Name: measuring plant cell wall extension (creep) induced by acidic ph and by alpha-expansin
Uploaded: 2009-03-11T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Plant Cell Wall Extension Creep Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin at JoVE.com

De technieken die hier getoond werden ontwikkeld met financiering door subsidies van het Ministerie van Energie (Bioenergy Wetenschappen) en de National Science Foundation.

Deel 1: Groeien en opslaan van geschikt plantmateriaal <ol><li> In onze ervaring, jonge hypocotylen uit geëtioleerde komkommer zaailingen dienen als een handige bron van de celwand materiaal voor deze experimenten. Komkommer zaden worden gezaaid op nat papier in een lichtdichte doos, die in een donkere kast te houden in een constante temperatuur ruimte ingesteld op 26 ° C. De exacte temperatuur is niet kritisch, als iets tussen 22 ° en 30 ° C moet fijn, maar de temperatuur zal bepalen hoe snel de zaailingen een ju...

<ol>
	<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+long-term+extension+of+isolated+cell+walls+from+growing+cucumber+hypocotyls.">Characterization of long-term extension of isolated cell walls from growing cucumber hypocotyls.</a> Planta. 177, 121-130 (1989).</li><li>Rayle, D. L., Cleland, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Acid+Growth+Theory+of+auxin-induced+cell+elongation+is+alive+and+well.">The Acid Growth Theory of auxin-induced cell elongation is alive and well.</a> Plant Physiol. 99, 1271-1274 (1992).</li><li>Cleland, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Auxin-induced+growth+of+Avena+coleoptiles+involves+two+mechanisms+with+different+pH+optima.">Auxin-induced growth of Avena coleoptiles involves two mechanisms with different pH optima.</a> Plant Physiol. 99, 1556-1561 (1992).</li><li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loosening+of+plant+cell+walls+by+expansins.">Loosening of plant cell walls by expansins.</a> Nature. 407, 321-326 (2000).</li><li>McQueen-Mason, S., Durachko, D. M., Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+endogenous+proteins+that+induce+cell+wall+expansion+in+plants.">Two endogenous proteins that induce cell wall expansion in plants.</a> Plant Cell. 4, 1425-1433 (1992).</li></ol>

Voor deze demonstratie hebben we celwanden gebruikt van komkommer hypocotylen, omdat ze hebben bewezen een betrouwbare bron van wand-monsters die zijn gemakkelijk te hanteren en die reageren met een goede gevoeligheid. We hebben ook een goede succes met muren van andere zaailingen evenals sommige materialen uit de supermarkt, zoals jonge spinazie bladeren en stengels bleekselderij. Kortom, jong, zacht, snel groeiende plant weefsels die waarschijnlijk gemakkelijk gemeten worden met deze techniek, maar taaie, oude, geoxid...

measuring plant cell wall extension (creep) induced by acidic ph and by alpha-expansin

