Name: a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae
Uploaded: 2009-03-02T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae at JoVE.com

<p class="jove_content"> इस काम में जैव प्रौद्योगिकी और जैव विज्ञान अनुसंधान परिषद (31/C15982 अनुदान), स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान कनाडा, कनाडा फाउंडेशन के लिए अभिनव, ब्रिटिश कोलंबिया नॉलेज डेवलपमेंट फंड, स्वास्थ्य अनुसंधान के लिए माइकल स्मिथ फाउंडेशन (CJR के लिए अनुदान द्वारा समर्थित किया गया Loewen), और दृष्टि के लिए लड़ो. </p>

<p class="jove_title"> सामग्री और विधियों: </p><ol><li> खमीर उपभेदों: <ul><li> (: उनके GFP): Acp1 GFP - सी टर्मिनल Acp1 GFP-टैगिंग एक पीसीआर की मध्यस्थता मुताबिक़ pKT128 प्लाज्मिड (GFP और <em>HIS5</em> शामिल हैं) का उपयोग पुनर्संयोजन द्वारा उत्पन्न किया गया था. सकारात्म...

<ol>
	<li>Amberg, D. C., Burke, D., Strathern, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Methods in yeast genetics : a Cold Spring Harbor Laboratory course manual</em>. , (2005).</li><li>Tong, A. H., Boone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+genetic+array+analysis+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Synthetic genetic array analysis in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Mol Biol</em>. <b>313</b>, 171-192 (2006).</li></ol>

<p class="jove_content"> इस विधि कुशलतापूर्वक मदद से विभिन्न उत्परिवर्ती पृष्ठभूमि में एक mitochondrial मार्कर, Acp1 - GFP को शामिल कर सकते हैं. यह एक रोबोट प्रणाली के उपयोग पर निर्भर करता है, और आसानी से किसी भी रोबोट प्रणाली के साथ उपयोग के ?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SGA media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>The growth media (YPD) and synthetic dropout media (SD) including LRK and LHRK, and enriched sporulation media used in this protocol is routinely used in yeast molecular biology. Please refer to Methods in Yeast (Amberg et al., 2005) for detailed descriptions.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae

<p class="jove_content">उच्च throughput प्रोटीन स्थानीयकरण या organelle आकारिकी की जांच के तरीकों प्रोटीन बातचीत के अध्ययन के लिए एक प्रभावी उपकरण है और आणविक रास्ते में से एक व्यापक समझ प्राप्त करने में मदद कर सकते हैं. Saccharomyces cerevisiae, गैर जरूरी जीन विलोपन सरणी के विकास के साथ, हम विश्व स्तर पर endoplasmic जालिका (ईआर) और mitochondria (या संस्करण) का उपयोग कर GFP-मार्करों अलग जीन पृष्ठभूमि में की तरह अलग organelles की आकारिकी अध्ययन कर सकते हैं. हालांकि, प्रत्येक एकल उत्परिवर्ती में शामिल GFP मार्करों व्यक्तिगत रूप से एक श्रम गहन प्रक्रिया है. यहाँ, हम एक प्रक्रिया है कि नियमित रूप से हमारी प्रयोगशाला में प्रयोग किया जाता है का वर्णन. एक रोबोट प्रणाली का उपयोग करने के लिए उच्च घनत्व खमीर arrays और दवा चयन तकनीक संभाल करके, हम काफी छोटा कर सकते हैं और समय की आवश्यकता reproducibility सुधार. संक्षेप में, हम रोबोट प्रतिकृति लगाए द्वारा 4672 nonessential जीन विलोपन म्यूटेंट के एक उच्च घनत्व सरणी GFP टैग mitochondrial मार्कर (Apc1 GFP) के पार. द्विगुणित चयन, sporulation अंकुरण, और दोहरी मार्कर के चयन के माध्यम से, हम दोनों alleles ठीक हो. एक परिणाम के रूप में, प्रत्येक अगुणित एकल उत्परिवर्ती अपने जीनोमिक ठिकाना पर शामिल Apc1 GFP शामिल हैं. अब, हम सभी गैर जरूरी उत्परिवर्ती पृष्ठभूमि में mitochondria की आकारिकी अध्ययन कर सकते हैं. उच्च throughput इस दृष्टिकोण का उपयोग करना, हम सुविधा का अध्ययन करने और रास्ते और जीन विरासत में और एक जीनोम चौड़ा सेटिंग में organelles के गठन शामिल चित्रित कर सकते हैं.</p>

Watch this Scientific Journal Video about A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae at JoVE.com

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

<p class="jove_content">GFP संलयन प्रोटीन व्यापक रूप से confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा organelles कल्पना करने के लिए किया जाता है. हालांकि, म्यूटेशनों कि organelles की आकारिकी को प्रभावित करने के लिए स्क्रीनिंग आम तौर पर व्यक्ति mutagenesis की आवश्यकता है और समय लगता है. यहाँ, हम एक विधि के लिए एक साथ खमीर में लगभग +५,००० गैर जरूरी जीन में organelle GFP मार्करों शामिल प्रदर्शित करता है.</p>

एक उच्च throughput के लिए विश्व स्तर पर एस cerevisiae में organelle आकारिकी अध्ययन विधि

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Research

JoVE Journal

Biology

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

आसंजन और एस cerevisiae में अग्रवाल आक्रमण के लिए परख

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

छिपकली में और गति की गति और दिशा के लिए दृश्य संवेदनशीलता परीक्षण

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

मात्रात्मक प्रोटिओमिक्स के साथ एस cerevisiae में प्रोटीन परिसरों की पहचान

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

हाय-C: विधि अध्ययन जीनोम के तीन आयामी वास्तुकला.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

A High Throughput <em>in situ</em> Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

एक उच्च Throughput<em> बगल में</em> संकरण विधि भ्रूण लोअर मूत्रजननांगी माउस पथ में mRNA अभिव्यक्ति पैटर्न विशेषताएँ

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the <em>S. cerevisiae</em> Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

आयु पर निर्भर जीनोमिक अस्थिरता अध्ययन का उपयोग<em> एस. cerevisiae</em> कालानुक्रमिक जीवन मॉडल

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Flow Cytometry-based Purification of <em>S. cerevisiae</em> Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

फ्लो आधारित शोधन<em&gt; एस cerevisiae</em&gt; Zygotes

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Flow Cytometric Analysis of Bimolecular Fluorescence Complementation: A High Throughput Quantitative Method to Study Protein-protein Interaction

Bimolecular प्रतिदीप्ति complementation का प्रवाह cytometric विश्लेषण: प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का अध्ययन करने के लिए एक उच्च Throughput मात्रात्मक विधि

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

ट्यूमर Spheroids के उच्च throughput छवि विश्लेषण: स्वचालित रूप से और सही Spheroids के आकार को मापने के लिए एक उपयोगकर्ता के अनुकूल सॉफ्टवेयर अनुप्रयोग

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

पोस्ट-transcriptionally विनियमित जीन का रासायनिक Modulators के लिए उच्च throughput स्क्रीनिंग

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...