Name: measuring plant cell wall extension (creep) induced by acidic ph and by alpha-expansin
Uploaded: 2009-03-11T00:00:00
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Die hier gezeigten Techniken wurden mit Förderung durch Zuschüsse aus dem Department of Energy (Bioenergy Sciences) und der National Science Foundation entwickelt.

Teil 1: Anbau und Lagerung geeignet Pflanzenmaterial <ol><li> Nach unserer Erfahrung dienen junge Hypokotylen aus etiolierten Gurkenkeimlingen als eine bequeme Quelle für Zellwandmaterial für diese Experimente. Gurken Samen werden auf feuchtem Papier in einer lichtdichten Box, die in einem abgedunkelten Schrank in einem Raum mit konstanter Temperatur bei 26 gesetzt ist ° C zu halten gesät Die genaue Temperatur ist nicht entscheidend, wie alles, was zwischen 22 ° und 30 ° C sollte in Ordnung sein, aber die Temper...

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	<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+long-term+extension+of+isolated+cell+walls+from+growing+cucumber+hypocotyls.">Characterization of long-term extension of isolated cell walls from growing cucumber hypocotyls.</a> Planta. 177, 121-130 (1989).</li><li>Rayle, D. L., Cleland, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Acid+Growth+Theory+of+auxin-induced+cell+elongation+is+alive+and+well.">The Acid Growth Theory of auxin-induced cell elongation is alive and well.</a> Plant Physiol. 99, 1271-1274 (1992).</li><li>Cleland, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Auxin-induced+growth+of+Avena+coleoptiles+involves+two+mechanisms+with+different+pH+optima.">Auxin-induced growth of Avena coleoptiles involves two mechanisms with different pH optima.</a> Plant Physiol. 99, 1556-1561 (1992).</li><li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loosening+of+plant+cell+walls+by+expansins.">Loosening of plant cell walls by expansins.</a> Nature. 407, 321-326 (2000).</li><li>McQueen-Mason, S., Durachko, D. M., Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+endogenous+proteins+that+induce+cell+wall+expansion+in+plants.">Two endogenous proteins that induce cell wall expansion in plants.</a> Plant Cell. 4, 1425-1433 (1992).</li></ol>

Für diese Demonstration verwendeten wir Zellwände von Gurken Hypokotylen, weil sie sich als eine zuverlässige Quelle für Wand-Proben, die leicht zu handhaben und mit guter Empfindlichkeit reagieren werden müssen. Wir haben auch schon gute Erfolge mit Wänden aus anderen Keimlingen sowie einige Materialien aus dem Supermarkt, wie junge Spinatblätter und Stangensellerie. Grundsätzlich sind jung, weich, schnell wachsende Pflanzengewebe wahrscheinlich leicht mit dieser Technik gemessen werden, sondern harte, alte, ox...

measuring plant cell wall extension (creep) induced by acidic ph and by alpha-expansin

