Name: measuring replicative life span in the budding yeast
Uploaded: 2009-06-25T00:00:00
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Questo lavoro è stato sostenuto da una borsa di MK e BKK dal Ellison Medical Foundation. MK è una Ellison Medical Foundation Scholar Nuove invecchiamento. Vorremmo ringraziare Soumya Kotireddy per l&#39;assistenza durante le riprese.

Parte 1: Preparare i ceppi e le piastre per l&#39;analisi del ciclo di vita replicativa Questa sezione descrive la preparazione delle lastre solide YEPD per l&#39;uso nella sperimentazione durata replicativa vita e la preparazione di cellule di lievito per l&#39;analisi durata della vita. <ol><li> Utilizzando opportuni tecnica sterile, preparare piastre di agar YEPD (1 estratto di lievito%, 2% bacto-peptone, 2% agar, 2% di glucosio) che verrà utilizzato per la coltura e le cellule di lievito per l&#39;analisi...

<ol>
	<li>Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+yeast+aging.">Recent developments in yeast aging.</a> PLoS Genet. 3, (2007).</li><li>Kaeberlein, M., Conn, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of models for human aging. , 109-120 (2006).</li><li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+evidence+for+conserved+longevity+pathways+between+divergent+eukaryotic+species.">Quantitative evidence for conserved longevity pathways between divergent eukaryotic species.</a> Genome Res. 18, 564-570 (2008).</li><li>Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replicative+aging+in+yeast:+the+means+to+the+end.">Replicative aging in yeast: the means to the end.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29-54 (2008).</li><li>Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+high-throughput+quantitative+analysis+of+yeast+chronological+life+span.">A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63, 113-121 (2008).</li><li>Jiang, J. C., Jaruga, E., Repnevskaya, M. V., Jazwinski, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intervention+resembling+caloric+restriction+prolongs+life+span+and+retards+aging+in+yeast.">An intervention resembling caloric restriction prolongs life span and retards aging in yeast.</a> Faseb J. 14, 2135-2137 (2000).</li><li>Kaeberlein, M., Kirkland, K. T., Fields, S., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sir2-independent+life+span+extension+by+calorie+restriction+in+yeast.">Sir2-independent life span extension by calorie restriction in yeast.</a> PLoS Biol. 2, E296-E296 (2004).</li><li>Lin, S. J., Defossez, P. A., Guarente, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+of+NAD+and+SIR2+for+life-span+extension+by+calorie+restriction+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Requirement of NAD and SIR2 for life-span extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae.</a> Science. 289, 2126-2128 (2000).</li><li>Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+identification+in+yeast+of+conserved+ageing+genes.">Large-scale identification in yeast of conserved ageing genes.</a> Mech Ageing Dev. 126, 17-21 (2005).</li><li>Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+yeast+replicative+life+span+by+TOR+and+Sch9+in+response+to+nutrients.">Regulation of yeast replicative life span by TOR and Sch9 in response to nutrients.</a> Science. 310, 1193-1196 (2005).</li></ol>

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0145-17-0 (214530)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto-Peptone</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0118-17-0 (211677)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems)</td>
<td>DF0886-17-0 (288620)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

measuring replicative life span in the budding yeast

L&#39;invecchiamento è un processo degenerativo caratterizzato da un progressivo deterioramento delle componenti cellulari e gli organelli con conseguente mortalità. Il lievito in erba<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; È stato ampiamente utilizzato per studiare la biologia dell&#39;invecchiamento, e alcuni fattori determinanti di longevità lievito hanno dimostrato di essere conservato negli eucarioti pluricellulari, tra cui vermi, mosche e topi<sup&gt; 1</sup&gt;. A causa della mancanza di facilmente quantificabile associate all&#39;età fenotipi, l&#39;invecchiamento nel lievito sono stati analizzati quasi esclusivamente misurando la durata della vita delle cellule in contesti diversi, con due diversi paradigmi durata nell&#39;uso comune<sup&gt; 2</sup&gt;. Durata cronologica si riferisce alla lunghezza del tempo che una cellula madre può sopravvivere in un non-divisione, quiescenza stato simile, e si propone di servire da modello per l&#39;invecchiamento della post-mitotico in cellule di eucarioti pluricellulari. Durata della vita replicativa, al contrario, si riferisce al numero di cellule figlie prodotte da una cellula madre prima della senescenza, ed è pensato per fornire un modello di invecchiamento nelle cellule mitoticamente attivo. Qui vi presentiamo un protocollo generalizzato per misurare la durata della vita di replicazione di cellule di lievito madre in erba. L&#39;obiettivo del test replicativa durata della vita è quello di determinare quante volte ogni cellula madre germogli. Le cellule madre e figlia possono essere facilmente distinguibili da un ricercatore esperto utilizzando un microscopio a luce standard (totale ingrandimento 160X), come il Axioscope Zeiss 40 o un altro modello comparabile. Separazione fisica delle cellule figlie dalle cellule madre è ottenuta utilizzando un micromanipolatore manuale dotato di una fibra ottica ago. Ceppi di lievito tipici di laboratorio 20-30 produrre cellule figlie per madre e una sperimentazione durata richiede 2-3 settimane.

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Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

In questo articolo vi presentiamo un protocollo generale per misurare la durata della vita di replicazione delle cellule di lievito madre.

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Biology

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Biologia

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