Name: visualizing antigen specific cd4+ t cells using mhc class ii tetramers
Uploaded: 2009-03-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Antigen Specific CD4+ T Cells using MHC Class II Tetramers at JoVE.com

<p class="jove_content"> हम फिल्म और वीडियो उत्पादन में अपनी महत्वपूर्ण भूमिका के लिए डिक Foley और Leigh Kimball धन्यवाद. </p>

<p class="jove_title"> 1. परिधीय रक्त mononuclear सेल अलगाव (PBMC) </p><ol><li> एक खून का नमूना प्राप्त करना - सीरिंज या रक्त नलियों में रक्त एकत्र किया जाना चाहिए और विरोधी हेपरिन (01:50 अनुपात) के साथ coagulated थक्के रोकने के लिए. के बारे में 1 × रक्त के एमएल ...

<ol>
	<li>Novak, E. J., Liu, A. W., Nepom, G. T., Kwok, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+Class+II+tetramers+permit+detection+and+characterization+of+peptide-specific+human+CD4++T+cells+proliferating+to+influenza+A+antigen.">MHC Class II tetramers permit detection and characterization of peptide-specific human CD4+ T cells proliferating to influenza A antigen.</a> <em style='font-style: italic'>J. Clin. Invest</em>. <b>104</b>, R63-R67 (1999).</li><li>Novak, E. J., Liu, A. W., Gebe, J. A., Falk, B., Nepom, G. T., Falk, B., Koelle, D. M., Kwok, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetramer-guided+epitope+mapping:+rapid+identification+and+characterization+of+immunodominant+CD4++T+cell+epitopes+from+complex+antigens.">Tetramer-guided epitope mapping: rapid identification and characterization of immunodominant CD4+ T cell epitopes from complex antigens.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunol</em>. <b>166</b>, 6665-6670 (2001).</li></ol>

<p class="jove_content"> प्रतिरक्षा में की भूमिका सीडी 4 + टी कोशिकाओं को समझना मौलिक महत्वपूर्ण है. हालांकि, विशिष्ट प्रतिजन सीडी 4 + टी कोशिकाओं का पता लगाने के लिए और पारंपरिक तरीकों का उपयोग कर अलग करना मुश्किल हो सकता है. इसक?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Class 2 Laminar flow biosafety cabinet</td>
<td>equipment</td>
<td>Thermo Forma</td>
<td>1200</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>50 mL conical Tube</td>
<td>equipment</td>
<td>VWR</td>
<td>47747-182</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>1X PBS (Ca/Mg free)</td>
<td>Reagent</td>
<td>HyClone</td>
<td>SH30028.02</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Ficoll-paque PLUS</td>
<td>Reagent</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>17-1440-03</td>
<td>foil wrapped to protect from light</td>
</tr>
<tr>
<td>Pipet Aid XP</td>
<td>equipment</td>
<td>Drummond</td>
<td>4-000-101</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>10 mL pipet</td>
<td>equipment</td>
<td>Corning/Costar</td>
<td>CLS4492</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Aerosolve Canisters</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman</td>
<td>359481</td>
<td>with 50 mL inserts</td>
</tr>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman</td>
<td>GS-6R</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Transfer pipets </td>
<td>equipment</td>
<td>Samco</td>
<td>202-20S</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Pasteur pipets</td>
<td>equipment</td>
<td>VWR</td>
<td>14672-200</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Hemolytic Buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>N/A</td>
<td>N/A</td>
<td>8.3 g/L NH4Cl, 1.0 g/L NaHCO3, 0.04 g/L disodium EDTA</td>
</tr>
<tr>
<td>Trypan blue</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>T6146</td>
<td>0.2% in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Hemocytometer</td>
<td>equipment</td>
<td>VWR </td>
<td>15170-208</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 mL conical tube</td>
<td>equipment</td>
<td>VWR</td>
<td>05-527-90</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Running Buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>N/A</td>
<td>N/A</td>
<td>PBS + 2mM EDTA + 5g/L BSA</td>
</tr>
<tr>
<td>MACS CD4+ T Cell Isolation Kit II</td>
<td>Reagent</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>130-091-155</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>EasySep&reg;   Magnet</td>
<td>equipment</td>
<td>Stem Cell Technologies</td>
<td>18000</td>
<td>		</td>
</tr>
<tr>
<td>5 mL polypropylene tube</td>
<td>equipment</td>
<td>Falcon</td>
<td>352063</td>
<td>		</td>
</tr>
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>Reagent</td>
<td> Invitrogen</td>
<td>22400-089</td>
<td>with 25 mM HEPES</td>
</tr>
<tr>
<td>Pooled human serum</td>
<td>Reagent</td>
<td>N/A</td>
<td>N/A</td>
<td>drawn from healthy donors, heat inactivated and filtered</td>
</tr>
<tr>
<td>Pen Strep</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>1570-063</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>500mL 0.22 micron bottle top filter</td>
<td>equipment</td>
<td>Nalgene</td>
<td>595-3320</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>48-well plate</td>
<td>equipment</td>
<td>Costar</td>
<td>3548</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>37&deg;C CO<sub>2</sub> incubator</td>
<td>equipment</td>
<td>Sanyo Scientific</td>
<td>MCO-18AIC</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>20 mg/mL synthetic peptide</td>
<td>Reagent</td>
<td>N/A</td>
<td>N/A</td>
<td>Custom synthesis from any peptide vendor</td>
</tr>
<tr>
<td>5 mL FACS tube</td>
<td>equipment</td>
<td>Falcon</td>
<td>352008</td>
<td>Polystyrene</td>
</tr>
<tr>
<td>Peptide loaded class II tetramer (as described)</td>
<td>Reagent</td>
<td>N/A</td>
<td>N/A</td>
<td>Prepared by the BRI tetramer core</td>
</tr>
<tr>
<td>Anti-CD3</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD pharmingen</td>
<td>347344</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Anti-CD4</td>
<td>Reagent</td>
<td>eBioscience</td>
<td>17-0049-73</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Anti-CD25</td>
<td>Reagent</td>
<td>eBioscience</td>
<td>11-0259-73</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Facs Calibur Flow Cytometer</td>
<td>equipment</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>342975</td>
<td>Or equivalent</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

