Name: non-radioactive in situ hybridization protocol applicable for norway spruce and a range of plant species
Uploaded: 2009-04-17T00:00:00
Duration: 11 min 56 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species at JoVE.com

Vi är mycket tacksamma mot Anders Bovin som tillhandahöll musik för vår film och till Michael Elliot Bestånd för volontärarbete vara speakerröst. Stöd kom från Carl Tryggers stiftelse, det strategiska forskningsprogrammet jordbruket funktionsgenomik (AgriFunGen) vid Svenska lantbruksuniversitet, Svenska Vetenskapsrådet (VR) och Svenska Forskningsrådet för miljö, areella näringar och samhällsbyggande (FORMAS ).

<ol>
	<li>Carr, S. M., Irish, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+homeotic+gene+expression+defines+developmental+arrest+stages+in+Brassica+oleracea+L.+vars.+botrytis+and+italica.">Floral homeotic gene expression defines developmental arrest stages in Brassica oleracea L. vars. botrytis and italica.</a> Planta. 201 (2), 179-188 (1997).</li><li>Coen, E. S., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+war+of+the+whorls:+genetic+interactions+controlling+flower+development.">The war of the whorls: genetic interactions controlling flower development.</a> Nature. 353 (6339), 31-37 (1991).</li><li>Jackson, D., Gurr, S. J., McPherson, M. J., Bowles, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+in+plants.">In situ hybridization in plants.</a> Molecular Plant Patology: a practical approach. , (1991).</li><li>Leitch, A. R., Schwarzacher, T., Jackson, D., Leitch, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In situ hybridization: a practical guide. , (1994).</li><li>Smyth, D. R., Bowman, J. L., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+flower+development+in+Arabidopsis.">Early flower development in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 2 (8), 755-767 (1990).</li><li>Azevedo, H., Lino-Neto, T., Tavares, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+high-quality+RNA+isolation+from+needles+of+adult+maritime+pine+trees.">An improved method for high-quality RNA isolation from needles of adult maritime pine trees.</a> Plant Molecular Biology Reporter. , 333-338 (2003).</li><li>Sundstrom, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MADS-box+genes+active+in+developing+pollen+cones+of+Norway+spruce+(Picea+abies)+are+homologous+to+the+B-class+floral+homeotic+genes+in+angiosperms.">MADS-box genes active in developing pollen cones of Norway spruce (Picea abies) are homologous to the B-class floral homeotic genes in angiosperms.</a> Dev Genet. 25 (3), 253-266 (1999).</li><li>Tandre, K., Svenson, M., Svensson, M. E., Engstrom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conservation+of+gene+structure+and+activity+in+the+regulation+of+reproductive+organ+development+of+conifers+and+angiosperms.">Conservation of gene structure and activity in the regulation of reproductive organ development of conifers and angiosperms.</a> Plant J. 15 (5), 615-623 (1998).</li><li>Winter, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MADS-box+genes+reveal+that+gnetophytes+are+more+closely+related+to+conifers+than+to+flowering+plants.">MADS-box genes reveal that gnetophytes are more closely related to conifers than to flowering plants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (13), 7342-7347 (1999).</li><li>Savard, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloroplast+and+nuclear+gene+sequences+indicate+late+Pennsylvanian+time+for+the+last+common+ancestor+of+extant+seed+plants.">Chloroplast and nuclear gene sequences indicate late Pennsylvanian time for the last common ancestor of extant seed plants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91 (11), 5163-5167 (1994).</li><li>Jack, T., Brockman, L. L., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+homeotic+gene+APETALA3+of+Arabidopsis+thaliana+encodes+a+MADS+box+and+is+expressed+in+petals+and+stamens.">The homeotic gene APETALA3 of Arabidopsis thaliana encodes a MADS box and is expressed in petals and stamens.</a> Cell. 68 (4), 683-697 (1992).</li><li>Bowman, J. L., Smyth, D. R., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+directing+flower+development+in+Arabidopsis.">Genes directing flower development in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 1 (1), 37-52 (1989).</li><li>Kramer, E. M., Irish, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+genetic+mechanisms+controlling+petal+development.">Evolution of genetic mechanisms controlling petal development.</a> Nature. 399 (6732), 144-148 (1999).</li><li>Sundstrom, J., Engstrom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conifer+reproductive+development+involves+B-type+MADS-box+genes+with+distinct+and+different+activities+in+male+organ+primordia.">Conifer reproductive development involves B-type MADS-box genes with distinct and different activities in male organ primordia.</a> Plant J. 31 (2), 161-169 (2002).</li><li>Carlsson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+analysis+reveals+altered+expression+of+a+large+number+of+nuclear+genes+in+developing+cytoplasmic+male+sterile+Brassica+napus+flowers.">Microarray analysis reveals altered expression of a large number of nuclear genes in developing cytoplasmic male sterile Brassica napus flowers.</a> Plant J. 49 (3), 452-462 (2007).</li><li>Teixeira, R. T., Farbos, I., Glimelius, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+levels+of+meristem+identity+and+homeotic+genes+are+modified+by+nuclear-mitochondrial+interactions+in+alloplasmic+male-sterile+lines+of+Brassica+napus.">Expression levels of meristem identity and homeotic genes are modified by nuclear-mitochondrial interactions in alloplasmic male-sterile lines of Brassica napus.</a> Plant J. 42 (5), 731-742 (2005).</li><li>Ying, S., Kay, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+of+in+situ+hybridization.">The technique of in situ hybridization.</a> Methods in Molecular Medicine. 56, 263-283 (2001).</li></ol>

