Name: measuring replicative life span in the budding yeast
Uploaded: 2009-06-25T00:00:00
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Ce travail a été soutenu par une subvention pour MK et BKK de la Fondation Médicale Ellison. MK est une Ellison Medical Foundation New Scholar liés au vieillissement. Nous tenons à remercier pour l&#39;aide Soumya Kotireddy pendant le tournage.

Partie 1: Préparer des souches et des plaques pour l&#39;analyse de durée de vie réplicative Cette section décrit la préparation des plaques solides YEPD pour une utilisation dans l&#39;expérience durée de vie réplicative et la préparation des cellules de levure pour l&#39;analyse de la durée de vie. <ol><li> En utilisant une technique stérile échéant, de préparer des boîtes de gélose YEPD (extrait de levure 1%, 2% de bacto-peptone, 2% d&#39;agar, 2% de glucose) qui sera utilisé pour les cellu...

<ol>
	<li>Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+yeast+aging.">Recent developments in yeast aging.</a> PLoS Genet. 3, (2007).</li><li>Kaeberlein, M., Conn, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of models for human aging. , 109-120 (2006).</li><li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+evidence+for+conserved+longevity+pathways+between+divergent+eukaryotic+species.">Quantitative evidence for conserved longevity pathways between divergent eukaryotic species.</a> Genome Res. 18, 564-570 (2008).</li><li>Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+aging+in+yeast:+the+means+to+the+end.">Replicative aging in yeast: the means to the end.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29-54 (2008).</li><li>Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+high-throughput+quantitative+analysis+of+yeast+chronological+life+span.">A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63, 113-121 (2008).</li><li>Jiang, J. C., Jaruga, E., Repnevskaya, M. V., Jazwinski, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intervention+resembling+caloric+restriction+prolongs+life+span+and+retards+aging+in+yeast.">An intervention resembling caloric restriction prolongs life span and retards aging in yeast.</a> Faseb J. 14, 2135-2137 (2000).</li><li>Kaeberlein, M., Kirkland, K. T., Fields, S., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sir2-independent+life+span+extension+by+calorie+restriction+in+yeast.">Sir2-independent life span extension by calorie restriction in yeast.</a> PLoS Biol. 2, E296-E296 (2004).</li><li>Lin, S. J., Defossez, P. A., Guarente, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+of+NAD+and+SIR2+for+life-span+extension+by+calorie+restriction+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Requirement of NAD and SIR2 for life-span extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae.</a> Science. 289, 2126-2128 (2000).</li><li>Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+identification+in+yeast+of+conserved+ageing+genes.">Large-scale identification in yeast of conserved ageing genes.</a> Mech Ageing Dev. 126, 17-21 (2005).</li><li>Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+yeast+replicative+life+span+by+TOR+and+Sch9+in+response+to+nutrients.">Regulation of yeast replicative life span by TOR and Sch9 in response to nutrients.</a> Science. 310, 1193-1196 (2005).</li></ol>

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0145-17-0 (214530)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto-Peptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0118-17-0 (211677)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0886-17-0 (288620)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

measuring replicative life span in the budding yeast

Le vieillissement est un processus dégénératif caractérisé par une détérioration progressive des composants cellulaires et des organites résultant de la mortalité. La levure bourgeonnante<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; A été largement utilisée pour étudier la biologie du vieillissement, et plusieurs déterminants de la longévité de la levure a été démontré pour être conservée chez les eucaryotes multicellulaires, y compris les vers, des mouches et des souris<sup&gt; 1</sup&gt;. En raison de l&#39;absence de facilement quantifiables liés à l&#39;âge phénotypes, le vieillissement chez la levure a été testé presque exclusivement par la mesure de la durée de vie des cellules dans des contextes différents, avec deux différents paradigmes durée de vie dans l&#39;usage commun<sup&gt; 2</sup&gt;. Durée de vie chronologique se réfère à la durée pendant laquelle une cellule mère peut survivre dans un non-séparation, la quiescence-état, et est proposé pour servir de modèle pour le vieillissement des cellules post-mitotiques chez les eucaryotes multicellulaires. Durée de vie réplicative, en revanche, renvoie le nombre de cellules filles produites par une cellule mère avant la sénescence, et est pensé pour offrir un modèle de vieillissement des cellules mitotiquement actives. Nous présentons ici un protocole généralisé pour mesurer la durée de vie réplicative des cellules mères en herbe de la levure. L&#39;objectif de l&#39;essai durée de vie réplicative est de déterminer combien de fois chaque bourgeons cellule mère. Les cellules mère et fille peuvent être facilement différenciés par un chercheur expérimenté à l&#39;aide d&#39;un microscope optique standard (grossissement total 160x), tels que le Axioscope Zeiss 40 ou un autre modèle comparable. La séparation physique des cellules filles à partir de cellules mères est réalisé en utilisant un micromanipulateur manuelle équipée d&#39;une aiguille de fibre optique. Typiques des souches de levures en laboratoire de produire des cellules filles de 20 à 30 par la mère et une expérience durée de vie nécessite 2-3 semaines.

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Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

Dans cet article nous présentons un protocole général pour la mesure de la durée de vie réplicative des cellules mères de la levure.

Mesure Life Span réplicative dans la levure bourgeonnante

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Research

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Recherche

Biologie

Quantifying Yeast Chronological Life Span by Outgrowth of Aged Cells

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Analyse du développement d&#39;un phénotype morphologique en fonction de la concentration de protéines dans la levure bourgeonnante

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Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

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Mesure de la cinétique de la transcription d&#39;ARNm dans les cellules vivantes simples

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L&#39;acquisition de fluorescence Time-lapse films de levure bourgeonnante et analyse de la dynamique de cellules uniques en utilisant des greffes

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

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Bourgeonnement de levure extraction et purification des protéines pour l&#39;étude de la fonction, Interactions, et des modifications post-traductionnelles

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Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient (Pf) of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

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La mesure de la perméabilité à l&#39;eau Coefficient osmotique (P<sub&gt; F</sub&gt;) Des cellules sphériques: protoplastes de plantes isolées comme un exemple

Studying AQP regulation mechanisms is crucial for the understanding of water relations at both the cellular and the whole plant levels. Presented here is ...

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Protein Purification Technique qui permet la détection de sumoylation et Ubiquitination de levure bourgeonnante kinétochoriens protéines Ndc10 et Ndc80

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