Name: lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants
Uploaded: 2009-06-01T00:00:00
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Este procedimento segue em grande medida a técnica de transplante desenvolvido para peixes caverna pelo laboratório de Bill Jeffrey.

Parte 1: Preparando os embriões Neste protocolo, vamos usar o jj símbolo xy para denotar um mutante lente hipotética zebrafish. <ol><li> Cepas de peixe-zebra são mantidos em condições de instalação padrão peixes em 28,5 C em um ciclo light/10h 14h escuro. </li><li> À noite, os machos e fêmeas lugar da cepa zebrafish jj xy: AB / TU; tg (mGFP) em um tanque com um divisor de separá-los uns dos outros. A progênie desta cruz vai expressar o t...

<ol>
	<li>Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+in+situ+screen+provides+molecular+evidence+for+the+induction+of+eye+anterior+segment+structures+by+the+developing+lens.">A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens.</a> Dev Biol. 231, 63-76 (2001).</li><li>Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+the+lens+in+cave+fish+eye+degeneration.">Central role for the lens in cave fish eye degeneration.</a> Science. 289, 631-633 (2000).</li><li>Easter, S. S., Nicola, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+vision+in+the+zebrafish(Danio+rerio).">The development of vision in the zebrafish(Danio rerio).</a> Dev Biol. 180, 646-663 (1996).</li><li>Schmitt, E., Dowling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+eye+morphogenesis+in+the+zebrafish.+Brachydanio+rerio.">Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio.</a> J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).</li><li>Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+the+power+of+forward+genetics--analysis+of+neuronal+diversity+and+patterning+in+the+zebrafish+retina.">Harnessing the power of forward genetics--analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina.</a> Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).</li><li>Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+genetic+approaches+to+the+analysis+of+eye+development+in+zebrafish.">Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish.</a> Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).</li><li>Avanesov, A., Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+study+neurogenesis+in+the+zebrafish+retina.">Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina.</a> Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).</li><li>Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutagenesis+yields+eye+morphological+mutants+with+retinal+and+lens+defects.">Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects.</a> Vision Res. 42, 535-540 (2002).</li><li>Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+amacrine+cell+neurites+to+appropriate+synaptic+laminae+in+the+developing+zebrafish+retina.">Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina.</a> Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).</li></ol>

Várias etapas requerem atenção especial durante transplantes lente. <ol><li> Afiadas agulhas: É melhor preparar várias agulhas antes de realizar o transplante de lente, e na ponta das agulhas deve ser o mais fino possível. A agulha mais grossa vai rasgar mais tecido devido ao seu maior diâmetro, causando uma falha no olho para curar. </li><li> Organizando os embriões: Direita antes do transplante você deve posicionar os embriões para que eles estão mentindo em seus lados. Ao posicionar, a agarose 1,2% pod...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>0.1mm diameter tungsten wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A Johnson Matthey</td>
<td>45086</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose(low melting point)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>39346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate glass capillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>TW 100-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dumont #5</td>
<td>11252-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-678-20C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-683C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CardinalHealth</td>
<td>D1906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants

A lente tem um papel importante no desenvolvimento do cálice óptico [1,2]. Usando o zebrafish como um organismo modelo, questões relativas ao desenvolvimento da lente pode ser tratada. O peixe-zebra é útil para estudos genéticos, devido a várias características vantajosas, incluindo pequeno tamanho, alta fecundidade, ciclo de vida curto, e facilidade de cuidado. Desenvolvimento lente ocorre rapidamente em zebrafish. Em 72 hpf, a lente zebrafish é funcionalmente maduros [3]. Abundantes recursos genéticos e moleculares estão disponíveis para apoiar a investigação no zebrafish. Além disso, a semelhança do olho zebrafish aos de outros vertebrados fornece base para a sua utilização como excelente modelo animal de defeitos humanos [4-7]. Mutantes zebrafish várias lentes apresentam anormalidades, incluindo altos níveis de morte celular, que em alguns casos, leva a uma degeneração completa de tecidos lente [8]. Para determinar se as anormalidades lente são devido a causas intrínsecas ou com defeito interações com os tecidos circundantes, o transplante de uma lente de mutantes em um olho do tipo selvagem é executada. Agulhas utilizando-fogo de metal polido, lentes mutante ou tipo selvagem são cuidadosamente dissecados do animal doador, e transferido para o host. Para distinguir os tecidos do tipo selvagem e mutante, uma linha de transgênico é usado como o doador. Esta linha expressa ligada à membrana GFP em todos os tecidos, incluindo a lente. Esta técnica de transplante é uma ferramenta essencial nos estudos de mutantes lente zebrafish.

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Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

Lente de desenvolvimento envolve interações com outros tecidos. Mutantes olho várias zebrafish são caracterizados por um tamanho de lente anormalmente pequena. Aqui demonstramos um experimento de transplante de lente para determinar se este fenótipo é devido a causas intrínsecas ou interações com defeito com os tecidos que circundam a lente.

Transplante de lente em Zebrafish e sua Aplicação na Análise de Mutantes Eye

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

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