Två aspekter av P. Abies protokoll har optimerats i förhållande till A. thaliana / B. napus protokoll, RNase behandling och proteinas K koncentration. Den RNas bort bakgrunden signaler och därmed ökar 17 signalen specificitet. Det proteinas K behandlingen är nödvändig för att permeabilize vävnaderna så att proben kan gå in och hybridisera med RNA-pool av intresse. Den DAL13 antisens sonden gav en högre signal utan RNase-behandling (Fig. 3C, E, G) jämfört med sektioner som behandlats med RNas i 30 min (Figur 2D, F och H). Eftersom RNas-behandling inte förbättrar signalen den togs bort från protokollet. Det proteinas K behandlingen testades vid tre olika koncentrationer, 1, 3 och 5 mikrogram / ml. I fallet P. Abies en låg eller ingen signal observerades med 1 mikrogram / ​​ml proteinas K (Fig. 3C-D). En stark signal erhölls med både 3 mikrogram / ml (Fig. 3E-F) och 5 mikrogram / ml Eftersom ingen märkbar skillnad i signalstyrka (bild 3G-H) proteinas K. hittades vid användning 5 mikrogram / ml proteinas K jämfört med 3 mikrogram / ml, valde vi att använda 3 mikrogram / ml i vårt protokoll. Det är troligt att behovet av en högre proteinas K koncentration i P. Abies manliga kottar jämfört med A. thaliana och B. napus blommiga knoppar beror på att mer kompakt vävnad med högre halter av fenoler och polysackarider. Under fixering och inbäddning vissa skillnader mellan A. thaliana / B. napus protokoll och P. Abies-protokollet är uppenbara. Vävnaden av intresse fast att RNA lagring och detta är ett kritiskt steg, eftersom dåligt fast material kan ge en låg eller icke detekterbar signal även om mRNA är mycket riklig. Vävnaden är uttorkade, rensas och inbäddade i vax i gradvisa förändringar för att undvika vävnadsskada, och i vissa protokoll 0,85% NaCl läggs till etanol i uttorkning för att ytterligare undvika krympning och svullnad i cellerna 3. Den uttorkning steget under inbäddning kan utföras på is för att hålla RNas aktivitet på minimum. I P. abies protokollet 4% paraformaldehyd fixa lösning innehåller 0,25% glutaraldehyd, som är tänkt att ge en bättre RNA behålla 17 trots att vissa hävdar att det förmodligen göra någon skillnad 3. Efter sektionering materialet är fast på diabilder och förbehandlade (dvs avvaxade, uppblött, permeabilized, behandlas för att minska icke-specifik bindning av sonden och slutligen uttorkad) innan hybridisering. I protokollet presenteras här hela upptäckt kan utföras i vanliga laboratorier, utvecklar signalen oftast inom 1-3 dagar och förhållandet mellan signalen över bakgrunden kan kontinuerligt följas upp. I DIG-märkta prober brukar ge en tydligare signal jämfört med radioaktivt märkta prober, är mer stabila och kan återanvändas i rad experiment. Å andra sidan är känsligheten reduceras jämfört med radioaktiva sonder 17. In situ hybridisering upptäcker uttryck med hjälp av en märkt sond specifika för en viss mRNA. Radio-märkning är en robust och känslig märkning metoden men det kräver hantering av radioaktivitet och det tar flera veckor innan resultaten kan upptäckas. Antigen-märkta prober, å andra sidan, är mer stabila, mindre farliga och kräver exponering för att upptäcka medium för ett par dagar endast 17. Således är antigen-märkningssystem som dominerar för närvarande. Det mest kritiska steget oavsett protokoll är sonden design. Försiktighet bör vidtas för att kontrollera att proben har en hög specificitet och är märkt med hög kvalitet UTPs. Ibland hybridisering temperatur och / eller reaktion längd måste anpassas för specifika sonder. Vår nya protokollet bygger på DIG-märkta prober kommer att underlätta lokalisering av mRNA uttryck samtidigt arter allt från A. thaliana till P. abies, och bör med smärre justeringar kunna användas i andra växtarter. Protokollet har förutom manliga koner, har också testats på olika stadier av vegetativa skott och både zygotic och somatiska embryon från P. Abies med goda resultat (opublicerade resultat;. Karlgren et al).

