Name: a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae
Uploaded: 2009-03-02T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae at JoVE.com

<p class="jove_content"> Эта работа была поддержана биотехнологии и биологических наук Исследовательского Совета (грант 31/C15982), канадского института исследований в области здравоохранения, Канада Фонд инноваций, знаний британской Колумбии Фонд развития, Майкл Смит Фонда медицинских исследований (грант на CJR Лоуэн), и бороться за зрение. </p>

<p class="jove_title"> Материалы и методы: </p><ol><li> Дрожжи штаммов: <ul><li> Acp1-GFP (GFP:: Его): С-концевой GFP-маркировка Acp1 был сгенерирован ПЦР-опосредованной гомологичной рекомбинации использованием плазмиды pKT128 (содержит GFP и <em>HIS5).</em> Положительные трансформанты были подтверждены конфокальной микроскопии и колонии...

<ol>
	<li>Amberg, D. C., Burke, D., Strathern, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Methods in yeast genetics : a Cold Spring Harbor Laboratory course manual</em>. , (2005).</li><li>Tong, A. H., Boone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+genetic+array+analysis+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Synthetic genetic array analysis in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Mol Biol</em>. <b>313</b>, 171-192 (2006).</li></ol>

<p class="jove_content"> Этот метод может помочь эффективно включать митохондриального маркера, Acp1-GFP в различных мутантов фонов. Она основана на использовании роботизированной системы, и может быть легко принята для использования с любыми роботизированной системы. Эта процедура может также использоваться д...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SGA media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>The growth media (YPD) and synthetic dropout media (SD) including LRK and LHRK, and enriched sporulation media used in this protocol is routinely used in yeast molecular biology. Please refer to Methods in Yeast (Amberg et al., 2005) for detailed descriptions.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae

<p class="jove_content">Высокая пропускная способность методов для изучения локализации белка или органелл морфологии является эффективным инструментом для изучения белковых взаимодействий и может помочь в достижении полного понимания молекулярных путей. В CEREVISIAE Saccharomyces, с развитием несущественные массив удаления гена, мы можем глобально исследования морфологии различных органелл, как эндоплазматический ретикулум (ER) и митохондрии использованием GFP (или вариант)-маркеров в разных слоев гена. Однако, включив GFP маркеров в каждом отдельном мутант отдельности трудоемкий процесс. Здесь мы описываем процедуры, которая обычно используется в нашей лаборатории. С помощью роботизированной системы для обработки с высокой плотностью дрожжей массивы и методы препарат выбора, мы можем значительно сократить время, необходимое и повышения воспроизводимости. Короче говоря, мы пересекаем GFP с метками митохондриального маркера (Apc1-GFP), чтобы с высокой плотностью массива 4672 несущественные мутантов удаления гена роботов реплики пиннинга. Через диплоидных отбора, спорообразование, прорастание и двойной выбор маркера, мы возвращаемся обоих аллелей. В результате, каждый гаплоидных одного мутанта содержит Apc1-GFP включены в его геномной локуса. Теперь мы можем изучить морфологию митохондрий во всех несущественных мутант фоне. С помощью этой высокой пропускной подход, мы можем удобно изучать и определять пути и гены, участвующие в наследство и образования органелл генома обстановке.</p>

Watch this Scientific Journal Video about A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae at JoVE.com

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

<p class="jove_content">GFP-синтез белков широко используется для визуализации органелл с помощью конфокальной микроскопии. Тем не менее, скрининг на мутации, которые влияют на морфологию органелл как правило, требует отдельного мутагенеза и занимает много времени. Здесь мы демонстрируем метод одновременно включить органелл-GFP маркеров в почти 5000 несущественные генов у дрожжей.</p>

Высокой пропускной метод глобально исследования морфологии органелл в CEREVISIAE С.

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Research

JoVE Journal

Biology

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

Анализ для адгезии и агар Вторжение в CEREVISIAE С.

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Тестирование зрительной чувствительности к скорости и направления движения в Ящерицы

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

Идентификация белковых комплексов с количественной протеомики в CEREVISIAE С.

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

Привет-C: метод изучения трехмерной архитектуры геномов.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

A High Throughput <em>in situ</em> Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

Высокая пропускная способность<em> На месте</em> Гибридизация метод для характеристики Шаблоны экспрессии мРНК в фетальных Мышь Нижняя урогенитального тракта

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the <em>S. cerevisiae</em> Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

Изучение, зависящими от возраста геномной нестабильности использованием<em> С. CEREVISIAE</em> Хронологические Модель продолжительность жизни

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Flow Cytometry-based Purification of <em>S. cerevisiae</em> Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Проточной цитометрии на основе очистки<em&gt; S. CEREVISIAE</em&gt; Зиготы

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Flow Cytometric Analysis of Bimolecular Fluorescence Complementation: A High Throughput Quantitative Method to Study Protein-protein Interaction

Проточной цитометрии бимолекулярного флуоресценции Комплементация: Высокая пропускная способность Количественный метод изучения взаимодействия белок-белок

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

Высокая пропускная анализ изображений опухолевых сфероидов: Программное обеспечение удобное приложение для измерения размера сфероидов автоматически и точно

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

Высокопроизводительный скрининг для химических модуляторов посттранскрипционно регулируемых генов

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...