Name: the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol
Uploaded: 2009-03-13T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

우리는 기꺼이 디스커버리 그랜트뿐 아니라 연구 도구 및 자연 과학, 캐나다 공학 연구 협의회 (NSERC)에서 악기 부여를 통해 BHR 지원을 인정합니다. 또한 H.오다와 예제 라이브 영상 시퀀스에 사용되었습니다 유전 주식을 제공하는 블루밍턴 Drosophila 주식 센터를 인정합니다.

준비 <ol><li> 표준 포도 - 쥬스 한천 플레이트 4 배아를 수집합니다. 그것은 자동 Drosophila 에그 콜렉터 (Flymax 첨단 장비 회사)를 이용하시면 편리합니다. 동기를 사용하면 배아 컬렉션 원하는 발달 단계에서 배아의 충분한 숫자를 얻기 위해 수행되어야합니다 dechorionations의 수를 줄일 수 있습니다 개최. </li><li> 현미경 슬라이드에 양면 테이프의 조각을 부착하여 dechorionation 슬라이드를 준비...

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	<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila.">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li><li>Schock, F., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processes+associated+with+germ+band+retraction+in.">Cellular processes associated with germ band retraction in.</a> , 248-2429 (2002).</li><li>Reed, B. H., Wilk, R., Schock, F., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-dependent+apposition+of+Drosophila+extraembryonic+membranes+promotes+morphogenesis+and+prevents+anoikis.">Integrin-dependent apposition of Drosophila extraembryonic membranes promotes morphogenesis and prevents anoikis.</a> Curr. Biol. 14, 372-380 (2004).</li><li>Wieschaus, E. p., Nusslein-Volhard, C., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a practical approach. , 199-227 (1986).</li></ol>

우리는 우리가 매달려 드롭 프로토콜을 호출 라이브 영상 분석에 대한 Drosophila의 배아를 준비하는 새로운 방법을 설명합니다. 불행히도, 거꾸로 현미경으로 작업하는 경우 매달려 놓기 프로토콜을 사용하는 것은 불가능합니다. 이 경우에는 sandwiching 기술은 (같은 추상적 위에서 설명한) 사용하고 배아의 압축 우려 남아 있어야합니다. 세포 모양과 크기가 morphogenetic 운동과 ?...

현미경 슬라이드, coverslips (22 X 40mm, 번호 2), 양면 테이프, 보석의 포셉 (더몬트 스타일 번호 5 : 표준 장비 및 매달려 드롭 프로토콜을 사용하여 라이브 영상을위한 배아를 준비하는 데 필요한 자료는 다음과 같은 항목을 포함 ), 할로 카본 오일 시리즈 56 및 시리즈 700 (할로 카본 제품 주식 회사), 유틸리티 나이프 단일 에지 면도날, 조직 종이, 가위, 증류수, 범용 테이프, 그리고 20-40 μl를 전달하기위한 적합한 pipet. 라이브 영상 프로토콜은 또한 사용자 정의 만든 라이브 영상 챔버가 필요합니다. 이것은 5mm가 표준 현미경 슬라이드 (75 X 25mm)의 크기에 폴리 카보 네이트 플라스틱 시트를 생각 절단 및 슬라이드 (20 X 55mm)에 3mm 깊은 우울증을 생성하기 위해 로터를 사용하여 준비가되어 있습니다. stereomicroscope (현미경을 해부) 및 광섬유 조명 소스도 필요에 액세스할 수 있습니다.

the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol

그린 형광 단백질 (GFP) timelapse 라이브 영상 그러한 조직 morphogenesis, 세포 - 세포 부착, 또는 세포 사망과 같은 동적 프로세스의 유전자 조절을 연구위한 강력한 기법입니다 기반. GFP를 표현 Drosophila의 배아는 즉시 중 입체 또는 공촛점 현미경을 사용하여 몇 군데 있습니다. 살아있는 영상 프로토콜의 목표는 탈수와 hypoxia로 해로운 영향을 최소화하는 것입니다. 라이브 영상 분석을위한 Drosophila의 배아를 준비 이전 프로토콜 할로 카본의 기름에 dechorionated 배아를 삽입하고 할로 카본 가스 투과 막과 coverslip 사이에 그들을 sandwiching 참여했습니다<sup&gt; 1-3</sup&gt;. 이러한 방식으로 장착 배아를 통해 압축의 도입은 morphogenesis의 biomechanical 기반의 분석을위한 바람직하지 않은 복잡을 나타냅니다. 우리가 매달려 드롭 프로토콜, 라이브 영상 중에 태아의 생존에 좋은 결과를 전화 배아를 압축하는 것이 필요하지 않습니다 우리의 방법. 간단히, 매​​달려 드롭 프로토콜은 습기 챔버를 통해 위치에 고정 차례입니다 coverslip,에서 일시 중지되었습니다 할로 카본 오일 드롭 태아의 위치를​​ 포함합니다. 가스 교환을 제공하고 탈수를 방지하는 것 외에도,이 협정 timelapse 취득하는 동안 위치에서 벗어나 표류에서 그들을 방지하기 위해 할로 카본 오일에서 태아의 부력을 활용합니다. 이 동영상은 매달려 드롭 프로토콜을 사용하여 라이브 영상에 대한 Drosophila의 배아를 수집하고 준비하는 방법을 자세히 설명합니다. 이 프로토콜은 stereomicroscopy 또는 수직 복합 형광 현미경을 사용하여 영상 dechorionated 배아에 적합합니다.

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The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

라이브 영상 분석을위한 Drosophila의 배아를 준비, 간단한 저렴하고 효과적인 방법이 제공됩니다. 우리 프로토콜은 습도와 가스 교환을 제공하고 Drosophila의 배아를 압축하지 않습니다. 이 방법은 stereomicroscope 또는 수직 복합 현미경을 사용하여 Drosophila의 배아의 GFP 기반의 라이브 영상에 적합합니다.

의 준비 Drosophila</em공중 드롭 프로토콜을 사용하여 라이브 영상을위한> 태아

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Midgastrula 스테이지 Drosophila의 태아에서 문화의 연결 준비

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

연구

생물학

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

공중 드롭 방법을 사용하여 마우스 배아 줄기 (MES) 세포의 체외 차별에

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Drosophila 아이 Imaginal 디스크에 Glial 세포 이미징 마이 그 레이션 라이브

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

공촛점 현미경으로 Zebrafish 배아 뇌 영상 라이브

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

의 전자 현미경을위한 배아의 준비 Drosophila 태아의 심장 관

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

라이브 영상 Drosophila melanogaster 배아 Hemocyte 마이 그 레이션

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

개발 및 성인의 준비 Drosophila 두뇌와 라이브 영상을위한 Retinae

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

개별 준비 Drosophila</em라이브 이미징을위한> 계란 회의소

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

사멸 세포 간극의 이미지를하는 동안 라이브<em&gt; 초파리</em&gt; 배아

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

모자이크 성인의 라이브 이미징 토마토 / GFP-FLP / FRT 방법<em&gt; 초파리</em&gt; 광 수용체 (photoreceptor)

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...