Name: lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants
Uploaded: 2009-06-01T00:00:00
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Questa procedura segue in larga misura la tecnica di trapianto predisposti per i pesci grotta dal laboratorio di Bill Jeffrey.

Parte 1: Preparazione degli embrioni In questo protocollo, useremo il simbolo jj xy per indicare un ipotetico mutante lente zebrafish. <ol><li> Zebrafish ceppi sono mantenuti in condizioni standard impianto di pesce a 28,5 C su un ciclo di 14h light/10h buio. </li><li> In serata, maschi e femmine posto del ceppo zebrafish jj xy: AB / TU; tg (mGFP) in una vasca con un divisore per separare l&#39;uno dall&#39;altro. La progenie di questa croce che espr...

<ol>
	<li>Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+in+situ+screen+provides+molecular+evidence+for+the+induction+of+eye+anterior+segment+structures+by+the+developing+lens.">A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens.</a> Dev Biol. 231, 63-76 (2001).</li><li>Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+the+lens+in+cave+fish+eye+degeneration.">Central role for the lens in cave fish eye degeneration.</a> Science. 289, 631-633 (2000).</li><li>Easter, S. S., Nicola, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+vision+in+the+zebrafish(Danio+rerio).">The development of vision in the zebrafish(Danio rerio).</a> Dev Biol. 180, 646-663 (1996).</li><li>Schmitt, E., Dowling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+eye+morphogenesis+in+the+zebrafish.+Brachydanio+rerio.">Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio.</a> J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).</li><li>Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+the+power+of+forward+genetics--analysis+of+neuronal+diversity+and+patterning+in+the+zebrafish+retina.">Harnessing the power of forward genetics--analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina.</a> Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).</li><li>Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+genetic+approaches+to+the+analysis+of+eye+development+in+zebrafish.">Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish.</a> Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).</li><li>Avanesov, A., Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+study+neurogenesis+in+the+zebrafish+retina.">Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina.</a> Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).</li><li>Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutagenesis+yields+eye+morphological+mutants+with+retinal+and+lens+defects.">Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects.</a> Vision Res. 42, 535-540 (2002).</li><li>Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+amacrine+cell+neurites+to+appropriate+synaptic+laminae+in+the+developing+zebrafish+retina.">Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina.</a> Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).</li></ol>

Diversi passaggi richiede un&#39;attenzione particolare durante trapianti lente. <ol><li> Aghi affilati: E &#39;meglio preparare gli aghi diversi prima di effettuare il trapianto di lenti, e la punta degli aghi deve essere il più sottile possibile. Un ago più spesso si lacerano il tessuto più a causa del suo diametro più ampio, causando un guasto negli occhi per guarire. </li><li> Organizzare gli embrioni: Giusto prima del trapianto è necessario posizionare gli embrioni in modo che siano coricati su un fianco. ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>0.1mm diameter tungsten wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A Johnson Matthey</td>
<td>45086</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose(low melting point)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>39346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate glass capillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>TW 100-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dumont #5</td>
<td>11252-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-678-20C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-683C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CardinalHealth</td>
<td>D1906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants

La lente ha un ruolo importante nello sviluppo della coppa ottica [1,2]. Utilizzando il pesce zebra come organismo modello, le domande riguardanti lo sviluppo dell&#39;obiettivo può essere affrontato. Il pesce zebra è utile per studi di genetica a causa di diverse caratteristiche vantaggiose, tra cui piccole dimensioni, ad alta fecondità, del ciclo di vita breve, e la facilità di cura. Sviluppo lente avviene rapidamente in zebrafish. Da 72 HPF, l&#39;obiettivo zebrafish è funzionalmente maturo [3]. Abbondanti risorse genetiche e molecolari sono a disposizione per sostenere la ricerca in zebrafish. Inoltre, la somiglianza degli occhi zebrafish a quelle di altri vertebrati fornisce basi per il suo uso come un modello animale eccellente di difetti umani [4-7]. Zebrafish mutanti diversi mostrano anomalie lente, tra cui alti livelli di morte cellulare, che in alcuni casi conduce ad una completa degenerazione dei tessuti lente [8]. Per determinare se le anomalie lente sono dovuti a cause intrinseche o difettoso interazioni con i tessuti circostanti, il trapianto di un obiettivo mutante in una wild-type occhio viene eseguita. Utilizzando fuoco lucido aghi di metallo, lenti mutante o wild-type sono accuratamente sezionati dall&#39;animale donatore, e trasferiti nell&#39;ospite. Per distinguere i tessuti wild-type e mutanti, una linea transgenica viene utilizzato come donatore. Questa linea esprime legata alla membrana GFP in tutti i tessuti, compresa la lente. Questa tecnica di trapianto è uno strumento essenziale negli studi di mutanti lente zebrafish.

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Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

Lente sviluppo comporta interazioni con altri tessuti. Diversi mutanti occhio zebrafish sono caratterizzati da una dimensione lente anormalmente piccole. Qui mostriamo un esperimento di trapianto di lente per determinare se questo fenotipo è dovuto a cause intrinseche o le interazioni difettoso con tessuti che circondano l&#39;obiettivo.

Lens trapianto in Zebrafish e la sua applicazione nell&#39;analisi dei Mutanti Eye

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

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