Name: quantifying yeast chronological life span by outgrowth of aged cells
Uploaded: 2009-05-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NIH Grant 1R21AG031965-01A1. MK är en Ellison Medical Foundation Nya Scholar i åldrande.

Del 1: Förberedelser av åldrande kulturer <ol><li> Streak stammar av intresse från frysta lager på YEPD agarplattor (1% jästextrakt, 2% Bacto-pepton, 2% agar, 2% glukos). </li><li> Inkubera cellerna vid 30 ˚ C i 48 timmar eller tills enstaka kolonier visas. </li><li> Välj enstaka kolonier och inokulera i 5 ml YEPD vätska (1% jästextrakt, 2% Bacto-pepton, 2% glukos) i provrör. </li><li> Väx kulturer över natten vid 30 ˚ C samtidigt konstant omrörning med hjälp av antingen en shaker eller roller trumma. <...

<ol>
	<li>Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+aging+in+yeast:+the+means+to+the+end.">Replicative aging in yeast: the means to the end.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).</li><li>Kaeberlein, M., Conn, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of models for human aging. , 109 (2006).</li><li>Fabrizio, P., Longo, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chronological+life+span+of+Saccharomyces+cerevisiae.">The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae.</a> Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).</li><li>Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+high-throughput+quantitative+analysis+of+yeast+chronological+life+span.">A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).</li><li>Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preadaptation+to+efficient+respiratory+maintenance+is+essential+both+for+maximal+longevity+and+the+retention+of+replicative+potential+in+chronologically+ageing+yeast.">Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast.</a> Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).</li><li>Fabrizio, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+is+a+mediator+of+an+altruistic+aging+program+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae.</a> J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).</li></ol>

Den höga genomströmning kronologisk livslängd analys som beskrivs här är en effektiv metod för att kvantifiera den åldrande potentialen av ett stort antal stammar med hög noggrannhet och precision. Den primära god tid före denna metod under klassiska metoder för att bestämma överlevnad genom att räkna kolonibildande enheter (se t.ex. 3) är att använda en shaker / inkubator / platta behandlingen enhet som Bioscreen C MBR maskin för att få högupplösta tillväxtkurvor på varje ålder-punkt. ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bacto Peptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>211677</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>288620</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Difco Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD</td>
<td>214530</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S.</td>
<td>Reagent</td>
<td>MidSci</td>
<td>J630-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amino Acids</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ammonium Sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Spectrum</td>
<td>AM185</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextrose</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>D16-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bioscreen C MBR machine</td>
<td>Tool</td>
<td>Growth Curves USA</td>
<td>5101370</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bioscreen 100-well Honeycomb plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Growth Curves USA</td>
<td>9502550</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

quantifying yeast chronological life span by outgrowth of aged cells

Den spirande jäst<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; Har visat sig vara en viktig organism i forskningen inom området för forskning om äldre<sup&gt; 1</sup&gt;. Den replikationsförmåga och kronologisk spänner liv är två etablerade paradigm för att studera åldrande i jäst. Replikationsförmåga åldrande definieras som antalet dottercellerna en enda jäst modercellen producerar innan åldrande, kronologiska åldrande definieras av den tid som celler kan överleva i en icke-dela, inaktivitet-liknande tillstånd<sup&gt; 2</sup&gt;. Vi har utvecklat en hög genomströmning metod för kvantitativ mätning av kronologisk livslängd. Denna metod innebär åldrande celler i ett definierat medium i agitation och vid konstant temperatur. Vid varje ålders-punkt, är en undergrupp av celler avlägsnas från den åldrande kultur och inokuleras i rika tillväxt medium. En högupplöst tillväxtkurvan då erhålls för denna delpopulation av gamla celler med en Bioscreen C MBR maskin. En algoritm tillämpas sedan för att bestämma den relativa andelen livskraftiga celler i varje delpopulation baserat på tillväxten kinetiken vid varje ålders-punkt. Metoden kräver betydligt mindre tid och resurser jämfört med andra kronologisk livslängd analyser bibehållen reproducerbarhet och precision. Den höga genomströmning natur denna analys bör tillåta storskaliga genetiska och kemiska skärmar för att identifiera nya livslängd modifierare för ytterligare tester i mer komplexa organismer.

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells at JoVE.com

Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells

Kronologiska åldrande i jäst avser förlust av cellernas livskraft i samband med tiden i stationär fas. Här beskriver vi en hög genomströmning metod för att kvantitativt bestämma jäst kronologisk livslängd.

Kvantifiering Jäst Span Kronologisk Life av utväxt av Aged celler

The budding yeast Saccharomyces cerevisiae has proven to be an important model organism in the field of aging research 1. The replicative and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Mätning Caenorhabditis elegans Livslängd på fasta medier

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

Mätning Span replikationsförmåga Livet i den spirande Jäst

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Rening av mitokondrier från jästceller

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Mätning Caenorhabditis elegans Livslängd på 96 Tja mikrotiterplattor

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitativa levande celler fluorescens-mikroskopi Analys av fissionsjäst

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Temporal Quantification of MAPK Induced Expression in Single Yeast Cells

Temporal Kvantifiering av MAPK inducerat uttryck i Single jästceller

The quantification of gene expression at the  single cell level uncovers novel regulatory mechanisms obscured in measurements  performed at the population ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood

Generation och kultur of Blood utväxt endotelceller från humant perifert blod

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...

Tracking and Quantifying Developmental Processes in C. elegans Using Open-source Tools

Tracking and Quantifying Developmental Processes in C. elegans Using Open-source Tools

Spårning och kvantifiera utvecklingsprocesser i<em&gt; C. elegans</em&gt; Använda Open-source-verktyg

Quantitatively capturing developmental processes is crucial to derive mechanistic models and key to identify and describe mutant phenotypes. Here ...

Detection of Modified Forms of Cytosine Using Sensitive Immunohistochemistry

Detektering av modifierade former av cytosin Använda Sensitive Immunohistokemi

Methylation of cytosine bases (5-methylcytosine, 5mC) occurring in vertebrate genomes is usually associated with transcriptional silencing. ...