Name: a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae
Uploaded: 2009-03-02T00:00:00
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<p class="jove_content">この作品は、バイオテクノロジーおよび生物科学研究会議（助成金31/C15982）、保健研究、イノベーションのためのカナダ財団、ブリティッシュコロンビア州の知識開発基金、健康研究のためのマイケルスミス財団（助成金CJRへのカナダの協会によってサポートされていましたローウェン）、およびサイトのファイト。 </p>

<p class="jove_title">材料および方法： </p><ol><li>酵母菌株： <ul><li> Acp1 - GFP（GFP：：彼）：Acp1のC末端GFP -タグは、プラスミドpKT128を（GFPと<em>HIS5を</em>含む）を用いてPCRを介した相同組換えにより生成されました。陽性形質転換体は、共焦点顕微鏡とコロニーPCRにより確認した。ブーンラボ（トングとブーン、2006）から：歪みの背景には、BY7043（STE2pr - lue2lyp1Δhis3Δ1leu2Δ0ura3Δ0met15Δ0：MATアルファcan1Δ）であった。 </...

<ol>
	<li>Amberg, D. C., Burke, D., Strathern, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Methods in yeast genetics : a Cold Spring Harbor Laboratory course manual</em>. , (2005).</li><li>Tong, A. H., Boone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+genetic+array+analysis+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Synthetic genetic array analysis in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Mol Biol</em>. <b>313</b>, 171-192 (2006).</li></ol>

<p class="jove_content">このメソッドは、様々な変異体背景にミトコンドリアマーカー、Acp1 - GFPを組み込む効率的に助けることができる。それは、ロボットシステムの使用に依存しており、簡単にロボットシステムで使用するために採用することができます。この手順は、マーカーの他のタイプを組み込むために使用することができます。例えば、ERを視覚化するために、我々は日常的にマーカーErg11 - GFPを使う。?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SGA media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>The growth media (YPD) and synthetic dropout media (SD) including LRK and LHRK, and enriched sporulation media used in this protocol is routinely used in yeast molecular biology. Please refer to Methods in Yeast (Amberg et al., 2005) for detailed descriptions.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae

<p class="jove_content">タンパク質の局在や細胞小器官の形態を調べるためにハイスループット法は、タンパク質相互作用を研究するための効果的なツールであり、分子経路の包括的な理解を達成するの​​に役立ちます。出芽酵母では、非必須遺伝子の欠失配列の発展とともに、我々は世界的に小胞体（ER）およびミトコンドリアを使用してGFP（または変異型）マーカー異なる遺伝子背景のようなさまざまな細胞小器官の形態を学ぶことができます。しかし、それぞれの単一変異に組み込んだGFPマーカーは、個別に労働集約的なプロセスです。ここで、我々は日常的に我々の研究室で使用されている手順を説明します。高密度の酵母アレイと薬剤選択のテクニックを処理するためのロボットシステムを使用することによって、我々は、大幅に必要な時間を短縮し、再現性を向上させることができます。簡単に言えば、我々はロボットレプリカ確保することにより、4672非必須遺伝子の欠失変異体の高密度配列にGFP -タグ付きミトコンドリアマーカー（Apc1 - GFP）を渡ります。二倍体の選択、胞子形成、発芽およびデュアルマーカーの選択を通じ、我々は両方の対立遺伝子を回復する。その結果、それぞれの半数体の単一変異体は、そのゲノム遺伝子座に組み込まApc1 - GFPが含まれています。今、我々はすべての非本質的な変異体バックグラウンドにおけるミトコンドリアの形態を学ぶことができます。このハイスループットアプローチを使用して、私たちは便利な研究とゲノム全体の設定の継承と細胞小器官の形成に関与する経路と遺伝子を描くことができる。</p>

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A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

<p class="jove_content">GFP融合タンパク質は、広く共焦点顕微鏡による細胞小器官を可視化するために使用されます。しかし、細胞小器官の形態に影響を与える変異のスクリーニングは通常、個々の変異誘発を必要とし、時間のかかる作業です。ここで、我々は同時に、酵母のほぼ5000の非必須遺伝子のオルガネラ- GFPマーカーを組み込む方法を示しています。</p>

グローバルS. cerevisiaeの細胞小器官の形態を研究するためにハイスループット法

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Research

JoVE Journal

Biology

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

S. cerevisiaeの接着と寒天の侵略のためのアッセイ

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

トカゲの運動の速度と方向の視覚感度のテスト

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

S. cerevisiaeの定量的プロテオミクスとタンパク質の複合体の同定

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

ハイC：ゲノムの三次元構造を研究する方法。

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

A High Throughput <em>in situ</em> Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

ハイスループット<em>その場で</em胎児マウス下部尿生殖路のmRNAの発現パターンを特徴づける>ハイブリダイゼーション法

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the <em>S. cerevisiae</em> Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

使用年齢に依存するゲノム不安定性を研究して<em> S.出芽酵母</em>時系列寿命モデル

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Flow Cytometry-based Purification of <em>S. cerevisiae</em> Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

のフローサイトメトリーベースの精製<em&gt; S.セレビ</em&gt;受精卵

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Flow Cytometric Analysis of Bimolecular Fluorescence Complementation: A High Throughput Quantitative Method to Study Protein-protein Interaction

二分子蛍光相補のフローサイトメトリー分析：タンパク質 - タンパク質相互作用を研究するためのハイスループット定量法

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

腫瘍球の高スループット画像解析：自動的かつ正確にスフェロイドのサイズを測定するための使いやすいソフトウェアアプリケーション

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

転写後調節される遺伝子の化学モジュレーターのためのハイスループットスクリーニング

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...