Name: quantifying yeast chronological life span by outgrowth of aged cells
Uploaded: 2009-05-06T00:00:00
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Diese Arbeit wurde vom NIH Grant 1R21AG031965-01A1 unterstützt. MK ist eine Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging.

Teil 1: Vorbereitung der alternden Kulturen <ol><li> Streak-Stämmen von Interesse aus gefrorenen Beständen auf YEPD Agarplatten (1% Hefeextrakt, 2% Bacto-Pepton, 2% Agar, 2% Glucose). </li><li> Inkubieren Sie die Zellen bei 30 ˚ C für 48 Stunden oder bis einzelne Kolonien erscheinen. </li><li> Wählen Sie einzelne Kolonien und impfen in 5 ml YEPD flüssigen Medium (1% Hefeextrakt, 2% Bacto-Pepton, 2% Glucose) in Reagenzgläsern. </li><li> Wachsen Kulturen über Nacht bei 30 ˚ C unter Beibehaltung konstanter Beweg...

<ol>
	<li>Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+aging+in+yeast:+the+means+to+the+end.">Replicative aging in yeast: the means to the end.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).</li><li>Kaeberlein, M., Conn, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of models for human aging. , 109 (2006).</li><li>Fabrizio, P., Longo, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chronological+life+span+of+Saccharomyces+cerevisiae.">The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae.</a> Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).</li><li>Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+high-throughput+quantitative+analysis+of+yeast+chronological+life+span.">A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).</li><li>Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preadaptation+to+efficient+respiratory+maintenance+is+essential+both+for+maximal+longevity+and+the+retention+of+replicative+potential+in+chronologically+ageing+yeast.">Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast.</a> Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).</li><li>Fabrizio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+is+a+mediator+of+an+altruistic+aging+program+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae.</a> J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).</li></ol>

Die High-Throughput-chronologische Lebensspanne beschriebene Assay ist hier eine effektive Methode zur Quantifizierung der Alterungspotential einer großen Zahl von Stämmen mit hoher Genauigkeit und Präzision. Der primäre Voraus dieser Methode gegenüber klassischen Methoden zur Bestimmung der Überlebenszeit durch Zählen Kolonie-bildenden Einheiten (siehe z. B. 3) ist die Verwendung eines Shakers / Inkubator / Platte Lesegerät wie dem Bioscreen C MBR-Maschine mit hoher Auflösung Wachstumskurven bei erh...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bacto Peptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>211677</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>288620</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Difco Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>214530</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S.</td>
<td>Reagent</td>
<td>MidSci</td>
<td>J630-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amino Acids</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ammonium Sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Spectrum</td>
<td>AM185</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextrose</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>D16-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bioscreen C MBR machine</td>
<td>Tool</td>
<td>Growth Curves USA</td>
<td>5101370</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bioscreen 100-well Honeycomb plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Growth Curves USA</td>
<td>9502550</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

quantifying yeast chronological life span by outgrowth of aged cells

Die Bierhefe<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; Hat sich als wichtiger Modellorganismus auf dem Gebiet der Alternsforschung werden<sup&gt; 1</sup&gt;. Die replikativen und chronologische Lebensspanne gibt zwei etablierte Paradigmen zur Untersuchung Altern in Hefe. Replikativen Altern ist wie die Zahl der Tochterzellen einer Hefe Mutter Zelle produziert, bevor Seneszenz definiert; chronologischer Alterung wird durch die Länge der Zeit-Zellen definiert werden kann in einer nicht-teilenden, Ruhe-ähnlichen Zustand zu überleben<sup&gt; 2</sup&gt;. Wir haben einen High-Throughput-Verfahren zur quantitativen Messung des zeitlichen Lebensdauer entwickelt. Dieses Verfahren beinhaltet Alterung der Zellen in einem definierten Medium unter Rühren und bei konstanter Temperatur. An jedem Alter-Punkt, ist ein Sub-Population von Zellen aus der Alterung der Kultur entnommen und geimpft in Rich-Wachstumsmedium. Ein hochauflösendes Wachstumskurve wird dann für diese Subpopulation von gealterten Zellen mit einem Bioscreen C MBR-Maschine erhalten. Ein Algorithmus wird dann angewendet, um den relativen Anteil der lebenden Zellen in den einzelnen Sub-Population auf die Wachstumskinetik in jedem Alter-Punkt zu ermitteln. Diese Methode erfordert wesentlich weniger Zeit und Ressourcen im Vergleich zu anderen chronologischen Lebensdauer Assays unter Beibehaltung Reproduzierbarkeit und Präzision. Die High-Throughput-Natur dieses Tests sollte für eine groß angelegte genetische und chemische Bildschirme ermöglichen es, neue Langlebigkeit Modifikatoren für weitere Tests in immer komplexeren Organismen zu identifizieren.

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Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells

Chronologischer Alterung in Hefe bezieht sich auf den Verlust der Lebensfähigkeit der Zellen mit der Zeit in der stationären Phase assoziiert. Hier beschreiben wir eine High-Throughput-Verfahren zur quantitativen Bestimmung Hefe chronologische Lebensspanne.

Die Quantifizierung der Hefe Chronologisches Life Span durch Auswachsen von gealterten Zellen

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