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Acetic anhydride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A6404-200ml</td>
<td>minimum 98%</td>
</tr>
<tr>
<td>Acrylamide, linear</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ambion</td>
<td>9520</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-DIG-antibodies</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blocking reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11 175 041 910 or 11 096 176 001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bovine serum albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A7030-50g</td>
<td>minimum 98%</td>
</tr>
<tr>
<td>Deionized formamide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Denhardts solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D2532-5ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DEPC, diethylpyrocarbonate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextran sulfate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11175025910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutaraldehyde (25%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Histolab products AB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ambion</td>
<td>9510G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Histoclear II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Histolab products AB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>You may use Tissue-clear, Histoclear II, xylen or something similar when embedding your tissue.</td>
</tr>
<tr>
<td>Histowax</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Histolab products AB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Histowax or Paraplast can be used for embedding.</td>
</tr>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P6148-500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraplast plus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P3683-1kg</td>
<td>Histowax or Paraplast can be used for embedding.</td>
</tr>
<tr>
<td>Phusion&#x2122; High-Fidility DNA Polymerase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Finnzymes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Probe-on Plus slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fischer Scientific</td>
<td>22-230-900</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Proteinase K</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P2308-5mg</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNase A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>R5503-100mg</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue-clear</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sakura Finetek Europ&#233; BV</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>You may use Tissue-clear, Histoclear II, xylen or something similar when embedding your tissue.</td>
</tr>
<tr>
<td>Triethanolamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T1377-100ml</td>
<td>minimum 98%</td>
</tr>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>use your standard product in the lab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Use one or both of Triton X-100 and Tween-20.</td>
</tr>
<tr>
<td>tRNA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>83853-100mg</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>use your standard product in the lab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Use one or both of Triton X-100 and Tween-20.</td>
</tr>
<tr>
<td>Western Blue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Promega Corp.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

non-radioactive in situ hybridization protocol applicable for norway spruce and a range of plant species

