Name: lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants
Uploaded: 2009-06-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants at JoVE.com

Detta förfarande följer i stor utsträckning transplantation tekniken utvecklats för grottan fisk labbet av Bill Jeffrey.

Del 1: Förbereda embryon I detta protokoll kommer vi att använda JJ xy symbolen för att beteckna en hypotetisk mutant zebrafisk lins. <ol><li> Zebrafisk stammar upprätthålls under standardförhållanden fisk anläggning vid 28,5 C på en 14h light/10h mörker-cykel. </li><li> På kvällen, placera män och kvinnor i zebrafisk stam JJ xy: AB / TU, TG (mGFP) i en tank med en avdelare för att skilja dem från varandra. Avkomman av detta kors komme...

<ol>
	<li>Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+in+situ+screen+provides+molecular+evidence+for+the+induction+of+eye+anterior+segment+structures+by+the+developing+lens.">A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens.</a> Dev Biol. 231, 63-76 (2001).</li><li>Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+the+lens+in+cave+fish+eye+degeneration.">Central role for the lens in cave fish eye degeneration.</a> Science. 289, 631-633 (2000).</li><li>Easter, S. S., Nicola, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+vision+in+the+zebrafish(Danio+rerio).">The development of vision in the zebrafish(Danio rerio).</a> Dev Biol. 180, 646-663 (1996).</li><li>Schmitt, E., Dowling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+eye+morphogenesis+in+the+zebrafish.+Brachydanio+rerio.">Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio.</a> J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).</li><li>Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+the+power+of+forward+genetics--analysis+of+neuronal+diversity+and+patterning+in+the+zebrafish+retina.">Harnessing the power of forward genetics--analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina.</a> Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).</li><li>Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+genetic+approaches+to+the+analysis+of+eye+development+in+zebrafish.">Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish.</a> Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).</li><li>Avanesov, A., Malicki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+study+neurogenesis+in+the+zebrafish+retina.">Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina.</a> Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).</li><li>Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutagenesis+yields+eye+morphological+mutants+with+retinal+and+lens+defects.">Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects.</a> Vision Res. 42, 535-540 (2002).</li><li>Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+amacrine+cell+neurites+to+appropriate+synaptic+laminae+in+the+developing+zebrafish+retina.">Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina.</a> Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).</li></ol>

Flera steg kräver särskild uppmärksamhet under lins transplantationer. <ol><li> Vässade nålar: Det är bättre att förbereda flera nålar innan de utför lins transplantation, och spetsen på nålar bör vara så tunn som möjligt. En tjockare nål kommer slita mer vävnad på grund av sin större diameter, vilket orsakar ett fel i ögat att läka. </li><li> Arrangera embryona: Precis innan transplantation Du måste placera embryon så att de ligger på deras sidor. När positionering, 1,2% agaros kan hårdna ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>0.1mm diameter tungsten wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A Johnson Matthey</td>
<td>45086</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose(low melting point)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>39346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate glass capillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>TW 100-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dumont #5</td>
<td>11252-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-678-20C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>13-683C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CardinalHealth</td>
<td>D1906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

lens transplantation in zebrafish and its application in the analysis of eye mutants

Linsen spelar en viktig roll i utvecklingen av optiska bägaren [1,2]. Använda zebrafisk som modell organism, kan frågor kring objektiv utveckling tas upp. Den zebrafisk är användbar för genetiska studier på grund av flera fördelaktiga egenskaper, inklusive små, hög fruktsamhet, kort livslängd och enkel vård. Lens utvecklingen sker snabbt i zebrafisk. Genom 72 HPF är zebrafisk objektivet funktionellt mogna [3]. Rik genetiska och molekylära resurser finns tillgängliga för att stödja forskning inom zebrafisk. Dessutom ger de likartade zebrafisk ögat som för andra ryggradsdjur grunden för dess användning som ett utmärkt djurmodell av mänskliga fel [4-7]. Flera zebrafisk mutanter uppvisar lins avvikelser, bland annat höga halter av celldöd, som i vissa fall leder till en total degeneration av objektiv vävnader [8]. För att avgöra om linsen avvikelser beror på inneboende orsaker eller att defekt interaktion med omgivande vävnader, är transplantation av en mutant objektiv till ett wild-type öga utförs. Använda brand-polerad metall nålar, muterade eller vildtyp linserna är noggrant dissekeras från donatordjuret, och överföras till värden. För att skilja vildtyp och mutant vävnader, är en transgen linje används som givare. Denna linje uttrycker membranbundna GFP i alla vävnader, inklusive linsen. Denna transplantation teknik är ett viktigt verktyg i studier av zebrafisk lins mutanter.

Watch this Scientific Journal Video about Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants at JoVE.com

Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

Lens utveckling innebär interaktion med andra vävnader. Flera zebrafisk ögat mutanter karaktäriseras av en onormalt liten lins storlek. Här visar vi ett experiment lins transplantation för att avgöra om denna fenotyp beror på inneboende orsaker eller defekt interaktion med vävnad som omger linsen.

Lens Transplantation i Zebrafish och dess tillämpning i analysen av Eye Mutanter

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Transplantation av hela Njure Marrow i vuxen Zebrafish

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

The Ladder Rung Walking Task: A Scoring System and its Practical Application.

Trappan Rung Walking Uppgift: ett poängsystem och dess praktiska tillämpning.

Progress in the development of animal models for/stroke, spinal cord injury, and other neurodegenerative disease requires tests of high sensitivity to ...

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

Upprättande och kultur Epithelial Råtta Lens explants för att studera terminal differentiering

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Primär Kultur och Plasmid elektroporation av Murine organ Corti.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo elektroporering av Morpholinos i Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging vuxna zebrafisk

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

Design och analys av temperaturpreferensbeteende och dess dygnsrytm i Drosophila

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a ...

Analysis of Nephron Composition and Function in the Adult Zebrafish Kidney

Analys av Nephron sammansättning och funktion i vuxen Zebrafish Kidney

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys ...

Sequential Application of Glass Coverslips to Assess the Compressive Stiffness of the Mouse Lens: Strain and Morphometric Analyses

Sekventiell Tillämpning av täckglas för att bedöma Tryck styvhet av Mouse Lens: Strain och Morfometriska Analyser

The eye lens is a transparent organ that refracts and focuses light to form a clear image on the retina. In humans, ciliary muscles contract to deform the ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Högupplöst time-lapse avbildning och automatiserad analys av mikrotubuli Dynamics i Living Human navelsträngsvenendotelceller

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...