı Hücre Görüntüleme Adenoviral izlenerek ve Lentiviral İletimi Confocal Disk Mikroskopi Spinning kullanma

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...