Name: quantifying yeast chronological life span by outgrowth of aged cells
Uploaded: 2009-05-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door NIH Grant 1R21AG031965-01A1. MK is een Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging.

Deel 1: Voorbereiding van het ouder worden culturen <ol><li> Streak stammen van interesse van bevroren voorraden op YEPD agarplaten (1% gistextract, 2% Bacto-pepton, 2% agar, 2% glucose). </li><li> Incubeer de cellen bij 30 ˚ C gedurende 48 uur of totdat enkele kolonies verschijnen. </li><li> Pick enkele kolonies en enten in 5 ml YEPD vloeibaar medium (1% gistextract, 2% Bacto-pepton, 2% glucose) in reageerbuizen. </li><li> Grow culturen &#39;s nachts bij 30 ˚ C, terwijl je continu roert met behulp van een shaker of...

<ol>
	<li>Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+aging+in+yeast:+the+means+to+the+end.">Replicative aging in yeast: the means to the end.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).</li><li>Kaeberlein, M., Conn, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of models for human aging. , 109 (2006).</li><li>Fabrizio, P., Longo, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chronological+life+span+of+Saccharomyces+cerevisiae.">The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae.</a> Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).</li><li>Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+high-throughput+quantitative+analysis+of+yeast+chronological+life+span.">A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).</li><li>Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preadaptation+to+efficient+respiratory+maintenance+is+essential+both+for+maximal+longevity+and+the+retention+of+replicative+potential+in+chronologically+ageing+yeast.">Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast.</a> Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).</li><li>Fabrizio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+is+a+mediator+of+an+altruistic+aging+program+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae.</a> J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).</li></ol>

De high-throughput chronologische levensduur test hier beschreven is een effectieve methode voor het kwantificeren van de veroudering potentieel van grote aantallen van stammen met een hoge nauwkeurigheid en precisie. De primaire opmars van deze methode ten opzichte van klassieke methoden voor de bepaling te overleven door het tellen van kolonievormende eenheden (bijv. zie 3) is het gebruik van een shaker / incubator / plaat leesapparaat, zoals de Bioscreen C MBR machine met een hoge resolutie groeicurven te ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bacto Peptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>211677</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>288620</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Difco Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>214530</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S.</td>
<td>Reagent</td>
<td>MidSci</td>
<td>J630-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amino Acids</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ammonium Sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Spectrum</td>
<td>AM185</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextrose</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>D16-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bioscreen C MBR machine</td>
<td>Tool</td>
<td>Growth Curves USA</td>
<td>5101370</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bioscreen 100-well Honeycomb plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Growth Curves USA</td>
<td>9502550</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

quantifying yeast chronological life span by outgrowth of aged cells

De gist<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; Heeft zich bewezen als een belangrijk model organisme in het gebied van vergrijzing onderzoek<sup&gt; 1</sup&gt;. De replicatieve en chronologische levensduur zijn twee gevestigde paradigma&#39;s gebruikt om te bestuderen veroudering in gist. Replicatieve veroudering wordt gedefinieerd als het aantal van de dochter van cellen een enkele gist moeder cel produceert voor veroudering, chronologische veroudering wordt bepaald door de lengte van de tijd cellen kunnen overleven in een niet-delende, rust-achtige toestand<sup&gt; 2</sup&gt;. Hebben we een high-throughput-methode voor kwantitatieve meting van de chronologische levensduur. Deze methode houdt veroudering van de cellen in een bepaald medium onder roeren en bij constante temperatuur. Op elke leeftijd-punt, is een sub-populatie van cellen verwijderd zijn van de vergrijzing cultuur en geënt in een rijke groei medium. Een hoge-resolutie groeicurve wordt dan verkregen voor deze sub-populatie van oude cellen met behulp van een Bioscreen C MBR machine. Een algoritme wordt vervolgens toegepast op het relatieve aandeel van levensvatbare cellen in elke sub-populatie op basis van de groei kinetiek bij elke leeftijd-point te bepalen. Deze methode vereist aanzienlijk minder tijd en middelen in vergelijking met andere chronologische levensduur testen met behoud van reproduceerbaarheid en precisie. De high-throughput aard van deze test moet het mogelijk maken voor grootschalige genetische en chemische screens om nieuwe lange levensduur modifiers te identificeren voor verdere testen in meer complexe organismen.

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells at JoVE.com

Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells

Chronologische veroudering in gist verwijst naar het verlies van cel levensvatbaarheid geassocieerd met de tijd in de stationaire fase. Hier beschrijven we een high-throughput methode voor het kwantitatief bepalen van gist chronologische levensduur.

Kwantificeren van Gist Chronologisch Life Span door uitgroei van Aged cellen

The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has proven to be an important model organism in the field of aging research 1. The replicative and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Het meten van Caenorhabditis elegans Levensduur over Solid Media

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

Het meten van replicatieve levensduur in de gist

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Zuivering van Mitochondriën uit gistcellen

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Het meten van Caenorhabditis elegans Levensduur in 96 Well microtiterplaten

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kwantitatieve Live Cell Fluorescentie-microscopie analyse van Fission Yeast

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Temporal Quantification of MAPK Induced Expression in Single Yeast Cells

Temporele Kwantificering van MAPK geïnduceerde expressie in Single gistcellen

The quantification of gene expression at the  single cell level uncovers novel regulatory mechanisms obscured in measurements  performed at the population ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood

Generatie en cultuur van Blood uitgroei endotheelcellen van de humane perifere bloed

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...

Tracking and Quantifying Developmental Processes in C. elegans Using Open-source Tools

Tracking and Quantifying Developmental Processes in C. elegans Using Open-source Tools

Tracking en kwantificeren van ontwikkelingsprocessen in<em&gt; C. elegans</em&gt; Het gebruik van open-source tools

Quantitatively capturing developmental processes is crucial to derive mechanistic models and key to identify and describe mutant phenotypes. Here ...

Detection of Modified Forms of Cytosine Using Sensitive Immunohistochemistry

Detectie van gemodificeerde vormen van cytosine behulp Sensitive Immunohistochemie

Methylation of cytosine bases (5-methylcytosine, 5mC) occurring in vertebrate genomes is usually associated with transcriptional silencing. ...