Name: the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol
Uploaded: 2009-03-13T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

Мы выражаем глубокую признательность поддержку BHR через Discovery Грант, а также исследовательских инструментов и инструментов Грант естественным наукам и инженерным исследованиям Совета Канады (NSERC). Мы также признаем, Х. Ода и Блумингтон дрозофилы фондового центра, предоставляющая генетические запасы, которые были использованы в пример живой последовательности изображений.

Подготовка <ol><li> Сбор эмбрионов на стандартных виноградного сока агаром 4. Это удобно использовать автоматизированные дрозофилы Яйцо Collector (Flymax Научное оборудование Ltd.) Использование синхронных поставил эмбриона коллекции позволит сократить число dechorionations которые должны быть ?...

<ol>
	<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila.">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li><li>Schock, F., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processes+associated+with+germ+band+retraction+in.">Cellular processes associated with germ band retraction in.</a> , 248-2429 (2002).</li><li>Reed, B. H., Wilk, R., Schock, F., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-dependent+apposition+of+Drosophila+extraembryonic+membranes+promotes+morphogenesis+and+prevents+anoikis.">Integrin-dependent apposition of Drosophila extraembryonic membranes promotes morphogenesis and prevents anoikis.</a> Curr. Biol. 14, 372-380 (2004).</li><li>Wieschaus, E. p., Nusslein-Volhard, C., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a practical approach. , 199-227 (1986).</li></ol>

Мы описываем новый метод подготовки дрозофилы эмбрионов для живого анализа изображений, которые мы называем висячей капли протокола. К сожалению, это не представляется возможным использовать висячей капли протокол, если работать с инвертированным микроскопом. В этом случае сэндвич т...

Стандартное оборудование и материалы, необходимые для подготовки эмбрионов для живого-визуализации с использованием висячей капли протокол включают следующие пункты: предметные стекла, покровные (22 х 40 мм, № 2), двухсторонней ленты, щипцы ювелирного (Дюмон стиле № 5 ), галоидоуглеводородов масла серии 56 и серии 700 (хладон Продукты корпорации), нож или одно лезвие края, папиросная бумага, ножницы, дистиллированная вода, общая лента цели, и пипетка подходит для доставки 20-40 мкл. Жить протокол изображения также требуется заказ живой камеры изображений. Это подготовленный резки 5 мм думаю поликарбонатного пластика лист с размерами стандартного микроскопический слайд (75 х 25 мм) и с помощью ротора для создания 3 мм глубокую депрессию в слайд (20 х 55 мм). Доступ к стереомикроскопа (рассечение микроскопом) и волоконно-оптических источник освещения также требуется.

the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol

Зеленый флуоресцентный белок (GFP)-основанной timelapse жить-визуализации является мощным средством для изучения генетической регуляции динамических процессов, таких как ткани морфогенеза, межклеточной адгезии, или гибель клеток. Дрозофилы эмбрионов выражения GFP легко отображаемого использованием либо стереоскопических или конфокальной микроскопии. Цель любого живого изображения протокол является сведение к минимуму негативных последствий, таких как обезвоживание и гипоксии. Предыдущие протоколы для подготовки дрозофилы эмбрионов для живого изображения анализа привлекли размещения dechorionated эмбрионов в галоидоуглеводородов нефти и сэндвич их между галоидоуглеводородов газа мембраны и покровное<sup&gt; 1-3</sup&gt;. Введение сжатие через монтажные эмбрионы таким образом представляет нежелательные осложнения для любой биомеханического анализа на основе морфогенеза. Наш метод, который мы называем висячей капли протокол, результаты в отличном жизнеспособность эмбрионов во время живого изображения и не требует, чтобы эмбрионы быть сжаты. Короче говоря, висячей капли протокол включает в себя размещение эмбрионов в каплю галоидоуглеводородов нефть, которая подвешивается на покровное, которая, в свою очередь, фиксируется в положении над влажной камере. В дополнение к обеспечению газообмена, предотвращает обезвоживание, этот механизм использует плавучести эмбрионов в галоидоуглеводородов масла, чтобы предотвратить их уходить из положения во время timelapse приобретения. Это видео подробно описывает, как собрать и подготовить дрозофилы эмбрионов для живых визуализации с использованием висячей капли протокола. Этот протокол подходит для работы с изображениями dechorionated эмбрионов использованием stereomicroscopy или любой прямой микроскоп флуоресценции соединения.

Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Простой, недорогой и эффективный способ получения эмбрионов дрозофилы для живого изображения анализ. Наш протокол обеспечивает влажность и газовый обмен и не сжимает эмбриона дрозофилы. Этот метод подходит для GFP основе живого изображения эмбрионов дрозофилы использованием стереомикроскопа или прямого микроскопа соединения.

Подготовка Drosophila Эмбрионы для Live-визуализации с использованием висячей капли протокола

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Подготовка нейронных культур от Midgastrula этапе эмбрионы дрозофилы

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

В пробирке Дифференциация Мышь эмбриональных стволовых (MES) ячеек с использованием висячей капли Метод

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Живая изображений глиальных миграции клеток в диск дрозофилы глаз имагинальных

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Живая съемка данио рерио Эмбриональные мозга с помощью конфокальной микроскопии

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Подготовка эмбрионов для электронной микроскопии Drosophila Эмбриональные трубки сердца

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Живая съемка Дрозофилы Эмбриональные миграции гемоцитов

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Подготовка Разработка и взрослых Drosophila Мозги и сетчатки для живых изображений

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Подготовка индивидуальных Drosophila Яйцо палат для работы с изображениями Онлайн

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Живая съемка апоптоза клеток во время акции<em&gt; Drosophila</em&gt; Эмбриогенеза

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

Томатный / GFP-ФЛП / FRT Метод живых изображений мозаики взрослых<em&gt; Дрозофилы</em&gt; клетки фоторецепторов

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...