Name: the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol
Uploaded: 2009-03-13T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

Vi erkänner tacksamt stöd till BHR genom en Discovery Grant samt ett verktyg för forskning och instrumentet ge från naturvetenskaplig och teknisk forskning Council of Canada (NSERC). Vi erkänner också H. Oda och Bloomington Drosophila beståndet Center för att ge genetiska bestånd som användes i exemplet Bildproduktion sekvenser.

Förberedelser <ol><li> Samla embryon på vanliga druvsaft agarplattor 4. Det är bekvämt att använda ett automatiserat Drosophila Egg Collector (Flymax Scientific Equipment Ltd). Använda synkrona iscensatt embryo samlingar kommer att minska antalet dechorionations som måste utföras för att få tillräckligt många embryon på önskad utvecklingsstadiet. </li><li> Förbered en dechorionation bild genom att fästa en bit dubbelhäftande tejp på ett objektglas, ta bort skyddspapperet från tejpen. </li...

<ol>
	<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila.">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li><li>Schock, F., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+processes+associated+with+germ+band+retraction+in.">Cellular processes associated with germ band retraction in.</a> , 248-2429 (2002).</li><li>Reed, B. H., Wilk, R., Schock, F., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-dependent+apposition+of+Drosophila+extraembryonic+membranes+promotes+morphogenesis+and+prevents+anoikis.">Integrin-dependent apposition of Drosophila extraembryonic membranes promotes morphogenesis and prevents anoikis.</a> Curr. Biol. 14, 372-380 (2004).</li><li>Wieschaus, E. p., Nusslein-Volhard, C., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a practical approach. , 199-227 (1986).</li></ol>

Vi beskriver en ny metod för att förbereda Drosophila embryon för live bildanalys, som vi kallar droppe protokollet. Tyvärr är det inte möjligt att använda den hängande droppe-protokollet om att arbeta med ett inverterat mikroskop. I detta fall sandwiching teknik (som beskrivs i abstrakta ovan) måste användas och komprimering av embryona fortfarande ett problem. I försök där cell form och storlek mäts för att beräkna krafter som är förknippade med morfogenetiska rörelse, ?...

Standard utrustning och material behövs för att förbereda embryon för live-imaging med droppe protokollet innehålla följande punkter: objektglas, täckglas (22 x 40 mm, nr 2), dubbelhäftande tejp, juvelerare pincett (Dumont stil nr 5 ), Halocarbon olja serie 56 och serie 700 (Halocarbon Products Corp), en brukskniv eller enkel egg rakblad, mjukpapper, sax, destillerat vatten, allmänna ändamål band, och en pipett som lämpar sig för leverans av 20-40 l. Den levande bildprotokoll kräver också en skräddarsydd Bildproduktion kammare. Denna framställs genom att klippa ett 5 mm tror polykarbonatplast blad på måtten för ett vanligt objektsglas (75 x 25 mm) och med hjälp av en rotor för att skapa en 3 mm djup depression i bilden (20 x 55 mm). Tillgång till ett stereomikroskop (dissekera mikroskop) och en fiberoptisk belysning källa krävs också.

the preparation of drosophila embryos for live-imaging using the hanging drop protocol

Grönt fluorescerande protein (GFP)-baserade timelapse live-avbildning är en kraftfull teknik för att studera den genetiska regleringen av dynamiska processer såsom vävnad morfogenes, cell-cell adhesion, eller celldöd. Drosophila embryon uttrycka GFP är lätt avbildas med antingen stereoskopiska eller konfokalmikroskopi. Ett mål för varje levande-imaging-protokollet är att minimera negativa effekter som uttorkning och hypoxi. Föregående protokollen för att förbereda Drosophila embryon för live-bildanalys har inneburit att placera dechorionated embryon i Halocarbon olja och sandwiching dem mellan ett Halocarbon gas-membran och ett täckglas<sup&gt; 1-3</sup&gt;. Införandet av kompression genom montering embryon på detta sätt innebär en oönskad komplikation för alla biomekanisk analys av morfogenes. Vår metod, som vi kallar droppe protokollet, resulterar i mycket bra lönsamhet för embryon under live-avbildning och kräver inte att embryon komprimeras. I korthet innebär droppe protokollet placeringen av embryon i en droppe Halocarbon olja som är upphängd på ett täckglas, som i sin tur fast i position över en fuktig kammare. Förutom att ge gasutbyte och förhindrar uttorkning, tar detta arrangemang fördel av bärighet för embryon i Halocarbon olja för att hindra dem från att driva ut från position under Timelapse förvärvet. Denna video beskriver i detalj hur man samlar in och förbereda Drosophila embryon för lever avbildning med droppe protokollet. Detta protokoll är lämplig för avbildning dechorionated embryon med stereomikroskopi eller upprätt förening fluorescensmikroskop.

Watch this Scientific Journal Video about The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol at JoVE.com

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

En enkel, billig och effektiv metod för att förbereda Drosophila embryon för live-bildanalys presenteras. Vår protokollet ger fukt och gas utbyte och inte komprimera Drosophila embryot. Denna metod är lämplig för GFP-baserade Live avbildning av Drosophila embryon med hjälp av ett stereomikroskop eller upprätt sammansatt mikroskop.

Beredningen av Drosophila Embryon för Live-Imaging Använda droppe protokollet

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Beredning av Neuronal kulturer från Midgastrula Stage Drosophila embryon

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro-differentiering av Mouse embryonala stamceller (MES) celler med hängande släpp-metoden

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Live avbildning av gliacellsmarkörer migration i Drosophila Eye Imaginal Disc

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Live avbildning av Zebrafish embryonal hjärna av konfokalmikroskopi

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Beredning av embryon för elektronmikroskopi av Drosophila Embryonala hjärta tub

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live avbildning av Drosophila melanogaster Embryonala Hemocyte Flyttningar

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Beredning av Utveckla och vuxna Drosophila Brains och retinae för Live Imaging

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Framställning av individuella Drosophila Egg Chambers för Live Imaging

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live avbildning av Apoptotic Cell Utförsäljning under<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenesis

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

Den Tomat / GFP-FLP / FRT Metod för Live avbildning av Mosaic vuxen<em&gt; Drosophila</em&gt; ljusmätare celler

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...