Name: the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol
Uploaded: 2009-03-13T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

Agradecemos o apoio de HB através de um Grant Descoberta, bem como um instrumentos de pesquisa e Grant Instrumento das Ciências Naturais e Engenharia pesquisas Council of Canada (NSERC). Reconhecemos também H. Oda eo Bloomington Drosophila ações Centro para a prestação de estoques genéticos que foram usadas no exemplo sequências de imagens ao vivo.

Preparação <ol><li> Coletar embriões em placas padrão suco de uva-agar 4. É conveniente usar um sistema automatizado de Drosophila Egg Collector (Flymax Scientific Equipment Ltd.). Usando síncrona encenado coleções embrião irá reduzir o número de dechorionations que devem ser executadas de modo a obter um número suficiente de embriões no estágio de desenvolvimento desejado. </li><li> Prepare um slide dechorionation anexando um pedaço de fita dupla face a uma lâmina de microscópio; remover a...

<ol>
	<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila.">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li><li>Schock, F., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processes+associated+with+germ+band+retraction+in.">Cellular processes associated with germ band retraction in.</a> , 248-2429 (2002).</li><li>Reed, B. H., Wilk, R., Schock, F., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-dependent+apposition+of+Drosophila+extraembryonic+membranes+promotes+morphogenesis+and+prevents+anoikis.">Integrin-dependent apposition of Drosophila extraembryonic membranes promotes morphogenesis and prevents anoikis.</a> Curr. Biol. 14, 372-380 (2004).</li><li>Wieschaus, E. p., Nusslein-Volhard, C., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a practical approach. , 199-227 (1986).</li></ol>

Descrevemos um novo método de preparação de embriões Drosophila para análise de imagens ao vivo, que chamamos de protocolo de gota em suspensão. Infelizmente, não é possível usar o protocolo de gota em suspensão se trabalhar com um microscópio invertido. Neste caso, a técnica de sanduíche (como descrito acima no abstract) deve ser utilizado e compressão dos embriões permanece uma preocupação. Em experimentos onde a forma da célula e tamanho são medidos para calcular força...

Equipamento de série e materiais necessários para preparar embriões para live-imaging usando o protocolo gotas de suspensão incluem os seguintes itens: lâminas de microscópio, lamínulas (22 x 40 mm, n º 2), fita dupla face, fórceps joalheiro (estilo Dumont No. 5 ), óleo de halocarbonos série 56 e série 700 (Halocarbon Products Corp), uma faca ou lâmina de barbear única borda, papel de seda, tesoura, água destilada, fita de propósito geral, e uma pipeta adequada para a entrega mL 20-40. O protocolo de imagens ao vivo também requer uma custom-made câmara de imagens ao vivo. Esta é preparada através do corte de 5 mm acho policarbonato folha de plástico com as dimensões de uma lâmina de microscópio padrão (75 X 25 mm) e usando um rotor para criar uma depressão profunda 3 milímetros no slide (20 X 55 mm). Acesso a um microscópio estereoscópico (microscópio de dissecação) e uma fonte de iluminação de fibra óptica também é necessária.

the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol

Proteína fluorescente verde (GFP) baseado em timelapse ao vivo de imagens é uma técnica poderosa para estudar a regulação genética de processos dinâmicos como a morfogênese do tecido, célula-adesão, ou morte celular. Embriões Drosophila expressando GFP são prontamente fotografada usando um microscópio estereoscópico ou confocal. A meta de qualquer protocolo de live-imaging é minimizar efeitos negativos como a desidratação e hipóxia. Protocolos anteriores para preparar os embriões de Drosophila live-imaging análise envolveram a colocação de embriões dechorionated em óleo halocarbonos e imprensando-los entre um halocarbono gás-permeáveis ​​membrana e uma lamela<sup&gt; 03/01</sup&gt;. A introdução de compressão através de embriões de montagem desta forma representa uma complicação indesejável para qualquer análise biomecânica da morfogênese baseado. Nosso método, que chamamos de o protocolo gotas de suspensão, resulta em excelente viabilidade de embriões durante a imagens ao vivo e não exige que os embriões ser compactado. Resumidamente, o protocolo de gota em suspensão envolve a colocação de embriões em uma gota de óleo halocarbono que está suspensa a partir de uma lamela, que é, por sua vez, fixados em posição através de uma câmara úmida. Além de proporcionar a troca gasosa e impedindo a desidratação, esse arranjo aproveita o empuxo de embriões em óleo halocarbono para impedi-los de drifting fora de posição durante a aquisição timelapse. Este vídeo descreve em detalhes como coletar e preparar Drosophila embriões para geração de imagens ao vivo usando o protocolo de gota em suspensão. Este protocolo é adequado para embriões de imagem dechorionated usando estereomicroscopia ou qualquer microscópio de fluorescência vertical composto.

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The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Um método simples, barato e eficaz de preparação de embriões de Drosophila live-imaging análise é apresentada. Nosso protocolo fornece umidade e as trocas gasosas e não comprimir o embrião de Drosophila. Este método é adequado para GFP baseada em imagens ao vivo de embriões Drosophila usando um estereomicroscópio ou microscópio composto vertical.

Elaboração de Drosophila Os embriões para Live-Imaging Usando o protocolo gota suspensa

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Preparação de culturas de neurônios a partir de embriões Midgastrula Stage Drosophila

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Biologia

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

Na diferenciação in vitro de rato-tronco embrionárias (MES) células usando o método da gota de suspensão

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Imagens ao vivo da migração das células da glia no Disco Drosophila Eye Imaginal

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Vivem de imagem do cérebro Zebrafish embrionárias por microscopia confocal

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparação de embriões de Microscopia Eletrônica do Drosophila Tubo cardíaco embrionário

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Imagens ao vivo de Drosophila melanogaster Embrionárias Migrações hemócitos

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparação de Desenvolvimento e Adultos Drosophila Brains e retina de imagens ao vivo

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparação Individual Drosophila Ovos Câmaras de imagens ao vivo

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Imagens ao vivo de Apuramento celular por apoptose durante<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriogênese

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

O tomate / GFP-FLP / FRT Method for Imaging ao vivo de Mosaico Adulto<em&gt; Drosophila</em&gt; As células fotorreceptoras

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...