Name: isolation of protoplasts from tissues of 14-day-old seedlings of arabidopsis thaliana
Uploaded: 2009-08-17T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dal Experiment Station Cornell University agricolo (CUAES) NYC-125433 Hatch Grant e Cornell Start-Up sovvenzione concessa a OKV

Parte 1. Preparazione del terreno solido per le piante in crescita. Noi di solito le piante sulla cultura concentrato Murasige e Skoog (MS) media integrato con 1% di saccarosio e lo 0,7% agar. Esso contiene tutti gli ingredienti necessari per mantenere le piante sane. Per preparare 1L di MS, media pH 5,7 <ol><li> Aggiungere 2,15 g di MS polvere in 800 ml di acqua in bottiglia da 1,5 2.0L autoclavabile. </li><li> Posizionare un bar mescolando ne...

<ol>
	<li>Cocking, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+the+Isolation+of+Plant+Protoplasts+and+Vacuoles.">A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles.</a> Nature. 187, 962-963 (1960).</li><li>Chen, S., Halkier, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+glucosinolate+uptake+by+leaf+protoplasts+of+Brassica+napus.">Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus.</a> J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).</li><li>Robert, S., Zouhar, J., Carter, C., Raikhel, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+intact+vacuoles+from+Arabidopsis+rosette+leaf-derived+protoplasts.">Isolation of intact vacuoles from Arabidopsis rosette leaf-derived protoplasts.</a> Nat. Protocols. 2, 259-262 (2007).</li><li>Yoo, S. D., Cho, Y. H., Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+mesophyll+protoplasts:+a+versatile+cell+system+for+transient+gene+expression+analysis.">Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis.</a> Nat Protoc. 2, 1565-1572 (2007).</li><li>Zhai, Z., Sooksa-nguan, T., Vatamaniuk, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+RNAi+as+a+reverse+genetic+approach+for+gene+functional+analysis+in+protoplasts.">Establishing RNAi as a reverse genetic approach for gene functional analysis in protoplasts.</a> Plant Phys. 149, 642-652 (2009).</li></ol>

Per garantire l&#39;alto rendimento di protoplasti intatti, è molto importante per start-up con piante sane. Utilizzare un filtro-sterilizzare le soluzioni per l&#39;isolamento protoplasti. Ricordate che protoplasti sono fragili. Pertanto, quando si sono movimentazione protoplasti, non si mescolano, o vortice pipettare vigorosamente perché li freni. Invece, mescolare protoplasti lentamente ruotando o con nastro adesivo il tubo di centrifuga. La procedura descritta protoplasti resa intatta che sono vitali per almeno 96...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (MS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5524</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A1296</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dishes (100x15mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kreckeler Scientific</td>
<td>82-4001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cellulase (Onozuka R&#x2010;10)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>RPI Corp</td>
<td>C32200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Macerozyme (R10)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>RPI Corp</td>
<td>M22010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cheesecloth wipes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>06-665-29</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lab Rotator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>1167152Q</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Allegra X&#x2010;15R Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>392932</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Axioskop2 Plus Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of protoplasts from tissues of 14-day-old seedlings of arabidopsis thaliana

Protoplasti sono cellule vegetali che hanno avuto le loro pareti cellulari enzimaticamente rimosso. Isolamento di protoplasti dai tessuti vegetali diversi per la prima volta segnalato più di 40 anni fa<sup&gt; 1</sup&gt; E da allora è stato adattato per studiare una serie di processi cellulari, come la localizzazione subcellulare di proteine, l&#39;isolamento di organelli intatti e mirata gene-inattivazione con un doppio filamento di RNA interference (RNAi)<sup&gt; 2-5</sup&gt;. La maggior parte dei protocolli di isolamento del protoplasti utilizzare tessuti foglia di Arabidopsis maturi (per esempio 35 giorni di età delle piante)<sup&gt; 2-4</sup&gt;. Abbiamo modificato i protocolli esistenti con l&#39;impiego di 14 giorni di età piantine di Arabidopsis. In questa procedura, un grammo di 14-giorno-vecchie piantine prodotto 5 10<sup&gt; 6</sup&gt; -10<sup&gt; 7</sup&gt; Protoplasti che rimangono intatte, almeno 96 ore. La resa di protoplasti da piantine è paragonabile con i preparati da foglie di Arabidopsis maturo, ma invece di 35-36 giorni, l&#39;isolamento di protoplasti si completa in 15 giorni. Ciò consente di diminuire il tempo e lo spazio camera di crescita che sono necessari per isolare protoplasti quando le piante mature sono utilizzati, e accelera gli studi a valle che richiedono protoplasti intatti.

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Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

Questo video mostra una procedura per isolare protoplasti intatti da tessuti di 14-giorno-vecchie piantine di Arabidopsis. Dato che il protoplasti isolati rimangono intatte per almeno 96 ore e sono isolati da piantine invece di piante mature di un mese-vecchia, questa procedura accelera i test che richiedono protoplasti intatti.

Isolamento di protoplasti da tessuti di 14-giorni di età piantine di Arabidopsis thaliana</em

Protoplasts are plant cells that have had their cell walls enzymatically removed. Isolation of protoplasts  from different plant tissues was first ...

Research

JoVE Journal

Biology

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