Den high-throughput expressionsanalys teknik som finns idag ger forskarna ett överflöd av uttryck profiler, men deras upplösning i form av vävnad särskilt uttryck är begränsat på grund av problem i dissekera enskilda vävnader. Uttryck uppgifter måste bekräftas och kompletteras med uttrycket mönster med hjälp av t ex in situ hybridisering, en teknik som används för att lokalisera cellspecifik mRNA uttryck. In situ hybridisering metod är mödosamt, tidskrävande och kräver ofta omfattande optimering beroende på art och vävnad. In situ-försöken är relativt svårare att utföra i Woody arter som barrträd Norge gran (Picea abies). Här presenterar vi en modifierad DIG in situ hybridisering protokollet, som är snabb och tillämpas på ett brett spektrum av växtarter, inklusive P. abies. Med bara några få justeringar, inklusive förändrat RNase behandling och proteinas K koncentration, skulle vi kunna använda protokollet för att studera vävnad särskilt uttryck för homologa gener i manliga könsorgan i en gymnospermerna och två arter gömfröiga växter, s. abies, Arabidopsis thaliana och Brassica napus. Protokollet fungerade lika bra för de arter som studerats och gener. AtAP3 och BnAP3 observerades i andra och tredje whorl blommig organ i A. thaliana och B. napus och DAL13 i microsporophylls av manliga kottar från P. abies. För P. abies det proteinas K koncentration, som används för att permeablize vävnaderna, var tvungen att höjas till 3 g / ml istället för 1 g / ml, möjligen på grund av mer kompakt vävnader och högre nivåer av fenoler och polysackarider. För alla djurslag RNas behandlingen togs bort på grund av minskad signalstyrka utan motsvarande ökning i specificitet. Genom att jämföra vävnad specifikt uttryck mönster av homologa gener från både blommande växter och ett barrträd vi visa att DIG på plats protokoll presenteras här, med endast minimala justeringar, kan appliceras på en mängd olika växtarter. Därför undviker protokollet både omfattande artspecifika optimering och det mödosamma användning av radioaktivt märkt sonder till förmån för DIG märkta prober. Vi har valt att illustrera den tekniskt krävande stegen i protokollet i vår film. Anna Karlgren och Jenny Carlsson bidragit lika för denna studie. Motsvarande författare: Anna Karlgren vid Anna.Karlgren @ ebc.uu.se och Jens F. Sundström vid Jens.Sundstrom @ vbsg.slu.se

Watch this Scientific Journal Video about Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species at JoVE.com

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Vi beskriver en modifierad DIG<em&gt; På plats</em&gt; Hybridisering protokollet, som är snabb och tillämpas på ett brett spektrum av växtarter inklusive Norge gran. Med bara några få justeringar, inklusive förändrat RNase behandling och proteinas K koncentration, kan protokollet användas i studier av olika vävnader och arter.

Icke-radioaktivt På plats Hybridisering protokollet som gäller för Norge gran och en rad arter

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Dubbel Hela Montera in situ hybridisering för tidig kycklingembryon

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafisk Hela Mount högupplöst Dubbel Fluorescerande In Situ Hybridisering

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Fluorescens På plats Hybridisering (FISH) Protokoll i mänskliga spermier

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

En icke-invasiv Hair provtagningsteknik för att med hög kvalitet DNA från Elusive små däggdjur

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

Detektering av viralt RNA genom Fluorescens<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering (FISH)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering i hela Mount Embryon och Cell Histologi Anpassad för marina Elasmobranchii

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering och analys av mRNA-molekyler användning av fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MikroRNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering för formalinfixerad njurvävnad

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

Flat Mount Förberedelse för observation och analys av Zebrafish Embryo Prover Målat av Hela Mount<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model ...

Quick Fluorescent In Situ Hybridization Protocol for Xist RNA Combined with Immunofluorescence of Histone Modification in X-chromosome Inactivation

Quick Fluorescent In Situ Hybridization Protocol for Xist RNA Combined with Immunofluorescence of Histone Modification in X-chromosome Inactivation

Snabb Fluorescerande<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering protokollet för Xist RNA Kombinerad med Immunfluorescens av histonmodifiering i X-kromosomen Inaktive

Combining RNA fluorescent in situ hybridization (FISH) with immunofluorescence (immuno-FISH) creates a technique that can be employed at the single cell ...