Name: quantifying yeast chronological life span by outgrowth of aged cells
Uploaded: 2009-05-06T00:00:00
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Este trabalho foi financiado pelo NIH Grant 1R21AG031965-01A1. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento.

Parte 1: Preparação das culturas de envelhecimento <ol><li> Cepas raia de interesse dos estoques congelados em placas de ágar YEPD (extrato de levedura 1%, 2% Bacto-peptona, agar 2%, 2% de glicose). </li><li> Incubar as células em 30 ˚ C durante 48 horas ou até colônias única aparecer. </li><li> Escolha colônias única e inocular em 5 mL de meio líquido YEPD (extrato de levedura 1%, 2% Bacto-peptona, 2% de glicose) em tubos de ensaio. </li><li> Crescer culturas durante a noite a 30 ˚ C, mantendo agitação ...

<ol>
	<li>Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+aging+in+yeast:+the+means+to+the+end.">Replicative aging in yeast: the means to the end.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).</li><li>Kaeberlein, M., Conn, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of models for human aging. , 109 (2006).</li><li>Fabrizio, P., Longo, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chronological+life+span+of+Saccharomyces+cerevisiae.">The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae.</a> Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).</li><li>Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+high-throughput+quantitative+analysis+of+yeast+chronological+life+span.">A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).</li><li>Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preadaptation+to+efficient+respiratory+maintenance+is+essential+both+for+maximal+longevity+and+the+retention+of+replicative+potential+in+chronologically+ageing+yeast.">Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast.</a> Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).</li><li>Fabrizio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+is+a+mediator+of+an+altruistic+aging+program+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae.</a> J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).</li></ol>

O alto rendimento cronológica ensaio expectativa de vida aqui descrito é um método eficaz para quantificar o potencial de envelhecimento de um grande número de cepas com alta precisão e de precisão. O principal avanço deste método em relação aos métodos clássicos de determinação de sobrevivência através da contagem de unidades formadoras de colônia (por exemplo, ver 3) é o uso de um dispositivo de leitura shaker / incubadora / placa, como a máquina Bioscreen MBR C para obtenção de curvas ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bacto Peptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>211677</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>288620</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Difco Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>214530</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S.</td>
<td>Reagent</td>
<td>MidSci</td>
<td>J630-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amino Acids</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ammonium Sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Spectrum</td>
<td>AM185</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextrose</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>D16-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bioscreen C MBR machine</td>
<td>Tool</td>
<td>Growth Curves USA</td>
<td>5101370</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bioscreen 100-well Honeycomb plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Growth Curves USA</td>
<td>9502550</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

quantifying yeast chronological life span by outgrowth of aged cells

A levedura de brotamento<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; Provou ser um organismo modelo importante no campo da pesquisa sobre o envelhecimento<sup&gt; 1</sup&gt;. O replicativa e expectativa de vida cronológica são dois paradigmas estabelecidos usado para estudar o envelhecimento em leveduras. Envelhecimento replicativo é definido como o número de células filhas uma célula mãe solteira fermento produz antes de senescência; envelhecimento cronológico é definido pelo comprimento das células de tempo podem sobreviver em uma não-divisão, o estado de quiescência-like<sup&gt; 2</sup&gt;. Nós desenvolvemos um método de alto rendimento para a determinação quantitativa do tempo de vida cronológica. Este método envolve o envelhecimento das células em um meio definido sob agitação e à temperatura constante. Em cada idade-ponto, uma sub-população de células é retirado da cultura de envelhecimento e inoculadas em meio de cultura rico. A alta resolução curva de crescimento é, então, obtido para esta sub-população de células envelhecidas usando uma máquina Bioscreen C MBR. Um algoritmo é então aplicado para determinar a proporção relativa de células viáveis ​​em cada sub-população com base na cinética de crescimento em cada idade-ponto. Este método requer substancialmente menos tempo e recursos em comparação com outros ensaios cronológica vida útil, mantendo a reprodutibilidade e precisão. A natureza de alto rendimento deste ensaio devem permitir grande escala telas genética e química para identificar modificadores de longevidade da novela para mais testes em organismos mais complexos.

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Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells

Envelhecimento cronológico em levedura refere-se à perda de viabilidade celular associada ao tempo na fase estacionária. Aqui nós descrevemos um método de alto rendimento para determinar quantitativamente fermento esperança de vida cronológica.

Quantificar Yeast Life Span cronológica por conseqüência de células envelhecidas

The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has proven to be an important model organism in the field of aging research 1. The replicative and ...

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