Name: a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae
Uploaded: 2009-03-02T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae at JoVE.com

<p class="jove_content"> Bu çalışma, Biyoteknoloji ve Biyolojik Bilimler Araştırma Konseyi (hibe 31/C15982), Kanada Sağlık Araştırma Enstitüleri, Kanada, British Columbia Bilgi Kalkınma Fonu, İnovasyon Vakfı Sağlık Araştırma CJR için Michael Smith Vakfı (hibe tarafından desteklenen Loewen) ve Sight için mücadele. </p>

<p class="jove_title"> Gereç ve yöntem: </p><ol><li> Maya suşları: <ul><li> Acp1-GFP (GFP:: His): Acp1 C-terminali, GFP-etiketleme plazmid pKT128 (GFP ve <em>HIS5</em> içerir) kullanarak PCR-aracılı homolog rekombinasyon tarafından oluşturulan oldu. Pozitif transformants konfokal mikroskopi ve koloni PCR tarafından teyit edildi. Boone laboratuarı (Tong ve Boone, 2006): suşu arka plan BY7043 (STE2pr lue2 lyp1Δ his3Δ1 leu2Δ0 ura3Δ0 met15Δ0 MAT alfa can1Δ). </li><li> Silme Mutant Array (DMA) (xxx:: KanR): gerekli olmayan genlerin...

<ol>
	<li>Amberg, D. C., Burke, D., Strathern, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Methods in yeast genetics : a Cold Spring Harbor Laboratory course manual</em>. , (2005).</li><li>Tong, A. H., Boone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+genetic+array+analysis+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Synthetic genetic array analysis in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Mol Biol</em>. <b>313</b>, 171-192 (2006).</li></ol>

<p class="jove_content"> Bu yöntem çeşitli mutant arka planla mitokondriyal marker, Acp1-GFP dahil verimli bir şekilde yardımcı olabilir. Robotik bir sistem kullanımına dayanır ve herhangi bir robot sistemi ile kullanmak için kolayca kabul edebilir. Bu işlem aynı zamanda belirteç diğer türleri birleştiren için kullanılabilir. Örneğin, ER görselleştirmek için, rutin marker Erg11-GFP kullanabilirsiniz. Temsili görüntü, bir mutant ve Acp1-GFP yapımcısı ile vahşi bir türü visualiz ed mitokondri morfolojisi çalışma...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SGA media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>The growth media (YPD) and synthetic dropout media (SD) including LRK and LHRK, and enriched sporulation media used in this protocol is routinely used in yeast molecular biology. Please refer to Methods in Yeast (Amberg et al., 2005) for detailed descriptions.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a high-throughput method to globally study the organelle morphology in s. cerevisiae

<p class="jove_content">Protein lokalizasyon veya organel morfolojisi incelemek için yüksek verimlilik yöntemleri protein etkileşimleri çalışmak için etkili bir araçtır ve moleküler yollarının kapsamlı bir anlayış elde etmenize yardımcı olabilir. Saccharomyces cerevisiae, zorunlu olmayan gen silme dizi gelişme, global olarak endoplazmik retikulum (ER) ve mitokondri kullanarak GFP (veya türevi) belirteçlerinin farklı gen geçmişleri gibi farklı organellerin morfoloji eğitim görebilirsiniz. Ancak, tek tek her mutant içeren GFP işaretleri, ayrı ayrı emek-yoğun bir süreçtir. Burada, bizim laboratuvarda rutin olarak kullanılan bir prosedür açıklanmaktadır. Yüksek yoğunluklu maya dizileri ve ilaç seçimi teknikleri işlemek için bir robot sistemi kullanarak, önemli ölçüde zaman gerekli kısaltmak ve tekrarlanabilirlik geliştirmek. Kısacası, biz robot çoğaltma iğneleyerek 4672 gerekli olmayan gen silme mutant bir yüksek yoğunluklu bir dizi GFP etiketli mitokondriyal bir işaretleyici (Apc1 GFP) kesişir. Diploid seçimi, sporlanma, çimlenme ve çift işaretleyici seçimi sayesinde, her iki allel kurtarabilirsiniz. Sonuç olarak, her haploid tek mutant Apc1-GFP genomik lokustaki dahil içerir. Şimdi, biz, gerekli olmayan tüm mutant arka planda mitokondri morfolojisi eğitim görebilirsiniz. Bu yüksek verimlilik yaklaşımı kullanarak, uygun bir çalışma ve genom bir ortamda miras ve organellerin oluşumu ilgili yollar ve genler tasvir.</p>

Watch this Scientific Journal Video about A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae at JoVE.com

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

<p class="jove_content">GFP-füzyon proteinleri yaygın konfokal mikroskobi organelleri görselleştirmek için kullanılır. Ancak, genellikle bireysel mutagenez organellerin morfolojisini etkileyen mutasyonlar için tarama gerektirir ve zaman alıcıdır. Burada, neredeyse 5.000 maya gerekli olmayan genlerin aynı anda organel-GFP işaretleri dahil etmek için bir yöntem göstermektedir.</p>

S. cerevisiae &quot;adlı organel morfolojisi küresel çalışma yüksek verimli bir yöntem

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Research

JoVE Journal

Biology

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

S. cerevisiae yapışma ve Agar Invasion için Testi

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Kertenkeleler Hareket Hız ve Yön Visual Hassasiyet Test

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

S. cerevisiae, kantitatif proteomik protein kompleksleri tanımlanması

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

Hi-C: genomların Üç boyutlu Mimari Eğitim Bir Yöntem.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

A High Throughput <em>in situ</em> Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

Yüksek Verimli<em> In situ</emFetal Fare Alt Ürogenital Yolu mRNA İfade Desenler Karakterize> Hibridizasyon Yöntemi

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the <em>S. cerevisiae</em> Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

Yaşa bağımlı Genomik İstikrarsızlık incelenmesi<em> S. cerevisiae</em> Kronolojik ömrü Modeli

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Flow Cytometry-based Purification of <em>S. cerevisiae</em> Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Akış Sitometri tabanlı Arıtma<em&gt; S. cerevisiae</em&gt; Zigot

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Flow Cytometric Analysis of Bimolecular Fluorescence Complementation: A High Throughput Quantitative Method to Study Protein-protein Interaction

Bimoleküler Floresan tamamlama akışı Sitometrik Analizi: Protein-protein etkileşim Eğitim Bir Yüksek Verimli Kantitatif Yöntemi

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

Tümör sferoidlerin Yüksek throughput Görüntü Analizi: Otomatik ve Doğru küremsiler boyutunu ölçmek için kullanıcı-dostu Yazılım Uygulama

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

Post-transkripsiyonel ayarlı genlerin kimyasal Modülatörler için yüksek verimli tarama

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...