Name: mouse mammary epithelial cells form mammospheres during lactogenic differentiation
Uploaded: 2009-10-06T16:30:00
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<p class="jove_content"> Diretto da fondi dal Congresso per la ricerca medica del Fondo di finanziamento (DAMD17-01-0264) di ML Cutler e United States Military Cancer Institute di ML Cutler sostenuto il lavoro. </p>

<ol><li> Il HC11 cellule sono state coltivate a confluenza per 6 giorni in RPMI 1640 medium supplementato con 10% di siero di vitello fetale, insulina 5μg/ml, 10 HEPES mM, 10ng/ml fattore di crescita epidermico (EGF) per stabilire la competenza. </li><li> Le cellule sono state lavate con PBS e mantenuti in terreni di coltura senza FEG per 24 ore. </li><li> Per indurre la differenziazione lattogenica le cellule sono state incubate nei media differenziazione, cioè RPMI con desametasone (10 <sup>-6</sup> M), l&#39;insulina (5 mg / ml) e prolatti...

<ol>
	<li>Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vectorial+secretion+by+constitutive+and+regulated+secretory+pathways+in+mammary+epithelial+cells.">Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells.</a> <em style='font-style: italic'>Epithelial Cell Biol</em>. <b>4</b>, 8-16 (1995).</li><li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoid+induced+expression+of+connective+tissue+growth+factor+contributes+to+lactogenic+differentiation+of+mouse+mammary+epithelial+cells.">Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells.</a> <em style='font-style: italic'>J Cell Physiol</em>. <b>214</b>, 38-46 (2008).</li></ol>

<p class="jove_content"> Affinché questa tecnica per avere successo e di ottima qualità, le cellule epiteliali deve essere mantenuta a confluenza prima di essere indotto con gli ormoni lattogenica. Ci possono essere situazioni in cui ci sono mammospheres numerosi, il che rende difficile la quantificazione. Così, ai fini quantitativa è meglio fotografare la mammospheres in un punto momento in cui il numero di mammospheres è in grado di essere contati. </p><p class="jove_content"> Mentre ci sono diversi marcatori molecolari per determinare i...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>21870076</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Atlanta Biologicals</td>
<td>S11550</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PenStrep</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hepes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Quality Biologicals</td>
<td>118089060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EGF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>E9644</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insulin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>12585-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dexamethasone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D1756</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>IX71</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital Camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>QImaging</td>
<td>Retiga 2000RV Fast 1394</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

mouse mammary epithelial cells form mammospheres during lactogenic differentiation

<p class="jove_content">Una misura fenotipica comunemente usato per determinare il grado di differenziazione lattogenica nel topo colture di cellule epiteliali mammarie è la formazione di strutture cellulari a forma di cupola denominata mammospheres<sup&gt; 1</sup&gt;. Il HC11 linea cellulare è stata utilizzata come sistema modello per lo studio della regolazione della differenziazione mammaria lattogenica sia<em&gt; In vitro</em&gt; E<em&gt; In vivo</em<sup&gt; 2</sup&gt;. Il HC11 cellule si differenziano e sintetizzare proteine ​​del latte in risposta al trattamento con ormoni lattogenica. In seguito la crescita di HC11 topo cellule epiteliali mammarie di confluenza, differenziazione lattogenica è stata indotta con l&#39;aggiunta di una combinazione di ormoni lattogenica tra desametasone, insulina e prolattina, di cui il DIP. Il HC11 cellule indotte a differenziare sono stati fotografati a volte fino a 120 ore dopo l&#39;induzione della differenziazione e del numero di mammospheres che è apparso in ogni cultura era enumerato. Le dimensioni del mammospheres individuale si correla con il grado di differenziazione e questo è raffigurato nelle immagini delle cellule differenziazione.</p>

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Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

<p class="jove_content">HC11 differenziazione lattogenica può essere caratterizzata dalla formazione di strutture a cupola denominata mammospheres. Le strutture possono essere elencati mediante microscopia a contrasto di fase per aiutare a quantificare la differenziazione lattogenica.</p>

Topo cellule epiteliali mammarie forma Mammospheres durante la differenziazione lattogenica

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

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