Name: a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae
Uploaded: 2009-03-02T00:00:00
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<p class="jove_content"> Ce travail a été soutenu par la biotechnologie et des sciences biologiques du Conseil de recherches (subvention 31/C15982), les Instituts canadiens de recherche en santé, la Fondation canadienne pour l&#39;innovation, le Fonds de développement des connaissances en Colombie-Britannique, la Fondation Michael Smith pour la recherche en santé (subvention pour CJR Loewen), et lutter pour la vue. </p>

<p class="jove_title"> Matériel et méthodes: </p><ol><li> Les souches de levures: <ul><li> ACP1-GFP (GFP:: Sa): C-terminale de la GFP-tagging ACP1 a été générée par une PCR médiée par recombinaison homologue en utilisant pKT128 plasmide (contient GFP et <em>His5).</em> Les transformants positifs ont été confirmés par microscopie confocale et PCR sur colonie. Le fond souche a été BY7043 (MAT alpha can1Δ:: STE2pr-lue2 lyp1Δ his3Δ1 leu2Δ0 ura3Δ0 met15Δ0) de Boone laboratoire (Tong et Boone, 2006). </li><li> Suppression Mutant A...

<ol>
	<li>Amberg, D. C., Burke, D., Strathern, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Methods in yeast genetics : a Cold Spring Harbor Laboratory course manual</em>. , (2005).</li><li>Tong, A. H., Boone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+genetic+array+analysis+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Synthetic genetic array analysis in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Mol Biol</em>. <b>313</b>, 171-192 (2006).</li></ol>

<p class="jove_content"> Cette méthode peut aider à intégrer efficacement un marqueur mitochondrial, ACP1-GFP dans différents milieux mutant. Elle s&#39;appuie sur l&#39;utilisation d&#39;un système robotique, et peut facilement adoptées pour une utilisation avec n&#39;importe quel système robotisé. Cette procédure peut également être utilisé pour intégrer d&#39;autres types de marqueurs. Par exemple, pour visualiser les ER, nous avons l&#39;habitude utiliser le marqueur Erg11-GFP. Dans nos images représentant, un mutant et une de...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SGA media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>The growth media (YPD) and synthetic dropout media (SD) including LRK and LHRK, and enriched sporulation media used in this protocol is routinely used in yeast molecular biology. Please refer to Methods in Yeast (Amberg et al., 2005) for detailed descriptions.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae

<p class="jove_content">À haut débit des méthodes pour examiner la localisation des protéines ou de la morphologie organite est un outil efficace pour étudier les interactions entre protéines et peuvent contribuer à atteindre une compréhension globale des mécanismes moléculaires. Chez Saccharomyces cerevisiae, avec le développement de la matrice non essentiels du gène de suppression, on peut globalement étudier la morphologie des organites différents comme le réticulum endoplasmique (RE) et de la GFP en utilisant les mitochondries (ou une variante)-marqueurs dans les antécédents de gènes différents. Cependant, les marqueurs de la GFP incorporant dans chaque mutant unique est individuellement un processus laborieux. Ici, nous décrivons une procédure qui est couramment utilisée dans notre laboratoire. En utilisant un système robotisé pour manipuler des tableaux de la levure de haute densité et des techniques de sélection des médicaments, nous pouvons raccourcir considérablement le temps requis et d&#39;améliorer la reproductibilité. En bref, nous traversons un marqueur GFP-taggés mitochondrial (APC1-GFP) à un tableau à haute densité de 4672 mutants de délétion du gène non essentiel par la robotique réplique épinglage. Grâce à la sélection diploïdes, la sporulation, la germination et la sélection marqueur duel, nous retrouvons les deux allèles. En conséquence, chaque mutant haploïde unique contient APC1-GFP incorporé à son locus génomiques. Maintenant, nous pouvons étudier la morphologie des mitochondries dans toutes les antécédents non essentiels mutant. Grâce à cette approche haut débit, nous pouvons facilement étudier et délimiter les voies et les gènes impliqués dans l&#39;héritage et la formation d&#39;organites dans un cadre à l&#39;échelle du génome.</p>

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A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

<p class="jove_content">GFP-protéines de fusion sont largement utilisés pour visualiser les organites par microscopie confocale. Cependant, le dépistage de mutations qui affectent la morphologie des organites exige généralement mutagenèse individuelle et prend du temps. Ici, nous démontrons une méthode pour intégrer simultanément organite-GFP marqueurs dans près de 5000 gènes non essentiels dans la levure.</p>

Une méthode à haut débit pour étudier la morphologie globalement organite chez S. cerevisiae

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

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