visualizing antigen specific cd4+ t cells using mhc class ii tetramers

<p class="jove_content">प्रमुख उतक अनुरूपता परिसर (MHC) वर्ग द्वितीय tetramers विशिष्ट प्रतिजन CD4 के प्रत्यक्ष दृश्य + प्रवाह cytometry द्वारा टी कोशिकाओं की अनुमति देते हैं. इस विधि पेप्टाइड लोड MHC और इसी टी सेल रिसेप्टर के बीच अति विशिष्ट बातचीत पर निर्भर करता है. जबकि एक एक अणु / MHC पेप्टाइड की आत्मीयता कम है, पार से जोड़ने streptavidin साथ MHC / पेप्टाइड परिसरों बातचीत की उत्सुकता बढ़ अभिकर्मकों धुंधला के रूप में उनके उपयोग को सक्षम. सीडी 4 + टी कोशिकाओं (~ एक एक एकल विशिष्टता के लिए 300,000 में) की अपेक्षाकृत कम आवृत्तियों की वजह से इन विट्रो प्रवर्धन चरण में इस परख इस्तेमाल करने के लिए पता लगाने की दहलीज वृद्धि. Mononuclear कोशिकाओं परिधीय रक्त से Ficoll बुनियाद द्वारा शुद्ध कर रहे हैं. सीडी 4 + कोशिकाओं तो नकारात्मक biotinylated एंटीबॉडी कॉकटेल और विरोधी - बायोटिन लेबल चुंबकीय मोतियों का उपयोग चयन के द्वारा अलग कर रहे हैं. अंश CD4 सेल से पक्षपाती कोशिकाओं का उपयोग के रूप में प्रतिजन कोशिकाओं, सीडी 4 + टी कोशिकाओं मीडिया में एक प्रतिजनी पेप्टाइड और आईएल -2 जोड़कर विस्तार कर रहे हैं पेश. विस्तार कोशिकाओं को इसी वर्ग द्वितीय tetramer के साथ एक घंटे के लिए 37 सी में incubating और बाद में दाग ऐसे विरोधी CD4, विरोधी CD3, और विरोधी CD25 के रूप में सतह एंटीबॉडी का उपयोग करके दाग हैं. लेबलिंग के बाद, कोशिकाओं को सीधे प्रवाह cytometry से विश्लेषण किया जा सकता है. tetramer सकारात्मक कोशिकाओं को आमतौर पर विस्तार + CD4 कोशिकाओं के बीच एक विशिष्ट जनसंख्या के रूप में. Tetramer सकारात्मक कोशिकाओं आम तौर पर कर रहे हैं CD25 + और अक्सर CD4 उच्च. क्योंकि पृष्ठभूमि tetramer धुंधला के स्तर पर भिन्न हो सकते हैं, सकारात्मक धुंधला परिणाम हमेशा एक अप्रासंगिक tetramer के साथ ही कोशिकाओं का धुंधला तुलना में किया जाना चाहिए. इस बुनियादी परख के एकाधिक बदलाव संभव हैं. Tetramer सकारात्मक कोशिकाओं आगे प्ररूपी विश्लेषण ELISPOT या प्रसार assays में शामिल, या अन्य माध्यमिक assays के लिए हल किया जा सकता है. कई समूहों को भी सह धुंधला tetramers और या तो साइटोकाइन विरोधी या विरोधी FoxP3 एंटीबॉडी का उपयोग कर दिखा दिया है.</p>

