Name: the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol
Uploaded: 2009-03-13T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

Wir bedanken uns für die Unterstützung zu BHR durch ein Discovery-Stipendium sowie ein Recherche-Tools und Instrumenten-Stipendium der Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC). Wir erkennen auch H. Oda und die Bloomington Drosophila Lager-Center für die Bereitstellung von genetischen Aktien, die im Beispiel Live-Imaging-Sequenzen verwendet wurden.

Vorbereitung <ol><li> Sammeln Embryonen auf Standard Traubensaft Agar Platten 4. Es ist zweckmäßig, eine automatisierte Drosophila Egg Collector (flymax Scientific Equipment Ltd) zu verwenden. Verwenden von synchronen inszeniert Embryo Sammlungen wird die Zahl der dechorionations, die durchgeführt werden, um eine ausreichende Anzahl von Embryonen in der gewünschten Entwicklungsstadium zu erhalten muss zu reduzieren. </li><li> Bereiten Sie eine dechorionation gleiten durch die Anbringung eines Stück dop...

<ol>
	<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila.">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li><li>Schock, F., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processes+associated+with+germ+band+retraction+in.">Cellular processes associated with germ band retraction in.</a> , 248-2429 (2002).</li><li>Reed, B. H., Wilk, R., Schock, F., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-dependent+apposition+of+Drosophila+extraembryonic+membranes+promotes+morphogenesis+and+prevents+anoikis.">Integrin-dependent apposition of Drosophila extraembryonic membranes promotes morphogenesis and prevents anoikis.</a> Curr. Biol. 14, 372-380 (2004).</li><li>Wieschaus, E. p., Nusslein-Volhard, C., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a practical approach. , 199-227 (1986).</li></ol>

Wir beschreiben eine neue Methode zur Herstellung von Drosophila-Embryonen für die Live-Imaging-Analyse, die wir als die hängenden Tropfen Protokoll. Leider ist es nicht möglich, den hängenden Tropfen-Protokoll verwenden, wenn die Arbeit mit einem inversen Mikroskop. In diesem Fall wird die Sandwich-Technik (wie in der abstrakten oben beschrieben) verwendet werden muss und Kompression der Embryonen weiterhin Anlass zur Sorge. In Experimenten, bei denen Zellen Form und Größe gemessen, u...

Standard-Ausrüstung und Materialien benötigt, um Embryonen für Live-Imaging-Vorbereitung mit dem hängenden Tropfen Protokoll umfassen die folgenden Punkte: Objektträger, Deckgläser (22 x 40 mm, Nr. 2), doppelseitiges Klebeband, Juwelier Pinzetten (Dumont Stil Nr. 5 ), Halocarbonöl Serie 56 und Serie 700 (Halocarbon Products Corp), einem Messer oder einzelne Rasierklinge, Seidenpapier, Schere, destilliertes Wasser, Allzweck-Klebeband und einer Pipette geeignet zur Förderung von 20-40 ul. Die Live-Imaging-Protokoll erfordert auch eine maßgeschneiderte Live-Imaging-Kammer. Dies wird durch das Schneiden eines 5 mm denke Polycarbonat Kunststoffplatten an die Dimensionen eines Standard-Objektträger (75 x 25 mm) und mit einem Rotor zu einem 3mm tiefe Depression in der Folie (20 X 55 mm) erstellen vorbereitet. Der Zugang zu einem Stereomikroskop (Binokular) und eine faseroptische Lichtquelle ist ebenfalls erforderlich.

the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol

Das grün fluoreszierende Protein (GFP)-basierte Zeitraffer Live-imaging ist eine leistungsstarke Technik für die Untersuchung der genetischen Regulation von dynamischen Prozessen wie Gewebemorphogenese, Zell-Zell-Adhäsion oder Zelltod. Drosophila-Embryos, die GFP sind leicht abgebildet entweder mit stereoskopischen oder konfokalen Mikroskopie. Ein Ziel eines jeden Live-imaging-Protokoll ist es, schädliche Auswirkungen wie Dehydratation und Hypoxie zu minimieren. Vorherige Protokolle für die Vorbereitung Drosophila-Embryonen für die Live-imaging-Analyse beteiligt Platzierung dechorionated Embryonen in Halocarbonöl und sandwiching sie zwischen einem Halogenkohlenwasserstoff gasdurchlässige Membran und einem Deckglas<sup&gt; 1-3</sup&gt;. Die Einführung der Kompression durch die Montage Embryonen auf diese Weise stellt eine unerwünschte Komplikation für biomechanische-basierte Analyse der Morphogenese. Unsere Methode, die wir als die hängenden Tropfen Protokoll, ergeben sich ausgezeichnete Lebensfähigkeit von Embryonen während der Live-Bildgebung und verlangt nicht, dass Embryonen komprimiert werden. Kurz gesagt, beinhaltet die hängenden Tropfen Protokoll der Platzierung von Embryonen in einem Tropfen Halocarbonöl, die aus einem Deckglas, das ist wiederum in der Position über eine feuchte Kammer fest aufgehängt ist. Neben der Bereitstellung von Gasaustausch und verhindert Austrocknung, nimmt diese Anordnung den Vorteil des Auftriebs von Embryonen in Halocarbonöl sie davon abzuhalten, aus der Position im Zeitraffer Übernahme zu verhindern. Dieses Video beschreibt detailliert, wie zu sammeln und vorzubereiten Drosophila-Embryonen für die Live-Aufnahme nach dem hängenden Tropfen Protokoll. Dieses Protokoll eignet sich für die Bildgebung dechorionated Embryonen mit Stereomikroskopie oder aufrechte Verbindung Fluoreszenzmikroskop.

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The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Eine einfache, kostengünstige und effektive Methode zur Herstellung von Drosophila-Embryonen für die Live-imaging-Analyse vorgestellt. Unser Protokoll sieht vor Feuchtigkeit und Gasaustausch und komprimiert nicht die Drosophila-Embryo. Diese Methode eignet sich für GFP-basierte Live-Darstellung von Drosophila-Embryonen mit einem Stereomikroskop oder aufrecht zusammengesetzte Mikroskop.

Die Herstellung Drosophila Embryonen für Live-Imaging mit dem Hanging-Drop-Protokoll

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Vorbereitung der neuronalen Kulturen aus Midgastrula Bühne Drosophila Embryonen

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Forschung

Biologie

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

In-vitro-Differenzierung von embryonalen Stammzellen der Maus (mES) Zellen unter Verwendung des Hanging-Drop-Methode

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Live-Imaging von Gliazellen Migration in der Drosophila Eye Imaginalscheibe

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Live-Imaging der Zebrafisch embryonalen Gehirn durch konfokale Mikroskopie

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Vorbereitung der Embryonen für Elektronenmikroskopie der Drosophila Embryonale Herz Rohr

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live-Bildgebung Drosophila melanogaster Embryonale Hemocyte Migrationen

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Erstellung von Entwicklungs-und Adult Drosophila Brains und retinae für Live Imaging

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Der Ausarbeitung der einzelnen Drosophila Ei Chambers für Live-Imaging

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live-Imaging von apoptotischen Ausverkauf während<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenese

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

Die Tomate / GFP-FLP / FRT Verfahren zur Live-Imaging von Mosaic Erwachsene<em&gt; Drosophila</em&gt; Sehzellen

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...