Name: measuring replicative life span in the budding yeast
Uploaded: 2009-06-25T00:00:00
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Diese Arbeit wurde durch einen Zuschuss zu MK und BKK von der Ellison Medical Foundation unterstützt. MK ist eine Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging. Wir möchten Soumya Kotireddy für die Unterstützung danken, während der Dreharbeiten.

Teil 1: Bereiten Stämme und Platten für replikativen Lebensspanne Analyse Dieser Abschnitt beschreibt die Herstellung der festen YEPD Platten für den Einsatz in der replikativen Lebensspanne Experiment und die Vorbereitung der Hefezellen für Lebensdauer-Analyse. <ol><li> Mit geeigneten sterilen Technik vorzubereiten YEPD Agarplatten (1% Hefeextrakt, 2% Bacto-Pepton, 2% Agar, 2% Glucose), die für die Kultivierung Hefezellen und für replikativen Lebensspanne Analyse verwendet werden. Sie sollten mindestens...

<ol>
	<li>Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+yeast+aging.">Recent developments in yeast aging.</a> PLoS Genet. 3, (2007).</li><li>Kaeberlein, M., Conn, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of models for human aging. , 109-120 (2006).</li><li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+evidence+for+conserved+longevity+pathways+between+divergent+eukaryotic+species.">Quantitative evidence for conserved longevity pathways between divergent eukaryotic species.</a> Genome Res. 18, 564-570 (2008).</li><li>Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+aging+in+yeast:+the+means+to+the+end.">Replicative aging in yeast: the means to the end.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29-54 (2008).</li><li>Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+high-throughput+quantitative+analysis+of+yeast+chronological+life+span.">A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63, 113-121 (2008).</li><li>Jiang, J. C., Jaruga, E., Repnevskaya, M. V., Jazwinski, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intervention+resembling+caloric+restriction+prolongs+life+span+and+retards+aging+in+yeast.">An intervention resembling caloric restriction prolongs life span and retards aging in yeast.</a> Faseb J. 14, 2135-2137 (2000).</li><li>Kaeberlein, M., Kirkland, K. T., Fields, S., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sir2-independent+life+span+extension+by+calorie+restriction+in+yeast.">Sir2-independent life span extension by calorie restriction in yeast.</a> PLoS Biol. 2, E296-E296 (2004).</li><li>Lin, S. J., Defossez, P. A., Guarente, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+of+NAD+and+SIR2+for+life-span+extension+by+calorie+restriction+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Requirement of NAD and SIR2 for life-span extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae.</a> Science. 289, 2126-2128 (2000).</li><li>Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+identification+in+yeast+of+conserved+ageing+genes.">Large-scale identification in yeast of conserved ageing genes.</a> Mech Ageing Dev. 126, 17-21 (2005).</li><li>Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+yeast+replicative+life+span+by+TOR+and+Sch9+in+response+to+nutrients.">Regulation of yeast replicative life span by TOR and Sch9 in response to nutrients.</a> Science. 310, 1193-1196 (2005).</li></ol>

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0145-17-0 (214530)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto-Peptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0118-17-0 (211677)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0886-17-0 (288620)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

measuring replicative life span in the budding yeast

Altern ist ein degenerativer Prozess durch eine progressive Verschlechterung der zellulären Bestandteile und Organellen aufgrund der Mortalität gekennzeichnet. Die Bierhefe<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; Wurde ausgiebig auf die Biologie des Alterns Studie verwendet, und mehrere Determinanten der Hefe Langlebigkeit haben gezeigt, dass in vielzelligen Eukaryoten, einschließlich Würmern konserviert werden, Fliegen und Mäusen<sup&gt; 1</sup&gt;. Aufgrund des Fehlens von leicht quantifizieren Alter-assoziierten Phänotypen, Altern in Hefe wurde fast ausschließlich durch die Messung der Lebensdauer von Zellen in unterschiedlichen Kontexten untersucht, mit zwei unterschiedlichen Lebensdauer Paradigmen im allgemeinen Sprachgebrauch<sup&gt; 2</sup&gt;. Chronologische Lebensdauer bezieht sich auf die Länge der Zeit, dass eine Mutter Zelle kann in einem nicht-teilenden, Ruhe-ähnlichen Zustand zu überleben, wird vorgeschlagen, die als Modell für die Alterung der post-mitotischen Zellen in vielzelligen Eukaryoten dienen. Replikativen Lebensspanne, im Gegensatz dazu bezieht sich die Zahl der Tochterzellen von einer Mutterzelle vor Seneszenz produziert, und es wird vermutet, um ein Modell des Alterns in mitotisch aktiven Zellen. Hier präsentieren wir eine verallgemeinerte Protokoll zur Messung der replikativen Lebensspanne von Hefezellen Mutter-Zellen. Das Ziel der replikativen Lebensspanne Test ist zu bestimmen, wie oft jede Mutterzelle Knospen. Die Mutter und Tochter-Zellen können leicht von einem erfahrenen Wissenschaftler mit einem Standard-Lichtmikroskop (Gesamtvergrößerung 160X), wie die Zeiss Axioskop 40 oder ein anderes vergleichbares Modell unterschieden werden. Die physische Trennung der Tochterzellen von der Mutter-Zellen wird durch eine manuelle Mikromanipulator mit einem Glasfaser-Nadel ausgestattet. Typische Labor Hefestämme produzieren 20-30 Tochterzellen pro Mutter und eine Lebensdauer Experiment erfordert 2-3 Wochen.

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Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

In diesem Artikel präsentieren wir ein allgemeines Protokoll zur Messung der replikativen Lebensspanne von Hefe Mutter-Zellen.

Mess-replikative Lebensspanne in der Hefe

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