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Visualizing Antigen Specific CD4+ T Cells using MHC Class II Tetramers

<p class="jove_content">यह प्रक्रिया शुद्धि को दर्शाता है और विशिष्ट प्रतिजन सीडी 4 + पूरी परिधीय रक्त और उनके दृश्य का उपयोग कर MHC वर्ग द्वितीय tetramers से टी कोशिकाओं की इन विट्रो विस्तार में. Tetramers एक एकल प्रतिजन विशिष्टता और परिभाषित MHC वर्ग द्वितीय प्रतिबंध के साथ टी कोशिकाओं के प्रत्यक्ष दृश्य परमिट.</p>

Visualizing एंटीजन विशिष्ट सीडी 4 + टी कोशिकाओं का उपयोग MHC कक्षा द्वितीय tetramers

Major histocompatibility complex (MHC) class II tetramers allow the direct visualization of antigen specific CD4+ T cells by flow cytometry.  This method ...

Research

JoVE Journal

Biology

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

+ टी lymphocyte कैद CD4 एचआईवी के लिए एक डिस्पोजेबल microfluidic चिप का उपयोग

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

CD4 के अलगाव + माउस लसीका Miltenyi एमएसीएस शोधन का उपयोग नोड्स से टी कोशिकाओं

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

A Technique to Simultaneously Visualize Virus-Specific CD8+ T Cells and Virus-Infected Cells <em>In situ</em>

A Technique to Simultaneously Visualize Virus-Specific CD8+ T Cells and Virus-Infected Cells In situ

इसके साथ ही वायरस विशिष्ट CD8 + टी कोशिकाओं और वायरस से संक्रमित कोशिकाओं कल्पना के लिए एक तकनीक<em> स्वस्थानी में</em

The numbers and locations of virus-specific CD8+ T cells relative to the numbers and locations of their infected cell targets is thought to be critical in ...

Isolation of Valvular Endothelial Cells

वाल्वुलर endothelial कोशिकाओं के अलगाव

Heart valves are solely responsible for maintaining unidirectional blood flow through the cardiovascular system.  These thin, fibrous tissues are ...

Cell Specific Analysis of <em>Arabidopsis</em> Leaves Using Fluorescence Activated Cell Sorting

Cell Specific Analysis of Arabidopsis Leaves Using Fluorescence Activated Cell Sorting

सेल के विशिष्ट विश्लेषण<em&gt; Arabidopsis</em&gt; प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल छँटाई का उपयोग पत्ते

After initiation of the leaf primordium, biomass accumulation is controlled mainly by cell proliferation and expansion in the leaves1. However, the ...

Visualizing Bacteria in Nematodes using Fluorescent Microscopy

फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग नेमाटोड में जीवाणु Visualizing

 
Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

पेप्टाइड epitopes के मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक उच्च Throughput MHC द्वितीय बंधन परख

Biochemical assays with recombinant human MHC II molecules can provide rapid, quantitative insights into immunogenic epitope identification, deletion, or ...

Detection of Intracellular Gene Expression in Live Cells of Murine, Human and Porcine Origin Using Fluorescence-labeled Nanoparticles

प्रतिदीप्ति लेबल नैनोकणों का उपयोग कर Murine, मानव और सुअर उत्पत्ति के जीवित कोशिकाओं में Intracellular जीन एक्सप्रेशन की जांच

The reprogramming of somatic cells to induced pluripotent stem cells (iPS) has successfully been performed in different mammalian species including mouse, ...

Tracking and Quantifying Developmental Processes in <em>C. elegans</em> Using Open-source Tools

Tracking and Quantifying Developmental Processes in C. elegans Using Open-source Tools

में विकास की प्रक्रिया पर नज़र रखने और बढ़ाता<em&gt; सी। एलिगेंस</em&gt; खुले स्रोत उपकरण का उपयोग

Quantitatively capturing developmental processes is crucial to derive mechanistic models and key to identify and describe mutant phenotypes. Here ...

Isolation of CD4<sup>+</sup> T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper (cTfh) Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

Isolation of CD4+ T-cells and Analysis of Circulating T-follicular Helper cTfh Cell Subsets from Peripheral Blood Using 6-color Flow Cytometry

CD4 का अलगाव<sup>+</sup> टी कोशिकाओं और परिचालित टी के विश्लेषण-तोंसिल्लितिस सहायक (cTfh) परिधीय रक्त से सेल सबसेट का उपयोग कर 6-रंग प्रवाह Cytometry

Aberrant T-follicular helper (Tfh) cell activity is detectable in autoimmune conditions and their presence is associated with clinical outcomes when the ...