Groeiende plant celwanden karakteristiek vertonen een eigenschap bekend als &#39;zuur groei&#39;, waarmee we bedoelen ze meer uitbreidbaar bij lage pH (&lt;5) 1. Het plantenhormoon auxine stimuleert snel celelongatie in jonge stengels en dergelijke weefsels ten minste gedeeltelijk door een zuur-groei-mechanisme 2, 3. Auxine activeert een H + pomp in het plasmamembraan, waardoor verzuring van de celwand oplossing. Wand verzuring activeert expansins, die endogene celwand-losmaken eiwitten 4, waardoor de celwand te geven aan de muur spanningen gecreëerd door cel turgor druk. Als gevolg hiervan, de cel snel begint te vergroten. Deze &#39;zuur groei&#39; fenomeen is gemakkelijk gemeten in geïsoleerde (niet-levende) celwand exemplaren. Het vermogen van celwanden te zuur-geïnduceerde uitbreiding ondergaan, is niet simpelweg het gevolg van de structurele regeling van de celwand polysacchariden (bijvoorbeeld pectine), maar hangt af van de activiteit van expansins 5. Expansins hebben geen bekend enzymatische activiteit en de enige manier om test voor expansin activiteit bestaat uit het meten hun inductie van celwand extensie. Deze video rapport beschrijft de bronnen en de voorbereiding van technieken voor het verkrijgen van geschikte materialen voor wand-expansin assays en gaat verder om aan te tonen zuur-geïnduceerde uitbreiding en expansin-geïnduceerde verlenging van de muur monsters bereid uit groeiende komkommer hypocotylen. Voor het verkrijgen van geschikte celwand monsters, komkommer zaailingen worden geteeld in het donker, de hypocotylen worden gesneden en ingevroren bij -80 ° C. Frozen hypocotylen zijn afgesleten, afgeplat, en vervolgens geklemd bij een constante spanning in een speciale cuvet voor extensometer metingen. Voor het meten van zuur-geïnduceerde uitbreiding, zijn de muren in eerste instantie gebufferd bij een neutrale pH, wat resulteert in lage activiteit van expansins die zijn componenten van de inheemse celwanden. Bij buffer te wisselen om zure pH, zijn expansins geactiveerd en de celwanden te breiden snel. We hebben ook laten zien expansin activiteit in een reconstitutie test. Voor dit gedeelte maken we gebruik van een korte warmtebehandeling om de inheemse expansins in de celwand monsters denatureren. Deze geïnactiveerd celwanden zelfs niet uit te breiden in zure buffer, maar de toevoeging van expansins om de celwanden snel herstelt hun vermogen om uit te breiden.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Plant Cell Wall Extension Creep Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin at JoVE.com

Measuring Plant Cell Wall Extension Creep Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin

We demonstreren het gebruik van een constante kracht extensometer op lange termijn uitbreiding (kruip) van plantaardige celwand exemplaren veroorzaakt door zure buffers en expansin eiwitten te meten.

Het meten van Plant Cell muur Extension (Creep) geïnduceerd door zure pH en door Alpha-Expansin

Growing plant cell walls characteristically exhibit a property known as 'acid growth', by which we mean they are more extensible at low pH (&lt; 5) 1. The ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Plant Cell Wall Extension (Creep) Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin

Title Cell Encapsulation by Droplets

Titel Cell Encapsulation door Droplets

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

Virus-geïnduceerde gen silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana En Tomaat

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Identificatie van groeiremming fenotypes geïnduceerd door expressie van bacteriële type III Effector in gist

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

Agar-Block Microcosms for Controlled Plant Tissue Decomposition by Aerobic Fungi

Agar-Block microkosmos voor de gecontroleerde Plant Tissue Ontleding door Aerobic Fungi

The two principal methods for studying fungal biodegradation of lignocellulosic plant tissues were developed for wood preservative testing (soil-block; ...

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Gieten en runnen van een eiwitgel door hergebruik van Commercial Cassettes

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Glycan Profiling of Plant Cell Wall Polymers using Microarrays

Glycaan Profilering van Plant celwandpolymeren met behulp van Microarrays

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the ...

Isolation of Native Soil Microorganisms with Potential for Breaking Down Biodegradable Plastic Mulch Films Used in Agriculture

Isolatie van de Native Soil Micro-organismen met Potentieel voor Breaking Down Biologisch afbreekbaar plastic mulch films gebruikt in de landbouw

Fungi native to agricultural soils that colonized commercially available biodegradable mulch (BDM) films were isolated and assessed for potential to ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Fecale Glucocorticoïd Analyse: Niet-invasieve bijnier Toezicht op Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

High Resolution Quantification of Crystalline Cellulose Accumulation in Arabidopsis Roots to Monitor Tissue-specific Cell Wall Modifications

High Resolution Quantification of Crystalline Cellulose Accumulation in Arabidopsis Roots to Monitor Tissue-specific Cell Wall Modifications

Hoge resolutie Kwantificering van kristallijne cellulose accumulatie in<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Roots aan Tissue-specifieke celwand Wijzigingen Monitor

Plant cells are surrounded by a cell wall, the composition of which determines their final size and shape. The cell wall is composed of a complex matrix ...