Name: the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol
Uploaded: 2009-03-13T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

Agradecemos el apoyo de la HRB a través de una beca de descubrimiento, así como herramientas de investigación y subvención de instrumentos de las Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá (NSERC). También reconocemos H. Oda y el Bloomington Drosophila Stock Center para proporcionar materiales genéticos que se utilizaron en las secuencias de imágenes en vivo ejemplo.

Preparación <ol><li> Recoger los embriones en el estándar placas de agar jugo de uva-4. Es conveniente utilizar un sistema automatizado de Drosophila huevo Collector (flymax Scientific Equipment Ltd.). El uso sincrónico realizaron colecciones embrión reducir el número de dechorionations que se deben realizar a fin de obtener un número suficiente de embriones en la etapa de desarrollo deseado. </li><li> Prepare una diapositiva dechorionation uniendo un pedazo de cinta de doble cara a un portaobjetos de...

<ol>
	<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila.">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li><li>Schock, F., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processes+associated+with+germ+band+retraction+in.">Cellular processes associated with germ band retraction in.</a> , 248-2429 (2002).</li><li>Reed, B. H., Wilk, R., Schock, F., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-dependent+apposition+of+Drosophila+extraembryonic+membranes+promotes+morphogenesis+and+prevents+anoikis.">Integrin-dependent apposition of Drosophila extraembryonic membranes promotes morphogenesis and prevents anoikis.</a> Curr. Biol. 14, 372-380 (2004).</li><li>Wieschaus, E. p., Nusslein-Volhard, C., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a practical approach. , 199-227 (1986).</li></ol>

Se describe un nuevo método de preparación de los embriones de Drosophila para el análisis de imágenes en vivo, lo que llamamos el protocolo de gota. Por desgracia, no es posible utilizar el protocolo de gota si se trabaja con un microscopio invertido. En este caso la técnica de sándwich (como se describe en el resumen anterior) debe ser utilizado y la compresión de los embriones sigue siendo una preocupación. En experimentos donde se mide la forma y el tamaño de la celda con el fin...

Equipamiento de serie y los materiales necesarios para preparar a los embriones para vivir de imágenes utilizando el protocolo de gota incluyen los siguientes elementos: portaobjetos, cubreobjetos (22 x 40 mm, n º 2), cinta de doble cara, pinzas de joyero (Dumont estilo N º 5 ), halocarbonos aceite serie 56 y serie 700 (halocarbonos Products Corp.), un cuchillo o una hoja de un solo filo de la navaja, un pañuelo de papel, tijeras, agua destilada, la cinta de uso general, y una pipeta adecuada para la entrega de l 20-40. El protocolo de imágenes en vivo también se requiere una cámara de medida de imagen en vivo. Este es preparado por el corte de 5 mm que placa de policarbonato de plástico para las dimensiones de un portaobjetos de microscopio estándar (75 x 25 mm) y el uso de un rotor para crear una profunda depresión en la diapositiva 3 mm (20 x 55 mm). El acceso a un microscopio estereoscópico (microscopio de disección) y una fuente de iluminación de fibra óptica es también necesaria.

the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol

La proteína verde fluorescente (GFP) basado en timelapse en vivo de imágenes es una técnica poderosa para el estudio de la regulación genética de procesos dinámicos, como la morfogénesis de tejidos, la adhesión célula-célula, o muerte celular. Embriones de Drosophila que expresan GFP son fácilmente imágenes utilizando microscopía estereoscópica o confocal. Uno de los objetivos del protocolo en vivo de imágenes es reducir al mínimo los efectos perjudiciales tales como la deshidratación y la hipoxia. Protocolos anteriores para la preparación de los embriones de Drosophila para vivir de imágenes de análisis que consistía en colocar los embriones dechorionated en el aceite de halocarbonos y intercalando entre ellos una halocarbonos permeables al gas de membrana y un cubreobjetos<sup&gt; 3.1</sup&gt;. La introducción de compresión a través de embriones de montaje de esta manera representa una complicación indeseable para cualquier análisis biomecánico basado en la morfogénesis. Nuestro método, que llamamos el protocolo de gota, los resultados de la viabilidad de los embriones durante excelentes imágenes en vivo y no requiere que los embriones se comprime. En pocas palabras, el protocolo de gota consiste en la colocación de los embriones en una gota de aceite de halocarbonos que se suspende de un cubreobjetos, que es, a su vez, en una posición fija en una cámara húmeda. Además de proporcionar el intercambio gaseoso y prevención de la deshidratación, este sistema se aprovecha de la flotabilidad de los embriones en el aceite de halocarbonos para evitar que se deriva de su posición durante la adquisición de timelapse. Este vídeo describe en detalle cómo recoger y preparar los embriones de Drosophila para imágenes en vivo a través del protocolo de gota. Este protocolo es adecuado para los embriones de imágenes dechorionated utilizando microscopía estereoscópica o cualquier microscopio de fluorescencia compuesto en posición vertical.

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The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Un método simple, barato y eficaz de la preparación de los embriones de Drosophila para vivir de imágenes de análisis se presenta. El protocolo proporciona la humedad y el intercambio de gases y no comprime el embrión de Drosophila. Este método es adecuado para las buenas prácticas agrarias basadas en imágenes en vivo de embriones de Drosophila utilizando un microscopio estereoscópico o el microscopio compuesto en posición vertical.

La preparación de los Drosophila Los embriones para Live-Imaging utilizando el protocolo de gota

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

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Preparación de cultivos neuronales a partir de embriones de Drosophila Midgastrula Etapa

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Investigación

Biología

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Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

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Preparación de desarrollo y de adultos Drosophila Los cerebros y retinas de imágenes en vivo

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Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

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Preparación Individual Drosophila Huevos Cámaras de Imágenes en directo

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Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Imágenes de Apoptotic Liquidación de células vivas durante<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriogénesis

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

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El tomate / GFP-FLP / FRT Método para imágenes en vivo del mosaico adultos<em&gt; Drosophila</em&gt; Las células fotorreceptoras

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...