Name: a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae
Uploaded: 2009-03-02T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> עבודה זו נתמכה על ידי ביוטכנולוגיה ו מחקר מדעי הביולוגיה המועצה (מענק 31/C15982), מכון מחקר קנדי ​​הבריאות, קרן קנדה עבור חדשנות, פיתוח קולומביה הבריטית קרן ידע, מייקל סמית הקרן לבריאות מחקר (מענק CJR Loewen), ולהילחם על Sight. </p>

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> חומרים ושיטות: </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זני שמרים: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Acp1-GFP (GFP: שלו): בטרמינל C-GFP תיוג של Acp1 נוצר על ידי רקומבינציה הומולוגיים PCR בתיווך באמצעות pKT128 פלסמיד (כולל ה-GFP ו <em>HIS5).</em> Transformants חיובית אושרו על ?...

<ol>
	<li>Amberg, D. C., Burke, D., Strathern, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Methods in yeast genetics : a Cold Spring Harbor Laboratory course manual</em>. , (2005).</li><li>Tong, A. H., Boone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+genetic+array+analysis+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Synthetic genetic array analysis in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Mol Biol</em>. <b>313</b>, 171-192 (2006).</li></ol>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטה זו יכולה לעזור ביעילות לשלב סמן המיטוכונדריה, Acp1-GFP לתוך רקע מוטנטים שונים. היא מסתמכת על שימוש במערכת רובוטית, והוא יכול לאמץ בקלות לשימוש עם כל מערכת רובוטית. הליך זה יכול לשמש גם עבור סוגים אחרים של שילוב סמנים. לדוגמה, כדי להמחיש ER, אנו משתמשים באופן שגרתי את הס...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SGA media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>The growth media (YPD) and synthetic dropout media (SD) including LRK and LHRK, and enriched sporulation media used in this protocol is routinely used in yeast molecular biology. Please refer to Methods in Yeast (Amberg et al., 2005) for detailed descriptions.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae

<p class="jove_content">תפוקה גבוהה שיטות לבחון לוקליזציה חלבון או מורפולוגיה אברון הוא כלי יעיל לחקר אינטראקציות חלבון יכול לעזור להשיג הבנה מקיפה של מסלולים מולקולריים. ב cerevisiae Saccharomyces, עם פיתוח של מערך שאינם חיוניים המחיקה גן, אנחנו יכולים ללמוד באופן גלובלי את המורפולוגיה של אברונים שונים כמו reticulum endoplasmic (ER) ו-GFP באמצעות המיטוכונדריה (או גרסה), סמנים רקע גנטי שונה. עם זאת, סמנים GFP שילוב של מוטציה כל אחד בנפרד הוא תהליך עתיר עבודה. כאן אנו מתארים הליך המשמש באופן שגרתי במעבדה שלנו. באמצעות מערכת רובוטית להתמודד עם צפיפות גבוהה מערכי שמרים מבחר טכניקות סמים, אנחנו יכולים לקצר משמעותית את הזמן הנדרש ולשפר reproducibility. בקיצור, אנחנו חוצים סמן GFP-tagged המיטוכונדריה (Apc1-GFP) למערך צפיפות גבוהה של 4672 מוטציות מחיקה חיוניות הגן על ידי רובוטי העתק מצמיד. באמצעות בחירה דיפלואידי נביטה, נביגה ובחירת סמן כפול, אנו להתאושש גם אללים. כתוצאה מכך, כל מוטציה אחת הפלואידים מכיל Apc1-GFP שולבו ב מוקד הגנומי שלו. כעת, אנו יכולים ללמוד את המורפולוגיה של המיטוכונדריה ברקע שאינם חיוניים כל מוטציה. באמצעות גישה תפוקה גבוהה זו, אנו יכולים ללמוד בנוחות לשרטט את המסלולים ואת גנים המעורבים הירושה לבין היווצרות של האברונים בקביעת הגנום כולו.</p>

Watch this Scientific Journal Video about A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae at JoVE.com

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

<p class="jove_content">GFP-Fusion חלבונים נמצאים בשימוש נרחב כדי להמחיש האברונים ידי מיקרוסקופיה confocal. אולם, ההקרנה של מוטציות המשפיעות על המורפולוגיה של האברונים בדרך כלל דורש mutagenesis הפרט היא זמן רב. הנה, אנחנו מדגימים שיטה לשלב בו זמנית אברון-GFP סמנים כמעט 5,000 שאינם חיוניים גנים בשמרים.</p>

שיטת תפוקה גבוהה ברחבי העולם כדי ללמוד את המורפולוגיה של אברון cerevisiae ס

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Research

JoVE Journal

Biology

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

Assay עבור הידבקות ואת הפלישה אגר ב cerevisiae ס

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

בדיקת רגישות חזותית על מהירות ועל כיוון התנועה של לטאות

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

זיהוי של קומפלקסים חלבונים עם proteomics כמותיים cerevisiae ס

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

Hi-C: שיטה לחקר ארכיטקטורה תלת ממדי של הגנום.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

A High Throughput <em>in situ</em> Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

תפוקה גבוהה<em> באתרו</em> הכלאה שיטה לאפיון דפוסי ביטוי mRNA של העכבר עוברית בדרכי השתן ואברי המין התחתון

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the <em>S. cerevisiae</em> Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

לימוד גיל תלויי חוסר יציבות הגנום באמצעות<em> ס cerevisiae</em> דגם כרונולוגי תוחלת חיים

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Flow Cytometry-based Purification of <em>S. cerevisiae</em> Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

טיהור הזרימה Cytometry מבוסס<em&gt; ס cerevisiae</em&gt; זיגוטות

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Flow Cytometric Analysis of Bimolecular Fluorescence Complementation: A High Throughput Quantitative Method to Study Protein-protein Interaction

ניתוח תזרים cytometric של שלמת הקרינה bimolecular: שיטה כמותית תפוקה גבוהה לחקר אינטראקציה בין חלבונים

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

ניתוח תפוקה גבוהה תמונה של spheroids גידול: יישום תוכנה ידידותי למשתמש כדי למדוד את גודל של spheroids באופן אוטומטי ומדויק

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

הקרנת תפוקה גבוהה עבור כימית מאפננים של גני Post-תעתיק מוסדר

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...