Name: cellular toxicity of nanogenomedicine in mcf-7 cell line: mtt assay
Uploaded: 2009-04-03T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay at JoVE.com

<p class="jove_content"> Os autores gostariam de agradecer Tecnologia de Células-Tronco e empresas Shahid Ghazi Tabriz, respectivamente, para a prestação de DMEM sem água vermelha e estéril para injeção de fenol como presentes. </p>

<p class="jove_title"> MCF-7 semeadura em 96 poços da placa: </p><p class="jove_content"> MCF-7 células foram cultivadas em 25 t frasco em meio contendo Médio Modified Dulbecco Águia (DMEM), 10% FBS, 100 U / ml de penicilina e 100 estreptomicina mcg / ml a 37 ° C com 5% de CO <sub>2,</sub> 95% ar e umidade completa. Uma vez alcançada a 90% confluência, eles foram destacados utilizando 0,05% de tripsina / EDTA e contadas por meio de azul de tripano e hemocitômetro. Essas células foram então ressuspendidas a uma concentração de 4 × 1...

<ol>
	<li>Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+pH+Dependence+of+3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium+Bromide-Formazan+Absorption+on+Chemosensitivity+Determined+by+a+Novel+Tetrazolium-based+Assay.">Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay.</a> <em style='font-style: italic'>Cancer Research</em>. <b>49</b>, 4435-4435 (1989).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cellular+Growth+and+Survival:+Application+to+Proliferation+and+Cytotoxicity+Assays.">Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Lmmunological Methods</em>. <b>65</b>, 55-55 (1983).</li><li>Yang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+and+Redox+States+in+the+C6+Glioma+Cells+Following+Acute+Exposure+to+Zn,+Se++4+,+and+Se++6+and+the+Correlation+with+Apoptosis.">Energy and Redox States in the C6 Glioma Cells Following Acute Exposure to Zn, Se +4 , and Se +6 and the Correlation with Apoptosis.</a> <em style='font-style: italic'>Toxicology Mechanisms and Methods</em>. <b>16</b> (1), 13-13 (2006).</li><li>Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols</em>. , 175-177 (2000).</li></ol>

<p class="jove_content"> O ensaio de MTT é considerado um método versátil e, consequentemente, a viabilidade das células poderia ser avaliada após vários tratamentos. A produção de formazan resultante parece ser proporcional ao nível do metabolismo energético nas células. Portanto, é possível medir as células metabolicamente ativados, mesmo na ausência de proliferação celular. A quantidade de formazan produzido é proporcional à quantidade de MTT no meio de incubação. Enquanto, a concentração de MTT que é necessário para...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>25 t-flask</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Orange Scientific</td>
<td>5510100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P3813</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Modified Eagle&#x2019;s Medium - high glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D5671</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MTT</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>M2128</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F2442</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin 200,000 u/ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CinnaGen</td>
<td>CR7913</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Streptomycin 200 mg/ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CinnaGen</td>
<td>CR7912</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>trypsin/EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T3924</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>trypan blue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T8154</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Superfect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>301105</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyfect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>301305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EGFR antisense</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MWG biotech</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scrambled antisense</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MWG biotech</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM without phenol red</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11880</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G8898</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>hemocytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HBG </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>8-channel pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TreffLab Transferpette</td>
<td>96.9918.10.1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Disposable syringe filter </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>IWAKI</td>
<td>2052-025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biotek ELx808</td>
<td>ELX808</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96-well plate with lid (flat bottom)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>IWAKI</td>
<td>3860-096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminar flow hood</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Esco class II Biosafety Cabinet</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CO<sub>2</sub> Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ASTEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

cellular toxicity of nanogenomedicine in mcf-7 cell line: mtt assay

<p class="jove_content">Citotoxicidade da nanogenomedicine futurista (eg, curtas de RNA interferente e antisense) pode prejudicar o seu desenvolvimento clínico. Desses, o medicamento baseadas em genes e / ou seu portador pode provocar toxicidade celular. Para avaliação de citotoxicidade, uma metodologia comum é em grande parte dependente de utilização de 3 - (4, 5-dimetil-2-tiazolil) -2, 5-difenil-2H-tetrazolium brometo de ensaio (MTT), que tem sido amplamente utilizado como uma abordagem colorimétrico baseado na atividade das enzimas desidrogenase mitocondrial nas células. Na presente investigação, MCF-7 foram inoculadas em células de 96 poços da placa e em 50% confluência foram tratados com nanopolyplexes diferentes e submetidos a ensaio de MTT após 24 horas. MTT solúvel em água amarela é metabolizado pelas células metabolicamente ativas para o formazan insolúvel em água roxa, que é mais dissolvido em dimetilsulfóxido pH e Sornson s tampão 10.5. O produto resultante pode ser quantificado por espectrofotometria utilizando um leitor de placas a 570 nm.</p>

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Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay

<p class="jove_content">O MTT é um ensaio simples e reprodutível colorimétrico para avaliação de viabilidade celular com base na redução do MTT amarelo e produção de formazan insolúvel em água roxa. Aqui, a viabilidade de células MCF-7 sobre o tratamento de nanogenomedicine foi avaliada.</p>

Toxicidade celular de Nanogenomedicine em MCF-7 Linhagem Celular: MTT

Cytotoxicity of the futuristic nanogenomedicine (e.g., short interfering RNA and antisense) may hamper its clinical development. Of these, the gene-based ...

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