Name: isolation of protoplasts from tissues of 14-day-old seedlings of arabidopsis thaliana
Uploaded: 2009-08-17T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana at JoVE.com

Эта работа была поддержана Корнельского университета Сельскохозяйственной Экспериментальной Станции (CUAES) Нью-Йоркской-125433 Hatch Грант и Корнельский Start-Up Грант присуждается OKV

Часть 1. Подготовка твердой среде для выращивания растений. Как правило, мы культура растений на сосредоточена Murasige и Скуга (MS) среде с добавлением 1% сахарозы и 0,7% агара. Он содержит все необходимые ингредиенты сохранить растения здоровыми. Для пригото?...

<ol>
	<li>Cocking, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+the+Isolation+of+Plant+Protoplasts+and+Vacuoles.">A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles.</a> Nature. 187, 962-963 (1960).</li><li>Chen, S., Halkier, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+glucosinolate+uptake+by+leaf+protoplasts+of+Brassica+napus.">Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus.</a> J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).</li><li>Robert, S., Zouhar, J., Carter, C., Raikhel, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+intact+vacuoles+from+Arabidopsis+rosette+leaf-derived+protoplasts.">Isolation of intact vacuoles from Arabidopsis rosette leaf-derived protoplasts.</a> Nat. Protocols. 2, 259-262 (2007).</li><li>Yoo, S. D., Cho, Y. H., Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+mesophyll+protoplasts:+a+versatile+cell+system+for+transient+gene+expression+analysis.">Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis.</a> Nat Protoc. 2, 1565-1572 (2007).</li><li>Zhai, Z., Sooksa-nguan, T., Vatamaniuk, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+RNAi+as+a+reverse+genetic+approach+for+gene+functional+analysis+in+protoplasts.">Establishing RNAi as a reverse genetic approach for gene functional analysis in protoplasts.</a> Plant Phys. 149, 642-652 (2009).</li></ol>

Для обеспечения высокого выхода интактных протопластов это очень важно для запуска со здоровыми растениями. Использовать фильтр-стерилизовать решения для выделения протопластов. Помните, что протопласты хрупкой. Поэтому, когда вы обращаетесь протопластов, не смешиваются, пипетки ил?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (MS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5524</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A1296</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dishes (100x15mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kreckeler Scientific</td>
<td>82-4001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cellulase (Onozuka R&#x2010;10)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>RPI Corp</td>
<td>C32200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Macerozyme (R10)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>RPI Corp</td>
<td>M22010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cheesecloth wipes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>06-665-29</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lab Rotator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>1167152Q</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Allegra X&#x2010;15R Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>392932</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Axioskop2 Plus Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of protoplasts from tissues of 14-day-old seedlings of arabidopsis thaliana

Протопласты растительных клеток, которые имели их клеточных стенок ферментативно удалены. Выделение протопластов из различных растительных тканях впервые сообщили о более чем 40 лет назад<sup&gt; 1</sup&gt; И с тех пор была адаптирована для изучения различных клеточных процессов, таких как внутриклеточную локализацию белков, изоляция интактных органелл и целевого гена-инактивации двухцепочечной РНК-интерференция (RNAi)<sup&gt; 2-5</sup&gt;. Большинство протоколов протопластов изоляции используем лиственные тканей зрелого Arabidopsis (например, 35-дневных растений)<sup&gt; 2-4</sup&gt;. Мы изменили существующие протоколы, используя 14-дневных проростков Arabidopsis. В этой процедуре, один грамм 14-дневных проростков дали 5 10<sup&gt; 6</sup&gt; -10<sup&gt; 7</sup&gt; Протопластов, которые остаются неизменными по крайней мере 96 часов. Выход протопластов из саженцев сравнима с препаратами из листьев зрелых Arabidopsis, но вместо 35-36 дней, выделение протопластов завершен в течение 15 дней. Это позволяет уменьшить время и пространство роста камеры, которые необходимы для выделения протопластов, когда взрослые растения используются, и ускоряет течение исследований, которые требуют нетронутыми протопластов.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana at JoVE.com

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

Это видео показывает процедуру выделения нетронутыми протопластов из тканей 14-дневных проростков арабидопсиса. Учитывая, что изолированных протопластов остаются неизменными, по крайней мере 96 ч и изолированы от саженцев, а не один-месячного взрослых растений, эта процедура ускоряет анализов требует нетронутыми протопластов.

Выделение протопластов из тканей 14-дневных Рассаду Arabidopsis thaliana</em

Protoplasts are plant cells that have had their cell walls enzymatically removed. Isolation of protoplasts  from different plant tissues was first ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::&beta;-glucuronidase Reporter Gene Expression

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::ÃƒÅ½Ã‚Â²-glucuronidase Reporter Gene Expression

Цветочные погружением Преобразование Arabidopsis thaliana, Чтобы изучить PTSO2:: β-глюкуронидазы Reporter экспрессии генов

The ability to introduce foreign genes into an organism is the foundation for modern biology and biotechnology. In the model flowering plant Arabidopsis ...

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

Эффективной и быстрой изоляции на ранней стадии эмбрионы из<em&gt; Arabidopsis THALIANA</em&gt; Семена

In flowering plants, the embryo develops within a nourishing tissue - the endosperm - surrounded by the maternal seed integuments (or seed coat). As a ...

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Гистохимический Окрашивание<em&gt; Арабидопсис</em&gt; Вторичный клеточной стенки Элементы

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively ...

Rapid Analysis of Circadian Phenotypes in Arabidopsis Protoplasts Transfected with a Luminescent Clock Reporter

Экспресс-анализ циркадных фенотипы в Arabidopsis протопластов трансфицируют Люминесцентные Clock Reporter

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable ...

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Анализ поведения Arabidopsis thaliana роста в разных качествах свет

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light ...

Spatiotemporal Investigation of ERL1 Dynamics via Confocal Imaging

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells (Video) | JoVE 

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane ...

An Improved Method to Measure Pollen Hydration Profiles in Arabidopsis thaliana

A High-Resolution, Single-Grain, In Vivo Pollen Hydration Bioassay for Arabidopsis thaliana

A High-Resolution, Single-Grain, In Vivo Pollen Hydration Bioassay for Arabidopsis thaliana (Video) | JoVE 

Биоанализ гидратации пыльцы in vivo с высоким разрешением для гидратации пыльцы Arabidopsis thaliana

Sexual reproduction in flowering plants requires initial interaction between the pollen grain and the stigmatic surface, where a molecular dialog is ...

Growth of Arabidopsis thaliana Plants and Preparation of Flowers for Pollen Hydration Assay

Growth of Arabidopsis thaliana Plants and Preparation of Flowers for Pollen Hydration Assay  (Video) | JoVE 

Рост растений Arabidopsis thaliana и подготовка цветов к анализу гидратации пыльцы

﻿Preparation of Dual-Colored F1 Transgenic Arabidopsis thaliana

ï»¿Preparation of Dual-Colored F1 Transgenic Arabidopsis thaliana (Video) | JoVE 

Приготовление двухцветного трансгенного Arabidopsis thaliana F1

Pharmacological Analysis of Dual-Colored F1 Transgenic Arabidopsis thaliana

Pharmacological Analysis of Dual-Colored F1 Transgenic Arabidopsis thaliana  (Video) | JoVE 

Фармакологический анализ двухцветного трансгенного F1 Arabidopsis thaliana