Name: lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants
Uploaded: 2009-06-01T00:00:00
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Cette procédure suit dans une large mesure de la technique de transplantation développés pour les poissons grotte par le laboratoire de Bill Jeffrey.

Partie 1: Préparation des embryons Dans ce protocole, nous allons utiliser le symbole JJ xy pour désigner un mutant de poisson zèbre hypothétique objectif. <ol><li> Zebrafish souches sont maintenus dans des conditions standard de facilité de poissons à 28,5 C sur un cycle de 14h light/10h sombre. </li><li> Dans la soirée, les mâles et les femelles lieu du poisson-zèbre souche JJ xy: AB / TU; tg (mGFP) dans un réservoir avec un diviseur de l...

<ol>
	<li>Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+in+situ+screen+provides+molecular+evidence+for+the+induction+of+eye+anterior+segment+structures+by+the+developing+lens.">A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens.</a> Dev Biol. 231, 63-76 (2001).</li><li>Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+the+lens+in+cave+fish+eye+degeneration.">Central role for the lens in cave fish eye degeneration.</a> Science. 289, 631-633 (2000).</li><li>Easter, S. S., Nicola, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+vision+in+the+zebrafish(Danio+rerio).">The development of vision in the zebrafish(Danio rerio).</a> Dev Biol. 180, 646-663 (1996).</li><li>Schmitt, E., Dowling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+eye+morphogenesis+in+the+zebrafish.+Brachydanio+rerio.">Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio.</a> J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).</li><li>Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+the+power+of+forward+genetics--analysis+of+neuronal+diversity+and+patterning+in+the+zebrafish+retina.">Harnessing the power of forward genetics--analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina.</a> Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).</li><li>Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+genetic+approaches+to+the+analysis+of+eye+development+in+zebrafish.">Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish.</a> Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).</li><li>Avanesov, A., Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+study+neurogenesis+in+the+zebrafish+retina.">Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina.</a> Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).</li><li>Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutagenesis+yields+eye+morphological+mutants+with+retinal+and+lens+defects.">Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects.</a> Vision Res. 42, 535-540 (2002).</li><li>Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+amacrine+cell+neurites+to+appropriate+synaptic+laminae+in+the+developing+zebrafish+retina.">Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina.</a> Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).</li></ol>

Plusieurs étapes nécessitent une attention particulière lors de transplantations d&#39;objectif. <ol><li> Aiguisé aiguilles: Il est préférable de préparer plusieurs aiguilles avant d&#39;effectuer la transplantation lentilles, et la pointe de l&#39;aiguille doit être aussi mince que possible. Une aiguille plus épaisse va déchirer plus de tissu en raison de son plus grand diamètre, provoquant une panne dans les yeux pour guérir. </li><li> Organiser les embryons: Juste avant la transplantation, vous devez ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>0.1mm diameter tungsten wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A Johnson Matthey</td>
<td>45086</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose(low melting point)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>39346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate glass capillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>TW 100-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dumont #5</td>
<td>11252-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-678-20C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-683C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CardinalHealth</td>
<td>D1906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants

L&#39;objectif joue un rôle important dans le développement de la cupule optique [1,2]. En utilisant le poisson zèbre comme organisme modèle, les questions concernant le développement lentille peut être adressée. Le poisson zèbre est utile pour des études génétiques en raison de plusieurs caractéristiques avantageuses, y compris de petite taille, taux de fécondité élevé, cycle de vie court, et la facilité d&#39;entretien. Objectif de développement se produit rapidement chez le poisson zèbre. Par 72 HPF, la lentille de poisson zèbre est fonctionnellement matures [3]. L&#39;abondance des ressources génétiques et moléculaires sont disponibles pour soutenir la recherche dans le poisson zèbre. En outre, la similitude de l&#39;œil de poisson zèbre à ceux des autres vertébrés fournit une base pour son utilisation comme un modèle animal d&#39;excellents défauts de l&#39;homme [4-7]. Plusieurs mutants poisson zèbre présentent des anomalies lentilles, y compris des niveaux élevés de mort cellulaire, ce qui dans certains cas, conduit à une dégénérescence complète des tissus lentille [8]. Afin de déterminer si des anomalies de lentilles sont dus à des causes intrinsèques ou à défaut les interactions avec les tissus environnants, la transplantation d&#39;une lentille mutant dans un oeil de type sauvage est effectuée. L&#39;utilisation d&#39;aiguilles métalliques polies au feu, les lentilles de mutant ou de type sauvage sont soigneusement disséquées de l&#39;animal donneur, et transférés dans l&#39;hôte. Afin de distinguer les tissus de type sauvage et mutant, une lignée transgénique est utilisé comme donneur. Cette ligne exprime membranaires GFP dans tous les tissus, y compris l&#39;objectif. Cette technique de transplantation est un outil essentiel dans les études de mutants lentilles poisson zèbre.

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Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

Objectif de développement implique des interactions avec d&#39;autres tissus. Plusieurs mutants oeil de poisson zèbre sont caractérisés par une taille anormalement petite lentille. Ici nous démontrons une expérience de transplantation objectif pour déterminer si ce phénotype est dû à des causes intrinsèques ou des interactions défectueuses avec les tissus qui entourent la lentille.

Objectif transplantation chez le poisson zèbre et son application dans l&#39;analyse de mutants Eye

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

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