Name: the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol
Uploaded: 2009-03-13T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

我々は感謝ディスカバリーグラントだけでなく、研究ツールとカナダ自然科学工学研究評議会（NSERC）からインストゥルメントの助成金を介してBHRにサポートを認めます。我々はまた、H.織田と例のライブイメージングシーケンスで使用された遺伝資源を提供するためのブルーミントンショウジョウバエストックセンターを認めます。

準備<ol><li>標準的なブドウジュース寒天プレート4の胚を収集する。それは自動化されたショウジョウバエの卵コレクタ（Flymax科学機器（株））を使用すると便利です。同期を使用すると、胚のコレクションが必要な発育段階で胚の適切な数値を得るために実行しなければならないdechorionationsの数を減らす予定上演。 </li><li>顕微鏡のスライドに両面テープの一部を添付してdechorionation...

<ol>
	<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila.">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li><li>Schock, F., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processes+associated+with+germ+band+retraction+in.">Cellular processes associated with germ band retraction in.</a> , 248-2429 (2002).</li><li>Reed, B. H., Wilk, R., Schock, F., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-dependent+apposition+of+Drosophila+extraembryonic+membranes+promotes+morphogenesis+and+prevents+anoikis.">Integrin-dependent apposition of Drosophila extraembryonic membranes promotes morphogenesis and prevents anoikis.</a> Curr. Biol. 14, 372-380 (2004).</li><li>Wieschaus, E. p., Nusslein-Volhard, C., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a practical approach. , 199-227 (1986).</li></ol>

我々は、ハンギングドロッププロトコルを呼び出すのライブイメージング解析、のために、ショウジョウバエの胚を作製する新しい方法を説明します。残念ながら、それは倒立顕微鏡を扱う場合ハンギングドロッププロトコルを使用することはできません。このケースで挟み込む技術が（上記の抽象的で説明したように）使用され、胚の圧縮は、懸念のままする必要があります。 <p class="j...

顕微鏡スライド、カバーグラス（22 × 40ミリメートル、2号）、両面テープ、宝石商の鉗子（デュモンスタイル第5号：標準装備し、ハンギングドロッププロトコルを使用して、ライブイメージングのために胚を作成するために必要な材料は、以下の項目が含まれています）、ハロカーボンオイルシリーズ56とシリーズ700（ハロカーボン製品社）、ユーティリティナイフまたは単一のエッジのかみそりの刃、ティッシュペーパー、はさみ、蒸留水、汎用テープ、20〜40μlを配信するための適切なピペット。ライブイメージングプロトコルはまた、カスタムメイドのライブイメージングチャンバーを必要とします。この値は5 mmは標準的な顕微鏡スライド（75 × 25 mm）の寸法にポリカーボネートプラスチックシートを考えるとスライド（20 X 55 mm）を3mmの深いうつ病を作成するにはローターを使って切断することによって調製される。実体顕微鏡（顕微鏡を解剖）と光ファイバ照明用光源へのアクセスも必要です。

the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol

緑色蛍光タンパク質（GFP）をベースボックスに追加ライブイメージングは​​、そのような組織の形態形成、細胞間接着、または細胞死などの動的過程の遺伝的調節を研究するための強力な手法です。 GFPを発現するショウジョウバエの胚は、容易にどちらかの立体または共焦点顕微鏡を用いて画像化している。あらゆるライブイメージングプロトコルの目標は、このような脱水や低酸素などの有害な影響を最小限に抑えることです。ライブイメージング解析のためのショウジョウバエの胚を調製するための以前のプロトコルは、ハロカーボンのオイルでdechorionated胚を配置し、ハロカーボンガス透過膜とカバーの間にそれらを挟む関与している<sup&gt; 1月3日</sup&gt;。この方法で取り付け胚を通じて、圧縮の導入は、形態形成のあらゆる生体力学ベースの解析のために望ましくない合併症を表します。我々はハンギングドロッププロトコルを呼び出す私たちの方法、、ライブイメージング中の胚の優秀な生存率の結果と胚が圧縮されている必要はありません。簡単に言えば、ハンギングドロッププロトコルは、順番に、湿度の高い室以上の位置に固定されるカバーガラス、から中断されているハロカーボンオイルの滴で胚の配置を含む。ガス交換を提供し、脱水を防ぐことに加えて、この配置は、タイムラプス買収時の位置から流出することを防止するためにハロカーボンのオイルの胚の浮力を利用しています。このビデオでは、ハンギングドロッププロトコルを使用して、ライブイメージングのためのショウジョウバエの胚を収集して準備する方法について詳細に説明します。このプロトコルは、実体顕微鏡あるいは直立化合物の蛍光顕微鏡を用いたイメージングdechorionated胚に適しています。

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The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

ライブイメージング解析のためのショウジョウバエの胚を作製する、シンプルで安価な、そして効果的な方法が提示される。我々のプロトコルは、湿度およびガス交換を提供し、ショウジョウバエの胚を圧縮しません。このメソッドは、実体顕微鏡や正立複合顕微鏡を用いてショウジョウバエの胚のGFPベースのライブイメージングに適しています。

の調製ショウジョウバエ</emハンギングドロッププロトコルを使用してライブイメージングのための>胚

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Midgastrulaステージショウジョウバエの胚からの神経培養の準備

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

ハンギングドロップ法を用いたマウス胚性幹（MES）細胞のin vitroにおける分化

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

ショウジョウバエの眼成虫ディスクに付属してグリア細胞の移行のイメージングを生きる

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

共焦点顕微鏡によるゼブラフィッシュ胚の脳のイメージングを生きる

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

の電子顕微鏡のための胚の調製ショウジョウバエ胎児心臓の管

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

のライブイメージングキイロショウジョウバエ胚性血球移行

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

開発と大人の準備ショウジョウバエ</emライブイメージングのための>脳と網膜

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

個々の準備ショウジョウバエ</emライブイメージングのための>エッグチェンバース

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

アポトーシス細胞のクリアランスのイメージング中に生きる<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;胚

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

モザイク大人のライブイメージングのためのトマト/ GFP-FLP / FRT方法<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;視細胞

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

の調製ショウジョウバエ胚