Name: lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants
Uploaded: 2009-06-01T00:00:00
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Dieses Verfahren folgt weitgehend der Transplantation Technik zur Höhle Fische durch das Labor von Bill Jeffrey entwickelt.

Teil 1: Vorbereitung der Embryonen In diesem Protokoll werden wir die jj xy Symbol, um eine hypothetische Zebrafisch-Mutante Linse bezeichnen. <ol><li> Zebrafisch-Stämme sind in Standard-Fisch-Anlage Bedingungen bei 28,5 C auf einem 14h light/10h Dunkel-Zyklus gehalten. </li><li> Am Abend statt Männchen und Weibchen der Zebrafisch-Stamm jj xy: AB / TU; tg (mGFP) in einem Tank mit einem Teiler, um sie voneinander zu trennen. Die Nachkommen dieser Kr...

<ol>
	<li>Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+in+situ+screen+provides+molecular+evidence+for+the+induction+of+eye+anterior+segment+structures+by+the+developing+lens.">A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens.</a> Dev Biol. 231, 63-76 (2001).</li><li>Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+the+lens+in+cave+fish+eye+degeneration.">Central role for the lens in cave fish eye degeneration.</a> Science. 289, 631-633 (2000).</li><li>Easter, S. S., Nicola, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+vision+in+the+zebrafish(Danio+rerio).">The development of vision in the zebrafish(Danio rerio).</a> Dev Biol. 180, 646-663 (1996).</li><li>Schmitt, E., Dowling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+eye+morphogenesis+in+the+zebrafish.+Brachydanio+rerio.">Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio.</a> J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).</li><li>Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+the+power+of+forward+genetics--analysis+of+neuronal+diversity+and+patterning+in+the+zebrafish+retina.">Harnessing the power of forward genetics--analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina.</a> Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).</li><li>Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+genetic+approaches+to+the+analysis+of+eye+development+in+zebrafish.">Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish.</a> Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).</li><li>Avanesov, A., Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+study+neurogenesis+in+the+zebrafish+retina.">Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina.</a> Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).</li><li>Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutagenesis+yields+eye+morphological+mutants+with+retinal+and+lens+defects.">Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects.</a> Vision Res. 42, 535-540 (2002).</li><li>Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+amacrine+cell+neurites+to+appropriate+synaptic+laminae+in+the+developing+zebrafish+retina.">Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina.</a> Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).</li></ol>

Mehrere Schritte erfordern besondere Aufmerksamkeit bei der Linse Transplantationen. <ol><li> Geschärft Nadeln: Es ist besser, mehrere Nadeln vor der Durchführung Objektiv Transplantation vorzubereiten, und die Spitze der Nadeln sind so dünn wie möglich. Eine dickere Nadel reißt mehr Gewebe wegen seiner größeren Durchmesser, so dass ein Ausfall in die Augen zu heilen. </li><li> Die Anordnung der Embryonen: Kurz vor der Transplantation müssen die Embryonen Position, so dass sie auf ihren Seiten liegend sind. ...

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>0.1mm diameter tungsten wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A Johnson Matthey</td>
<td>45086</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose(low melting point)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>39346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate glass capillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>TW 100-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dumont #5</td>
<td>11252-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-678-20C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-683C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CardinalHealth</td>
<td>D1906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants

Das Objektiv spielt eine wichtige Rolle in der Entwicklung der Augenbecher [1,2]. Mit der Zebrafisch als Modellorganismus, können Fragen zur Linse Entwicklung angesprochen werden. Der Zebrafisch ist nützlich für genetische Studien durch mehrere vorteilhafte Eigenschaften, einschließlich der kleinen Größe, hohe Fruchtbarkeit, kurzen Lebenszyklus und Pflegeleichtigkeit. Objektiv Entwicklung erfolgt rasch im Zebrafisch. Um 72 HPF, ist die Zebrafisch-Objektiv funktionell ausgereift [3]. Reichlich genetischen und molekularen Ressourcen zur Verfügung stehen, die Forschung im Zebrafisch zu unterstützen. Darüber hinaus bietet die Ähnlichkeit der Zebrafisch-Auge mit denen anderer Wirbeltiere Grundlage für seine Verwendung als ein hervorragendes Tiermodell der menschlichen Mängel [4-7]. Mehrere Zebrafisch-Mutanten weisen Objektiv Anomalien, einschließlich hohe Zelltod, der in einigen Fällen zu einer vollständigen Degeneration der Linse Gewebe [8]. Um festzustellen, ob Objektiv Anomalien aufgrund von inneren Ursachen oder fehlerhafter Interaktionen mit dem umgebenden Gewebe, ist die Transplantation einer Mutante Objektiv in einem Wildtyp-Auge durchgeführt. Mit Feuer-poliertem Metall Nadeln, mutierte oder Wildtyp-Objektive sind sorgfältig aus dem Spendertier seziert, und in die Host. Zur Unterscheidung Wildtyp und Mutante Gewebe, ist eine transgene Linie als Spender verwendet. Diese Linie drückt Membran-gebundenen GFP in allen Geweben, einschließlich der Linse. Diese Transplantation Technik ist ein wichtiges Instrument in den Studien von Zebrafisch-Mutanten-Objektiv.

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Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

Objektiv Entwicklung beinhaltet Wechselwirkungen mit anderen Geweben. Mehrere Zebrafisch Auge Mutanten sind durch eine abnormal kleine Linse Größe aus. Hier zeigen wir eine Linse Transplantation experimentieren, um festzustellen, ob dieser Phänotyp durch inneren Ursachen oder defekte Interaktion mit Gewebe, die das Objektiv umgeben ist.

Objektiv Transplantation in Zebrafisch und ihre Anwendung in der Analyse von Eye-Mutanten

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Die Transplantation von Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafisch

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Forschung

Biologie

The Ladder Rung Walking Task: A Scoring System and its Practical Application.

Die Leitersprosse Walking-Aufgabe: Ein Scoring-System und seine praktische Anwendung.

Progress in the development of animal models for/stroke, spinal cord injury, and other neurodegenerative disease requires tests of high sensitivity to ...

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

Vorbereitung und Kultur der Rat Linsenepithelzellen Explantate für ein Studium der terminalen Differenzierung

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Primäre Kultur und Plasmid Elektroporation der Murine Corti-Organ.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In-vivo-Elektroporation von Morpholinos in die Adult Zebrafisch Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging Adult Zebrafisch

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

Design und Analyse des Temperaturpräferenzverhaltens und seines circadianen Rhythmus in Drosophila

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a ...

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Analyse der Nephron Zusammensetzung und Funktion im erwachsenen Zebrafisch Nieren

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys ...

Sequential Application of Glass Coverslips to Assess the Compressive Stiffness of the Mouse Lens: Strain and Morphometric Analyses

Sequential Anwendung von Glasplättchen die Drucksteifigkeit der Maus Objektiv zu beurteilen: Stamm und morphometrische Analysen

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High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Hochauflösende Zeitraffer-Imaging und automatische Analyse von Dynamik der Mikrotubuli in lebenden menschlichen Endothelzellen aus der Nabelvene

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...