Wachsende pflanzlichen Zellwände charakteristisch weisen eine Eigenschaft als &quot;Säure Wachstum&quot;, mit denen wir meinen, sie sind mehr erweiterbare bei niedrigen pH-Wert (&lt;5) 1 bekannt. Das Pflanzenhormon Auxin schnell stimuliert Zellstreckung in jungen Stängel und ähnliche Gewebe zumindest teilweise durch eine Säure-Wachstums-Mechanismus 2, 3. Auxin aktiviert eine H +-Pumpe in der Plasmamembran, Versauerung der Zellwand Lösung. Wand Versauerung aktiviert expansins, die endogene Zellwand-Lockerung Proteine ​​4 sind, wodurch die Zellwand an der Wand Spannungen, die durch Zelle Turgor erstellt Ertrag. Als Folge beginnt die Zelle rasch vergrößern. Diese &quot;acid Wachstum&quot; Phänomen ist leicht in isolierten (unbelebten) Zellwand Proben gemessen. Die Fähigkeit der Zellwände zu Säure-induzierte Erweiterung unterzogen wird nicht einfach das Ergebnis der strukturellen Anordnung der Zellwand-Polysaccharide (zB Pektine), sondern hängt von der Aktivität der expansins 5. Expansins haben noch keine bekannten enzymatischen Aktivität und der einzige Weg, um Assay für expansin Aktivität ist es, ihre Induktion von Zellwand-Erweiterung zu messen. Dieses Video Bericht beschreibt ausführlich die Quellen und die Vorbereitung Techniken zur Gewinnung von geeigneten Wandmaterialien für expansin Assays und fährt fort, Säure-induzierte Verlängerung und expansin-induzierte Verlängerung der Wand Proben aus wachsenden Gurke Hypokotylen vorbereitet zu zeigen. Um geeignete Zellwand Proben, Gurkenkeimlingen im Dunkeln gezüchtet werden, die Hypokotyle geschnitten und bei -80 ° C eingefroren Gefrorene Hypokotylen abgetragen, abgeflacht, und dann bei konstanter Spannung in eine spezielle Küvette für Extensometer Messungen gespannt. Zur Messung säureinduzierte Erweiterung, die Wände sind zunächst im neutralen pH-gepuffert, so dass eine niedrige Aktivität der expansins, dass Komponenten des nativen Zellwände. Nach Puffer Austausch zu sauren pH-Wert, sind expansins aktiviert und die Zellwände zu verlängern schnell. Wir zeigen auch expansin Aktivität in einer Rekonstitution Assay. Für diesen Teil verwenden wir eine kurze Wärmebehandlung auf die native expansins in der Zellwand Proben zu denaturieren. Diese inaktivierten Zellwände nicht einmal verlängern in sauren Puffer, sondern zusätzlich von expansins die Zellwände schnell wieder ihre Fähigkeit, zu verlängern.

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Measuring Plant Cell Wall Extension Creep Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin

Wir zeigen die Verwendung eines konstanten Kraft Extensometer zur langfristigen Erweiterung (Kriechen) der pflanzlichen Zellwand Proben von sauren Puffern und expansin Protein induziert messen.

Messen pflanzlichen Zellwand Extension (Creep) durch saure pH-Wert und von Alpha-Expansin Induced

Growing plant cell walls characteristically exhibit a property known as 'acid growth', by which we mean they are more extensible at low pH (&lt; 5) 1. The ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Plant Cell Wall Extension (Creep) Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin

Title Cell Encapsulation by Droplets

Titel der Verkapselung von Zellen durch Tröpfchen

Forschung

Biologie

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

Virus-induzierten Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana Und Tomaten

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Identification of Growth Inhibition Phänotypen durch Expression von bakteriellen Typ III Effektoren in Hefe Induced

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

Agar-Block Microcosms for Controlled Plant Tissue Decomposition by Aerobic Fungi

Agar-Block Mikrokosmen für Controlled Pflanzengewebekultur Zersetzung durch aerobe Pilze

The two principal methods for studying fungal biodegradation of lignocellulosic plant tissues were developed for wood preservative testing (soil-block; ...

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Gießen und Ausführen eines Protein-Gel durch die Wiederverwendung von Gewerbe-Kassetten

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Glycan Profiling of Plant Cell Wall Polymers using Microarrays

Glycan Profiling of Plant Cell Wall Polymers mit Microarrays

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the ...

Isolation of Native Soil Microorganisms with Potential for Breaking Down Biodegradable Plastic Mulch Films Used in Agriculture

Isolation der Native Soil Mikroorganismen mit Potenzial für den Abbau von biologisch abbaubaren Kunststoff Mulch Films in der Landwirtschaft eingesetzt

Fungi native to agricultural soils that colonized commercially available biodegradable mulch (BDM) films were isolated and assessed for potential to ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In-vivo-4-Dimensional-Tracking von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen im erwachsenen Maus Schädeldachknochenmark

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Fecal Glucocorticoid-Analyse: Nicht-invasive Monitoring-Adrenal in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

High Resolution Quantification of Crystalline Cellulose Accumulation in Arabidopsis Roots to Monitor Tissue-specific Cell Wall Modifications

High Resolution Quantification of Crystalline Cellulose Accumulation in Arabidopsis Roots to Monitor Tissue-specific Cell Wall Modifications

Hohe Auflösung Quantifizierung kristalliner Cellulose Akkumulation in<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Roots Gewebespezifische Zellwand Änderungen überwachen

Plant cells are surrounded by a cell wall, the composition of which determines their final size and shape. The cell wall is composed of a complex matrix ...